红海榄化学成分的分离及结构鉴定-中国试验方剂学杂志

1、红海榄化学成分研究梁成钦1，龚受基1，周先丽1，徐庆1，苏小建2 收稿日期通讯作者 苏小建， Tel:，E-mail: 作者简介梁成钦(1977-),男，助理研究员，硕士，研究方向：天然药物化学研究；Tel:，E-mail:，朱秋燕2（1. 广西桂林医学院，广西桂林；2. 广西师范大学环境与资源学院，广西桂林）摘要目的：研究红海榄的化学成分。方法：利用硅胶柱层析和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化；采用化合物的理化性质和NMR、IR、MS等波谱方法对各单体化合物进行结构鉴定。结果：从红海榄中分离得到了7个

2、化合物，它们分别是：-香树脂醇（1）、豆甾醇（2）、白桦脂酸（3）、胡萝卜甙（4）、芦丁（5）、D-甘露醇（6）和六十炔烃（7）。结论：其中化合物（1）、（2）、（3）、（6）和（7）为首次从该植物中分离得到。关键词红海榄；化学成分；结构鉴定中图分类号：R284.1文献标识码：B文章编号：Studies on Chemical Constituents of Rhizophora stylosaLIANG Cheng-qin1, GONG Shou-ji1, ZHOU Xian-li, XU Qing1 , SU Xiao-jian2*, Zhu Qiu-yan2(1. Guilin Medi

3、cal College, Guilin ,China; 2. College of Environment and Resources of Guangxi Normal University, Guilin ,China)Abstract Objective: To study the chemical constituents of Rhizophora stylosa. Methods: The constituents were isolated and purified by silica gel column chromatograph and Sephadex LH-20 col

4、umn chromatograph. Their structures were elucidated through their physicochemical properties and spectroscopic analysis such as 1H-NMR, 13C-NMR and FT-IR. Results: Eight compounds were isolated from Rhizophora stylosa, they were identified as-amyrin(1), Stigmasterol(2), Betulinic acid (3), Daucoster

5、ol(4), Rutin(5), D-Mannitol(6) and sixty Alkyne (7). Conclusion: Compounds （1）,（2）,（3）,（6）and（7） were isolated from the plant for the first time. Key words Rhizophora stylosa; Chemical constituents; Structure identification红海榄(Rhizophora stylosa) 是红树科(Rhizophraceae)中的一种红树林植物，生长于热带和亚热带沿海潮间带，具有解毒利咽，清热

6、利湿，凉血止血，敛肺止咳，涩肠止泻等药用功效，在东南亚沿海具有较长的药用历史1。目前，世界各国对红树植物的活性物质结构及其药理研究表明， 红树植物含萜类、多糖和生物碱等化合物，具有抗艾滋病、抗肿瘤、抑菌和抗氧化等活性2。从报道得知，红海榄含有二萜、三萜、甾体、黄酮和生物碱等化合物3。目前有关红海榄化学成分的研究并不多4，所以为有效保护和合理开发我国红海榄资源，从中寻找具有药用价值的生物活性成分，我们对红海榄化学成分进行进一步研究，并从中分离得到了7个化合物，分别为-香树脂醇（1）、豆甾醇（2）、白桦脂酸（3）、胡萝卜甙（4）、芦丁（5）、D-甘露醇（6）和六十炔烃（7）。其中化合物（1）、（2

7、）、（3）、（6）和（7）为首次从该植物中分离得到。1材料红外光谱仪（美国Nicolet公司Avatar 360 FT-IR）；核磁共振仪（瑞士Bruker公司ADVANCE AV 500 MHz）；X-4 型显微熔点测定仪(温度计未校正，北京泰克仪器有限公司)；薄层层析用硅胶GF254、柱层析用硅胶（200300目）（青岛海洋化工厂），其他试剂均为国产分析纯。 红海榄采自广西北海合浦，并由中国科学院广西桂林植物研究所黄定中高工鉴定为红海榄(Rhizophora stylosa)，样品标本保存于桂林医学院科学实验中心。2提取分离红海榄树叶(3.5 kg)和枝(4.0 kg)，自然风干后，分别用

8、80 %乙醇回流提取3次（固液比18），每次提取1 h，合并提取液并减压回收溶剂至无酒精味，分别得叶和枝浓缩液，然后再分别依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压浓缩萃取液得各萃取部位浸膏。将叶石油醚萃取物(3.5 g)进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯（100010）进行梯度洗脱，所得到流分再反复硅胶柱层析，得到化合物1(16.7 mg)和化合物2(12.5 mg)。将叶正丁醇萃取物（16.587 g）进行硅胶柱层析，分别用氯仿-甲醇（8020，6040，0100）进行洗脱，所得流分反复进行Sephadex LH-20柱层析，用甲醇进行洗脱，得到化合物5(34.5 mg)和化合物6

