微生物基础知识及检测技术培训班讲义.ppt

1、微生物培训讲义,李 磊,第一部分：基础理论,一、食品中微生物的来源,1.食品中微生物的八个主要来源： 土壤、水大肠杆菌、李斯特菌、弧菌、梭状芽孢杆菌等 植物产品不动杆菌、柠檬杆菌、肠杆菌、李斯特菌等 器皿用具芽孢杆菌、肠杆菌、肠球菌、嗜冷杆菌等 动物肠道弯曲杆菌、肠杆菌、埃希氏菌、沙门氏菌等 生产者金葡菌、欧文氏菌、微球菌、李斯特菌等 畜及畜代谢物梭状芽孢杆菌、乳球菌、明串珠菌等 尘埃产碱菌、芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、类芽孢杆菌等,果蔬加工中有害微生物的污染源： 1. 原料 由于原料在收获贮藏和加工场所经常暴露于许多不卫生的环境中 因此很有可能受到外部污染 。 2. 污垢污染 影响微生物数量的因

2、素有风力、 湿度、日光、温度以及饲养和野生的动物、灌溉用水、鸟兽粪、收割设备、工人等。 3.空气污染 4.害虫污染 果蔬在生长过程中遭受到害虫的伤害部分易受到腐败菌和致病菌侵袭；部分传媒生物蜜蜂、蝴蝶、鸟类等携带的病菌也容易在害虫伤害部分生长。 5.加工过程：分为人为原因和非人为原因 6.贮藏和货架污染：贮藏的方式、温度湿度要求、外界环境、包装等,二、影响微生物生长的内在和外在因素,a) PH值： 酸性具有很强的抑菌作用，当PH2时多数微生物都不能生长;当PH4.2时微生物可被抑制生长。大多数微生物生长的最适PH值是6.67.5,也有少数微生物在PH4.0以下也能够生长。常见的微生物及其生长的

3、PH范围如图,PH值对微生物生长的负面影响至少二方面： 酶的作用 细胞营养物质的输送 其他环境因素也可与PH相互影响，如 温度 盐度 b) 含水量 微生物对水分的要求通常用水分活度（Aw）来表示，水分活度是指食品中水的蒸气压和同温度下纯水的饱和蒸气压的比值-Aw=P/P0。纯水时Aw=1,完全无水时，Aw0,食品中结合水含量越高，水分活度就越低。,主要微生物生长的最低水分活度（Aw）,c) 温度 一方面随着温度的上升，细胞中的生物化学反应速率和生长速率加快。 在一般情况下，温度每升高10，生化反应速率增加一倍；另一方面，机体的重要组成如蛋白质、核酸等对温度都较敏感，随着温度的增高而可能遭受不可

4、逆的破坏。因此，只有在一定范围内，机体的代谢活动与生长繁殖才随着温度的上升而增加，当温度上升到一定程度，开始对机体产生不利影响，如再继续升高，则细胞功能急剧下降以至死亡。 根据微生物对温度要求的不同，微生物可分为嗜冷微生物（最适生长温度在2030之间），嗜温微生物（最适生长温度在3040之间），而在45或以上能够生长，最适温度在5565之间的微生物称为嗜热微生物。,根据微生物的生长特性，在食品加工过程中，我们可用高温杀灭微生物或采用低温方式来抑制微生物，对易腐食品而言，操作间的温度要控制在14以下，长时间存放半成品、成品的库温控制在04之间，冷藏温度一般在-2-15之间，冻藏温度在-18-21

5、之间。,d) 环境中的气体及其浓度 在CO2浓度达到10%以上的气体中贮藏食品称为“可控气体”贮藏或气调（MA）贮藏 。 CO2的抑菌作用也与温度有关，抑制能力的大小随温度的降低而增加。 革兰氏阴性菌要比革兰氏阳性菌更加敏感，其中假单孢菌最为敏感，而乳酸菌和厌氧菌则最具抗性。 e) 微生物的一般干涉（微生物的竞争性生长） 微生物的一般干涉是批在同一环境或栖息地中其他微生物对某种微生物产生的一般性的、非特异的抑制或破坏。干涉菌通常是不同源微生物引起的，常见的干涉现象有乳酸拮抗作用、杀细菌素、PH抑制、有机酸、过氧化氢、双乙酰抑制作用等。,15条件下熟制禽肉中啤酒足球菌与胚芽乳杆菌对金黄色葡萄球菌

