乙肝HBV-LP--2.ppt

1、,乙肝病毒大蛋白（HBV-LP） -新的血清学肝病标志物 北京热景生物,2,全球约有20亿人曾感染过乙肝 其中3.5亿人为慢性HBV感染者 每年约有100万人死于HBV感染所致得肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。,乙型肝炎流行状况,我国HBV感染情况,我国是乙型肝炎高发区，约1.3亿人是HBsAg（乙肝表面抗原）携带者，肝炎患者加起来超过4000万，其中60为慢性HBV感染患者，每年因此病死亡的人有近50万。,4,血清标志物检测,经典乙肝“两对半” 乙肝表面抗原(HBsAg) 乙肝表面抗体（抗HBs） 乙肝e抗原（HBeAg） 乙肝e抗体（抗HBe） 乙肝核心抗体（抗HBc、抗HBcIgM）,乙

2、肝病毒前S1、S2抗原及抗体 乙肝病毒大蛋白,中国乙型肝炎流行现状,HBeAg阴性活动期肝炎增多,HBV变异株增加HBV的突变率较高,HBeAg阴性活动期肝炎,诊断现状： (1) 传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制程度； (2) 缺乏指导合理治疗的指标； (3) HBV DNA检测不易于各级医疗机构广泛开展；,乙肝病毒实验室检测的缺陷,抗病毒治疗效果评价,何时停用抗病毒药物,停药后是否会重新复制活跃,乙肝病毒颗粒三种形式： Dane颗粒； 管状病毒颗粒； 球型颗粒。,HBV-LP存在于Dane颗粒及管状颗粒，仅在病毒复制时才能在血流中检测到HBV-LP的分布 。,根据检测血液中大蛋白

3、的有无，判断病毒携带者体内的HBV病毒是否在进行复制。,乙肝病毒大蛋白,1995年 发现大蛋白具有拓扑结构 1996年 发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用 1997年 发现大蛋白前S区对乙肝病毒粒子的形成具有重要作用 2002年 发现导致肝细胞液泡化及凋亡的主要原因是大蛋白（致病性蛋白） 2003年 Nature发表文章总结其反式激活机理 2007年 Hepatology 发表文章 乙肝病毒感染起始于大蛋白依赖性的结合于硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 2008年 Nature发表文章 乙肝病毒大蛋白的酰化多肽可在体内抑制HBV感染 2009年 Antiviral Therapy发表文章 乙型肝炎病毒大

4、蛋白：一种新的抗病毒治疗血清学预测指标 2009年 乙肝病毒大蛋白首个跨膜结构域对病毒感染至关重要,乙肝病毒大蛋白机理研究历程,HBV大蛋白的结构域和穿膜拓扑结构：,Carsten Lambert, Sylvia Mann and Reinhild Prange. Assessment of determinants affecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins. Journal of General Virology (2004), 85, 12211225,乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究,乙肝病毒

5、大蛋白preS特性: 暴露在病毒颗粒表面 高免疫原性 参与了病毒与细胞受体的相互作用 诱导抗感染的保护性抗体的产生,1.Bruns M,Miska S,Chassot S,Will H. Enhancement of hepatitis B Virus infection by noninfections subviral particles.J Virol ,1998;76 ;1462-8.,外膜大蛋白是一个病毒反式激活因子 乙肝鸭模型证实由大蛋白组装成的亚病毒颗粒能够反式激活病毒继续复制 这个研究具有临床意义,对于大蛋白阳性而DNA阴性患者容易停药反跳具有参考意义.,亚病毒颗粒上pre-S

6、的反式激活作用,大蛋白结合细胞区,大蛋白的反式激活作用区既不是中蛋白的preS2区，也不是preS1区，而是位于大蛋白上具有特殊拓扑结构的preS2区,Integrity of c-raf-1/MEK signal transduction cascade is essential for hepatitis B virus gene expression , Nature Oncogene 2003 , 22 ：2604-2610,乙肝蛋白中的反式激活因子,乙肝病毒大蛋白 HBx蛋白 X蛋白在血液中含量非常低，无法检测 大蛋白是唯一可在血液中检测出的病毒激活因子,Integrity of c