9、(26.8 mg)。将枝氯仿萃取物（10.6 g）进行硅胶（200-300目）柱层析，用氯仿-丙酮（100010010）、乙酸乙酯-甲醇(100010010)依次进行梯度洗脱，所得流分再反复经硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析，得到化合物7（7.6 mg），化合物3（8.4 mg），化合物4(6.6 mg)。3结构鉴定化合物1白色粉末（乙酸乙酯），mp：192.0193.0 。以石油醚乙酸乙酯=51展开，Rf=0.26；石油醚乙酸乙酯=41展开，Rf=0.38，碘显色，均为单一斑点。TLC板展开后，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热显紫红色。ESI-MSm/z425M-H-。IR（KBr

10、压片法）cm-1: 3413(OH)，2946，2853，1465，1387(CH3)。1H NMR谱中(CDCl3，500MHz)，0. 82(2)、0.86、0. 89、0. 96、0. 99、1. 02、1. 16(各3H，s)，分别为8个甲基质子信号，3. 25(1H， dd，J=5.0，10.0Hz，H-3)，5. 21(1H, br. s, H-12)。13C-NMR谱中(CDCl3)，共给出30个碳信号，其中145. 2和121. 8为一对双键碳信号，79. 0为连氧次甲基碳信号，15. 056. 0有27个SP3杂化的碳信号，13C NMR数据及归属见表1。以上数据与文献5报道

11、的基本一致，故鉴定该化合物为-香树脂醇(-amyrin，C30H50O)。化合物2无色片状晶体（乙酸乙酯），mp：145.0147.0。ESI-MSm/z413MH。以石油醚乙酸乙酯=71展开，Rf=0.38；石油醚乙酸乙酯=41展开，Rf=0.43，碘显色，均为单一斑点。TLC板展开后，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热显紫红色。IR（KBr 压片法）cm-1： 3419 (OH)，3030，2948，2851，1464，1381，1056；13C NMR数据及归属见表1，此数据与文献6报道的基本一致，故鉴定该化合物为豆甾醇（Stigmsterol，C29H48O）。化合物3无色针状晶体(氯仿-甲

12、醇)，mp：274276。1HNMR(CDCl3，500MHz) H(ppm): 0.64(3H，s), 0.75(3H，s), 0.86(6H，s), 0.92(3H，s), 1.63(3H, s，H-29), 分别为6个甲基质子信号。13C NMR数据及归属见表1，此数据与文献7报道的基本一致，故鉴定该化合物为白桦脂酸(Betulinic acid，C30H48O3)。 化合物4白色无定形粉末（甲醇），mp：293.5295.4 ，Libermann-burchard反应为阳性，IR（KBr 压片法）cm-1：3362 (OH)，1647，1653(C=C)，2928、2850 (CH3)

13、，1458，1367 (CH3)，2863 (CH2)，1023 (C-O)；1HNMR(DMSO-d6，500 MHz)中，5. 41(1H, br. s, H-6)，4.32(1H，d，J=7.7 Hz，H-1)，0.75(3H，s)、0.90(9H，m)，0.99(3H，s)、1.06(3H，s)，分别为6个甲基质子信号。此化合物的13C NMR数据及归属见表1，此数据与文献8报道的基本一致，故鉴定该化合物为胡萝卜甙（Daucosterol ，C35H60O6）。表1化合物14的13C NMR的数据归属（化合物1、2、3： CDCl3；化合物4：DMSO-d6，500 MHz）Table

14、 1 13C NMR spectra data of Compound 14（Compound 1，2，3: CDCl3; Compound 4: DMSO-d6，500 MHz）No.1234No.1234No.4C-138.637.338.837.3C-1627.028.932.240.4C-1101.4C-227.331.727.529.7C-1732.556.155.956.0C-273.9C-379.071.877.379.0C-1847.312.047.112.1C-379.6C-438.942.439.038.8C-1946.919.449.119.5C-470.6C-555.2

15、140.855.4140.9C-2031.140.4150.836.0C-579.3C-618.4121.718.4121.6C-2134.821.029.719.4C-661.6C-732.731.934.431.9C-2237.0138.337.233.9C-838.832.040.731.9C-2328.1129.428.636.7C-947.750.250.450.1C-2415.5C-1037.236.537.226.0C-2515.631.916.229.2C-1123.520.220.921.1C-2616.818.916.419.0C-12121.839