6、的抑制作用,C纯培养，P-与啤酒足球菌共同培养，L-与胚芽乳杆菌共同培养，M-混合培养,干涉作用的机理主要有1、对营养物的竞争;2、吸附或附着点位的竞争;3、提供不良环境;4、上述几个因素的加成。,三、 微生物的营养要素,微生物生长所需要的元素主要以相应的有机物与无机物的形式提供的，也有小部分可以由分子态的气体物质提供。营养物质按照它们在机体中的生理作用不同，可以将它们区分成碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水。 1.碳源 在微生物生长过程中能为微生物提供碳素来源的物质称为碳源。碳源物质在细胞内经过一系列复杂的化学变化后成为微生物自身的细胞物质（如糖类、脂类、蛋白质等）和代谢产物，碳可占一般

7、细菌细胞干重的一半。同时绝大部分碳源物质在细胞内生化反应过程中还能为机体提供维持生命活动所需的能源，因此碳源物质通常也是能源物质。,微生物利用碳源物质具有选择性，糖类是一般微生物较容易利用的良好碳源和能源物质，但不同微生物对不同糖类物质的利用有其选择性。 微生物利用的碳源物质主要有糖类、有机酸、醇、脂类、烃、CO2及碳酸盐等。 2.氮源-凡是能被用来构成菌体物质中或代谢产物中氮素来源的营养物质称为氮源。 氮对微生物的生长发育有重要的作用，它们主要用来合成细胞中的含氮物质，如蛋白质、核酸等。一般不作为能量。 能被微生物利用的氮源物质包括蛋白质及其不同程度的降解产物（胨、肽、氨基酸等）、铵盐、硝酸

8、盐、分子氮、嘌呤、嘧啶、脲、胺、酰胺、氰化物等。,3能源 能为微生物的生命活动提供最初能量来源营养物或辐射能。化能异养微生物的能源就是碳源。 所有真菌、放线菌和大部分细菌是化能异养型微生物。 化能自养微生物的能源主要是无机物，如细菌、硝化细菌、硫细菌、氢细菌等。光能自养和异养微生物的能源主要是太阳能，如蓝细菌、紫色非硫细菌等。 4生长因子：通常指那些微生物生长所必需而且需要量很小，但微生物自身不能合成的或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物。各种微生物需求的生长因子的种类和数量是不同的 。,生长因子分为维生素、氨基酸及和嘌呤及嘧啶碱基三大类。 5无机盐： 参加微生物中氨基酸和酶的组成。 调

9、节微生物的原生质胶体状态，维持细胞的渗透与平衡。 酶的激活剂。 根据微生物对矿质元素需要量大小可以把它分成大量元素和微量元素。大量元素：Na、K、Mg、Ca、S、P等。微量元素是指那些在微生物生长过程中起重要作用，而机体对这些元素的需要量极其微小的元素，通常需要量在10-6-10-8mol/L：锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。,微量元素一般参与酶的组成或使酶活化（见下表）,6水：起到溶剂与运输介质的作用，营养物质的吸收与代谢产物的分泌必须以水为介质才能完成；参与细胞内一系列化学反应；维持蛋白质、核酸等生物大分子稳定的天然构象；因为水的比热高，是热的良好导体，能有效地吸收代谢过程中

10、产生的热并及时地将热迅速散发出体外，大而有效地控制细胞内温度的变化；通过水合作用与脱水作用控制由多亚基组成的结构，如微管、鞭毛的组装与解离。,对数期,迟缓期,分为四期：迟缓期 、 对数期、稳定期、衰退期,细菌生长曲线,0,5,15,20,25,30,10,5.5,6.0,8.5,8.0,7.5,7.0,6.5,9.0,衰退期,总菌数,活菌数,细菌数的对数次,小时,稳定期,细菌生长繁殖的四个时期,四、培养基的分类：,1按成分不同划分 （1）天然培养基：常用的天然有机营养物质包括牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、豆芽汁、玉米粉、牛奶等。 （2）合成培养基：是人工添加化学成分完全了解的物质配制而成的培养基。