7、-raf-1/MEK signal transduction cascade is essential for hepatitis B virus gene expression , Nature Oncogene 2003 , 22 ：2604-2610,HBV-LP,乙肝病毒大蛋白的细胞毒性,1、糖基化及强疏水序列对肝细胞代谢影响 2、过量乙肝病毒大蛋白在肝细胞内积聚，是导致内质网应激的关键因素，血液中乙型肝炎病毒大蛋白残留与病情反复密切相关。,Zhichang Xu et al. Activation of Hepatitis B Virus S promoter by the Vira

8、l Large. Journal of Virology,1997,10:7387-7392 Bruns M et al. Enhancement of Hepatitis B Virus Infection by Noninfectious Subviral Particles.Journal of Virology,1998,72(2):1462-1468. 骆抗先。乙型肝炎基础和临床M。2版。北京：人民卫生出版社，2001：45,乙型肝炎病毒大蛋白的临床意义,一、e抗原血清转化或变异后的病毒复制指标,HBV-LP与肝内病毒复制水平一致，是国家食品药品监督管理局（SFDA）唯一批准的用于e

9、抗原检测的补充指标。,魏红山等。e抗原阴性慢性乙型肝炎血清表面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒DNA之间的关系。中华肝脏病杂志，2006，14（7）：543-544,稍晚于血液中DNA的消退而早于HBsAg转阴,乙肝大蛋白以及乙肝标志物消减曲线,HBeAg,HBV DNA,大蛋白,HBsAg,乙肝病毒大蛋白抗病毒治疗效果可靠的评价指标,抗病毒治疗过程中病毒颗粒消退顺序,Dane 最先消失,管状颗粒其次消失,球形颗粒最后消失,DNA 阳性，大蛋白阳性,DNA阴性，大蛋白阳性,DNA阴性，大蛋白阴性,HBV-LP可以作为一个评估抗病毒治疗效果以及判定治疗终点的辅助指标之一：大蛋白与肝内cccDNA密切

10、相关，能反式激活病毒复制，因此，如果外周血HBV DNA转阴，大蛋白持续阳性，提示应该继续治疗；如果其完全消退提示抗病毒治疗较为彻底。HBV-LP能够合理的指导患者的用药，避免过早停药导致的病情反复,二、疗效监测和预后反映,Foo等7证明HBV-LP是导致肝细胞损伤 、死亡和纤维化病变的主要原因。因此检测HBV-LP对疗效监测和反映预后具有重要的临床意义。,Foo NC, A h n B Y，M a X C e l l u l a r v a c u o l i z a t i o n a n d a p op t o s i s I n d u c e d b y h e p a t i t

11、 i s B v i r us l a r g e s u r f a c e p r o t e i n J H e p a t o l o g y ， 2 0 0 2 ， 3 6 ( 6 ) ：1 4 0 0 - 1 4 0 7 ,应答明显组,反跳组,应答不明显组,治疗前：患者血清中存在高滴度大蛋白预示抗病毒治疗效果不佳,图 B：治疗前LHBs含量低于临界值的患者治疗过程中LHBs和HBV DNA变化趋势,图 I：治疗前LHBs含量高于临界值的患者治疗过程中LHBs和HBV DNA变化趋势,Xiao Fan et al. Serum levels of surface large enve

12、lope proteins:prognostic markers for hepatitis B e antigen-negative patients with adefovir dipivoxil treatment. Antiviral Therapy,2009,14(8):1149-1156,综合：核苷类抗病毒治疗效果观察-有效组,核苷类抗病毒治疗效果观察-无效组,抗病毒治疗无效：HBV-DNA和HBV-LP都始终没有出现阴转，而且HBV-LP吸光密度均在较高水平,核苷类抗病毒治疗效果观察-先有效后反弹组,小结,乙肝大蛋白优势,1、血清中LHBs含量与DNA拷贝数具有较好的相关性，且能反式激活病毒复制，能够反映乙肝的复制情况。,孙颖,辛绍杰,雷厉,侯俊,貌盼勇.乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义.世界华人消化杂志 2006;14(3):354-357,乙肝大蛋白优势,2、检测效果优于Pre-S1和Pre-S2（立体拓扑构象）,适于各级医疗机构开展,孙颖,辛绍杰,雷厉,侯俊,貌盼勇.乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义.世界华人消化杂志 2006;14(3):354-357,乙肝病毒复制与大蛋白组合模式表,体检加查本指标可以判断个体是否有感染