16、.825.628.2C-2726.021.014.820.1C-13145.242.338.142.3C-2828.425.4177.723.1C-1441.856.842.556.7C-2933.311.919.412.2C-1526.224.430.624.3C-3023.7110.0化合物5浅黄色粉末(甲醇)， mp：177.0178.0， HCl-Mg反应呈紫色， Molish反应界面呈紫红色，指示该化合物为黄酮的苷类化合物。ESI-MSm/z609M-H-。IR(KBr压片法) cm-1：3352 (OH)，2939，1657 (C=O)，1602, 1572, 1505。1HNMR

17、(CDCl3，500 MHz)12.58(1H，S，5-OH)， 10.83(1H，S，7-OH)，9.65(1H，S，4-OH)，9.17(1H，S，3-OH)， 5.27(1H，d，J=3.5，2-OH)， 5.09(1H，d，J=3.9，3-OH)， 5.06(1H，d，J=5.7，4-OH)，4.51(1H，S, 2-OH)，4.36(1H，S， 3-OH)，4.32(1H，S， 4-OH)，7.53(1H，d，J=8.1，H-6)，7.52(1H，S，H-2)，6.83(1H，d， J=8.1，H-5)，6.38(1H，d，J=1.5，H-8)，6.18(1H，d，J=1.5，H-6

18、)，5.33(1H，d，J=6.9，H-1) 和4.38(1H，S， H-1)，0.98(3H，d，J=6.1)，3.04-4.00(葡萄糖基和鼠李糖吡喃环上的10个H)。13CNMR(CDCl3，500 MHz) 177.8（C-4），164.5（C-7），161.7 (C-5)，157.1 (C-2)，156.9 (C-9)， 148.9 (C-4)，145. (2C-3)，133.8 (C-3)； 122.0 (C-6)， 121.7 (C-1)，116.7 (C-2)， 115.7 (C-5)，104.4 (C-10)， 101.7 (C-1)，101.2 (C-1)，99.1 (C-

19、6)，94.0 (C-8)；76.9 (C-3)， 76.3 (C-5)， 74.6 (C-2)， 72.3 (C-4)， 71.1 (C-4)，70.8 (C-2)， 70.5 (C-3)， 68.7 (C-5)，67.5 (C-6)，18.2 (C-6)。上述数据与文献9基本一致，故鉴定该化合物为芦丁（Rutin，C27H30O16）。化合物6白色针状晶体（甲醇），该化合物在加热条件下溶于甲醇。mp：167.81685 ，Molish反应阳性，易溶于水，难溶于低极性有机溶剂。IR(KBr压片法)cm-1：3400-3200(OH)，2948(CH2)，1419(CH2)，1083、1020

20、(C-O)，930(OH)。由1HNMR(DMSO-d6，500 MHz)谱数据可知，处于较低场的:4.40(2 H，d，J=5.5Hz，C2，5-OH)，4.32(2 H，t，J=5.0 Hz，C1，6-OH)，4.12(2 H，d，J=7.2 Hz，C3，4-OH)，分别是醇羟基的氢质子，与碳上所连质子明显偶合；而处于较高场3.303.65处的质子峰，推测为其余氢质子的堆积峰。结合13CNMR(DMSO-d6，500 MHz)谱可知分子结构具有对称性，：71.8(2C，C-3，C-4)，70.2(2C，C-2，C-5)，64.3(2C，C-1，C-6)，以上数据与文献10报道的数据基本一致

21、，所以确定该化合物为D-甘露醇（D-Mannitol，C6H14O6）。化合物7白色粉末（氯仿），mp：58.660.2。APCI-MS m/z 839M+H+。IR（KBr 压片法）cm-1：2918，2849，2115，1473，723。1HNMR (CDCl3，500 MHz)显示有四组氢信号，H（ppm）：2.37（t，2H）， 1.66（m，2H）， 1.28（m，44H）， 0.90（t ，3H）。1H NMR在化学位移1.28 ppm和0.90 ppm两个高场区有信号峰，并在化学位移0.90 ppm处是一变形的三重峰，此为长链脂肪烃的多个亚甲基所产生的次级效应11 。结合IR谱图分析，由于3000 cm-1以上无不饱和烃的C-H伸缩振动吸收峰，说明该不饱和键为三键，且不在端位。在2115 cm-1附近区域无CC