11、 2根据物理状态划分 （1）固体培养基 在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态即为固体培养基。培养基中的琼脂含量一般为1.5%-2.0%。 在实验室中，固体培养基一般加入平皿或试管中，制成培养微生物的平板或斜面。 固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏。,（2）半固体培养基 半固体培养基中凝固剂的含量少比固体培养基少，培养基中琼脂含量一般为0.2%-0.7%。半固体培养常用来观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定等。 （3）液体培养基 液体培养基常用于大规模工业生产及在实验室进行微生物增菌、生化、传代等。 3按用途划分 （1）基础培养基 尽管不同微生物的营

12、养需求不同，但大多数微生物所需的基本营养物质是相同的。基础培养基是含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。,（2）加富培养基 也称为营养培养基、富集培养基，即在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等。 （3）鉴别培养基 用于鉴别不同类型微生物的培养基。在培养基加入某种特殊化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这咱代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区别开来。 （4）选择培养基 用来将某种或某类微生物从混

13、杂的微生物群体中分离出来的培养基。根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。,五、微生物基础实验技术,（1）消毒与灭菌 消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。 灭菌方法： 一、物理的方法：加热、过滤、辐射 二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。,干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用

14、高温干燥空气（160170C）加热灭菌12h，适用于玻璃器皿和培养皿等。 灭菌原理：加热使蛋白质变性。灭菌效率与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。 注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）玻璃器皿不要与箱壁、箱底接触，以防暴裂； 3）物品不能太挤； 4）灭菌过程中不要开箱，灭菌结束后要等温度降 至70时再开箱门，防止器皿骤冷碎裂。,湿热法 ： 1.原理：湿热灭菌作用要强于干热灭菌，主要因为水分有利于蛋白质的凝固，水分越多，凝固蛋白质所需的温度越低。另外，湿热灭菌的穿透性比干热强，因为水的比热（1.0）比空气的比热（0.24）要大，还由于蒸气在凝结时是一个放热过

15、程，要增加额外的热量。所在灭菌效果好。 湿热灭菌的方式：1.煮沸法；2.间歇灭菌法；3.巴氏灭菌法；4.高压蒸气灭菌法；5.超高温杀菌（135-150C和2-8s对牛乳和其它液态食品） 。,高压蒸气灭菌法 适用范围：培养基、工作服、橡胶物品等、玻璃器皿。 注意的问题： 1.冷空气的排放要彻底,饱和蒸气压力与温度的对应关系,但如果冷空气只排除50%，0.105MPA时，温度只能升至112度，为保证冷空气的彻底排除，要求灭菌器的密封性要好、排气管道通畅、排气时间充分。,2.物品的包装要正确 灭菌物品的包装材料要具有良好的通透性，并可防止各种微生物的进入。可采用的包装材料有双层细棉布、牛皮纸等。也可

16、使用专门的容器。 3.灭菌物品的摆放要合理 灭菌物品间要留有间隙，空玻璃管要侧放或倒放。如有金属物品，要放置于底层。 灭菌对培养基成分的影响： a.pH值普遍下降。 b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca2与PO43-化合，就会产生磷酸钙沉淀。 c.不少培养基颜色加深。 d.体积和浓度有所变化。 e.营养成分有时受到破坏。部分添加物质（如受热易分解的抗生素）不能采用这种方法。,高压蒸汽灭菌效果的监测（一般性了解） 生物法：（GB159811995） 菌株选择：选用耐热的非致病性细菌芽胞作指示菌。一般选用嗜热脂肪杆菌，本菌芽胞对热的抗力较强，其热死亡时间与

17、病原微生物中抗力最强的肉毒杆菌芽胞相似。 检测时应使用标准试验包，每个包中心部位置生物指示剂2个，放在灭菌柜室的5个点，即上、中层的中央各一个点，下层的前、中、后各一个点。灭菌后，取出生物指示剂，接种于溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，置5560温箱中培养48小时至7天，观察最终结果。若培养后颜色未变，澄清透明，说明芽胞已被杀灭。达到了灭菌要求。若变为黄色混浊，说芽胞未被杀灭，灭菌失败。 化学法：灭菌指导胶带、化学指示剂等。,（2）微生物的分离、纯化及培养技术 分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。 纯培养的目的：纯化菌落，使其有唯一正确的生化、血清反应。 方法：点

18、植、划线、倾注平板、涂布等,保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置4C冰箱中包藏。 保藏时间：霉菌、放线菌及芽孢菌保存24个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。 此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。 附加石蜡：附加石蜡可延长菌种保藏时间。将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。 霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏12年，普通细菌也可保藏1年左右。,1、传代培养法,（3）菌种保藏,2、载体法 使生

19、长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干燥。 常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。 3、悬液法 将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。 溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。 4、冷冻法 使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。包括低温法和液氮法。 5、真空干燥法 这类方法包括冷冻真空干燥法和L干燥法。 冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。 L-干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在1020C范围内进行真空干燥。,（4）染色：1、革兰氏复染色法 所用试剂：结晶紫、乙醇脱色剂、碘液媒染剂、沙黄（蕃红花红） 原理：细菌

20、基于细胞壁多糖结构的不同吸附电荷的能力不同。 步骤：固定结晶紫(60S)碘液媒染（60S）乙醇脱色（30S）沙黄复染（60S）镜检,2、芽孢染色： 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。通常可用孔雀绿或碱性品红对菌体和芽孢进行染色。水洗使菌体脱色，再用复染液沙黄等进行菌体着色。,3、荚膜染色 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。,1.一般质量检查 生产厂必

21、须提供的文件： 培养基名称、各种成分名称和增补剂名称以及产品编号； 培养基使用前的pH； 储藏条件和有效期； 所有性能评价和所用的测试菌种； 技术数据清单； 质控证书； 必要的安全及危害数据。 2.实验室检查项目： 培养基的名称和批号； 接收日期； 有效期； 包装的情况和完整性 验收记录应包括上述信息。,（5）培养基的验收与制备,3.培养基的使用前应进行的实验室测试： 包括：PH值、色泽、透明度、杂质、稳定性、湿度。 根据培养基批号的不同，同批培养基还要进行相应的菌株测试，测试菌株必须是来自标准菌种保藏中心或其认可的机构如(ATCC)等提供的标准测试菌株，菌株必须在其活性有效期限内，最好采用非

22、特异性菌株以保证生化反应的正常进行。如有必要或条件许可，可同时接种一两种干扰菌株作空白对照。测试菌株在所用培养基上至少可分离出一株活菌。不能分离出活性菌株或分离过程中产生其它非正常菌株的培养基视为不合格产品。 培养基验收记录,例子：以EMB平板验收为例,此培养基呈紫色，可有细微沉淀。接种质控菌株后，35培养1824小时，观察结果应如下表所示：,4、培养基的制备记录 培养基在每次时要保有记录，记录内容包括： 培养基名称 批号及其来源 最终pH值 消毒的温度和 制备时间、日期 制备者 记录应随制好的培养基一同存放,5、培养基的异常现象和可能原因 培养基不能凝固： 制备过程中过度加热 低pH值造成培

23、养基发生酸水解 称量不正确 琼脂未完全溶解 培养基成分未充分混匀 pH值不正确： 制备过程中过度加热 水质不佳 外部化学物质污染 测Ph值时温度不正确 pH计未正确校准,颜色异常： 制备过程中加热过度 水质不佳 脱水培养基质量差 外部化学物质污染 pH不正确 产生沉淀： 制备过程中过度加热 水质不佳 脱水培养基质量差 pH值未正确控制 培养基出现抑制/重复性差： 制备过程中过度加热 水质不佳 脱水培养基质量差 使用成分不正确，如成分称量不准、添加物浓度不 正确,选择性差： 制备过程中过度加热 配方使用不对 脱水培养基质量差 添加成分不正确，如加入成分时培养基过热或错误的添加浓度。,第二部分：检

24、测标准,一、细菌总数,1.细菌总数测定的注意事项 1）细菌总数反映的3035度有氧条件下培养的细菌。一些特殊要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、非嗜中温菌等，均难以反映出来。实验中可能出现某项菌如单增李氏菌计数多于细菌总数的现象。 2）蔓延菌落的判断 3）鉴于细菌细胞以单个、双个、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因此在平板上出现的菌落可能来源于单个细菌也可能来自细菌菌群，故细菌总数的单位通常以CFU加重量单位来表示。 4）细菌总数应做空白对照。空白样品板暴露时间应与样品板暴露时间相同。空白板可采用稀释液+琼脂35度培养也可采用样品液+琼脂4度放置不培养对照法,细菌形态,细菌形态,琼脂平板上菌群的形态,

25、蜡样芽孢杆菌菌落,枯草芽孢杆菌菌落,二、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌,1.什么是大肠菌群： 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等 。 大肠菌群与其它肠杆菌、肠球菌的生活环境类似，因此它是检验粪便污染的指标菌。,粪便污染指标菌的要求 1.特异性：即是人与动物肠道的特有菌。 2.对环境耐受力强，对营养要求不高。 3

26、.繁殖周期短，可以在短时期内大量培养。 4.检测方法可靠。 5.检测成本及技术要求低。,指标菌,2、大肠杆菌 大肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的。 根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EIIEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。,大肠杆菌电镜图,大肠杆菌为革兰氏阴性短杆菌，大小0.513微米。周身有鞭毛，能运动，无芽孢。可发酵多种糖类产酸、产气。,大肠杆菌的抗原成分复杂，可分为 菌体抗原（O）： 化学成分多糖-磷脂-蛋白质复合物

27、。可在121耐受 2h。不被乙醇或0.1%石炭酸破坏。 每个菌株只含有一种O抗原，决定o型原特异性的是脂多糖中的多糖侧链部分，通常以1、2、3等阿拉伯数字表示。 例如：乙型副伤寒杆菌有4、5、12三个O抗原。鼠伤寒杆菌有1、4、5、12四个O抗原；猪霍乱杆菌有6、7二个O抗原。 根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为150多型，其中有16个血清型为致病性大肠杆菌，常引起流行性婴儿腹泄和成人肋膜炎。,鞭毛抗原（H） 鞭毛抗原的组成部分为蛋白质， 1个菌株仅有1种H抗原，不耐热，60加热15分钟或乙醇处理可破坏。加热至 80时出现蛋白变性反应。 具有鞭毛的细菌经甲醇液固定后，其o抗原全部被h抗原遮盖

28、，而不能与相应抗o抗体反应。 h抗原的特异性取决于多肽链上氨基酸的排列顺序和空间构型。 表面抗原（K） 即荚膜抗原；个别位于菌毛中。不耐热，后者有抗机体吞噬和抗补体的能力。 O不凝集性： 具有K抗原的菌株不会被其相应的抗O血清凝集,大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、苯磺酸钠 、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等 大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55经60分钟或60加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。 最适生长温度37,PH7.4-7.6，普通培养基上生长良好，菌落特征为圆形，直径23mm,凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色。某些菌株

29、有溶血现象。伊红美蓝平板上为蓝紫色，中国蓝琼脂为蓝色、SS琼脂上为红色。营养肉汤生长均匀。,SN0169大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌检测方法,样品液,LST增菌液，37,48h,BGLB, 37,48h,EC，44.5,产气,大肠菌群,粪大肠菌群,色 氨 酸,甲 基 红,V P,柠 檬 酸 盐,伊红美蓝平板,营养琼脂斜面,大肠杆菌,产气,伊红美蓝平板上的大肠杆菌,普通大肠杆菌与O157的荧光试验 O157不发酵山梨醇,细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧成乙酰甲基甲醇，在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称VP反应,VP试验,

30、肠杆菌属分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解后，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸、甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。,甲基红（Methyl Red）试验,靛基质（Imdole）试验,靛基质试验也称色氨酸或吲哚试验。某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质，进一步脱水生成吲哚。吲哚与显色剂对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。,西蒙氏枸椽酸盐试验,某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变为兰色。,三、沙门氏菌,沙门氏菌属于肠杆菌科，有2300多个血清型。 肠道沙门

31、氏肠炎亚种有三种血清型 （猪霍乱、甲型副伤寒和伤寒沙门氏菌）可导致严重病症，其它血清型大多引起肠胃炎，表现轻微。 沙门氏菌为革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性厌氧，最适生长温度为3537，最适pH值为6.87.8。 鸡白痢、鸡伤寒、羊流产和甲型副伤寒等沙门氏菌在普通琼脂不易生长，血清、葡萄糖、硫代硫酸钠、胱氨酸、脑心浸液和甘油等有助于本菌生长。 麦康凯上，大多形成无色菌落（不发酵乳糖）；SS平板上，形成黑色菌落。 除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌外，其余各菌：周生鞭毛，绝大多数具有菌毛。,沙门氏菌不分解乳糖（亚利桑那菌除外）。分解葡萄糖产酸产气（伤寒沙门氏菌产酸不产气）。多数产生H2S，不产生靛基质，不液化明胶，不分解尿素，