临床本科3-溶贫检测.ppt

1、第三节 溶血性贫血检测,溶血性贫血定义： 红细胞的生存时间缩短1520天以下，破坏速度超过骨髓的代偿造血能力时，才出现贫血 发病机制分类： RBC内在因素（遗传性/先天性） RBC外在因素（获得性）,溶贫的临床表现,急性：发热、畏寒，可出现Hb尿，肾功能改变 慢性：贫血、黄疸、脾肿大、免疫指标异常，胆红素代谢异常,红细胞破坏增多的依据 RBC寿命15天 血片见RBC碎片 血浆游离Hb增高（血管内溶血） Hb尿检测（），酱油色 尿含铁血黄素试验（） 血清非结合胆红素增高 尿胆原增高 血清结合珠蛋白减低 血浆高铁血红素白蛋白检测,球形红细胞,破碎红细胞、盔形红细胞等,一、溶贫筛查试验,1、血浆游离

2、Hb测定正常值：50mg/L 意义：血管内溶血的指征,2、血清结合珠蛋白测定,正常值：0.71.5g/L 各种溶血时结合珠蛋白均可减低，严重血管内溶血明显减低，甚至测不出（血浆游离血红蛋白超过1.3g /L时）。 巨幼细胞贫血、严重肝病、口服避孕药、先天性无结合珠蛋白血症等减低或消失。 增高见于炎症、感染、组织坏死、恶性肿瘤、风湿性疾病、口服避孕药、类固醇激素治疗。,3、血浆高铁血红素清蛋白检测,正常： 阴性 严重血管内溶血时呈阳性 4、RBC寿命测定（最佳） 正常值：2532天 51Cr同位素标记，半衰期15天，说明有溶血存在。,5、尿含铁血黄素试验（Rous test),正常值：阴性 溶贫

3、中阳性只占1020%,二、 红细胞膜缺陷的检验 1、RBC渗透脆性试验 检测红细胞在不同浓度 低渗盐水中的抵抗力 RBC表面积/RBC容积比值 与RBC脆性成反比,参考值： 开始溶血0.42%0.46% (NaCl液) 完全溶血0.28%0.32% (NaCl液) 意义： 脆性增高 遗传性球形细胞增多症 脆性减低 地中海贫血、缺铁性贫血,2、自身溶血试验及其纠正试验,正常人红细胞经孵育48h后，溶血率很低4.0%，加葡萄糖或ATP后更低（0.6%） 膜缺陷性溶贫时，溶血率升高，但可被纠正 G6PD缺陷 ：ATP：可纠正 但不能纠至正常 G： 同上 PK缺陷： ATP：可纠正 G： 不纠正,三、

4、酶缺陷的检验,1、 高铁血红蛋白还原试验 G6PD 高铁血红蛋白还原酶 G6P NADP 还原型美兰 HbFe3+ 6PG NADPH 氧化型美兰 HbFe2+ NaNO2,正常值：定性法（） 半定量法 还原率75% G6PD缺陷：定性（），半定量70%。,2、氰化物-抗坏血酸试验,原理：略 结果：正常血液几小时后变暗色 意义：G6PD缺乏者血液变成棕色（巧克力色），纯合子在2h内即变色，杂合子要34h变化,3、变性珠蛋白小体生成试验,受检RBC乙酰苯肼 作活体染色（甲基紫） 3712h 有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒 下一张,G6PD缺乏致GSH减少，高铁Hb增多，形成Heinz小体

5、,体外活体染色后，光镜下发现的12m颗粒状折光小体。 结果：正常人30% 意义：见于不稳定血红蛋白病、G6PD缺陷症和芳香族苯胺或硝基类化合物中毒所致的溶贫。,4、G6PD PK活性测定,四、珠蛋白生成异常试验 包括血红蛋白电泳、 HbF定量测定（碱变性试验）等,五、免疫性溶血的检验,1、抗人球蛋白试验（Coombs test） 直接法、间接法,直接抗人球蛋白试验（DAGT）,测RBC表面结合的抗体（更重要，价值高） 受检者RBC悬液+等量抗人球蛋白试剂 低速离心后观察凝集 37，15min,间接法（IAGT）： 测游离特异的抗体（先使RBC致敏，再与抗人球蛋白血清结合）,Coombs tes

6、t临床意义 正常人抗人球蛋白试验直接、间接均阴性 自身免疫性溶血性贫血（温抗体型 37条件下作用最强 IgG）,(冷抗体型 4条件下进行试验 IgM) 新生儿同种免疫溶血病、SLE、RA、HD、NHL 可阳性。,2、冷热溶血试验,检测补体依赖性冷热溶血素 存在D-L双向抗体，则（+） 正常为（-），（+）见于PNH 3、冷凝集素试验参考值：效价1:40 意义：AIHA ,六、PNH相关检测 属于红细胞膜缺陷，慢性血管内溶血,PNH不同时间尿样,1、酸化溶血试验（Ham test） 特异性高，是国内外公认的PNH确诊试验 利用补体在弱酸性环境中激活，并攻击RBC膜，致溶血 。 正常人阴性，PNH

7、阳性。,2、蔗糖溶血试验 特异性敏感性均不如Ham试验，仅做筛选。 参考值：阴性 3、蛇毒因子溶血试验 特异检测PNH,第四节 血型鉴定与交叉配血,血型定义： 红细胞系统血型：,一、ABO系统与临床意义,1、分型原则 根据红细胞膜上含有抗原和血浆中含有相应抗体分为A、B、AB、O四型,血型（表型）红细胞上抗原 血浆中抗体 基因型,A A 抗B AA、AO,B B 抗A BB、BO,O 无 抗A、 抗B、抗AB OO,AB A、B 无 AB,父母的血型与子女的血型关系,2、抗原,A、B抗原（含H抗原）在胚胎期已形成，出生时抗原性不强，故胎儿、新生儿定血型时凝集性差。 血型抗原终生不变。H抗原属分

8、泌型物质，存在各组织中，以唾液为多，可辅助鉴定ABO血型。,3、抗体,抗A、 抗B、抗AB属IgG 或IgM型，天然性抗体以IgM为主，免疫性以IgG为主（如输血、妊娠后）。 O血型血清内抗体属IgG。新生儿溶血与IgG有关。 抗体也终生不变,抗A、抗B在生后3-6月才开始产生, 5-6岁达高峰，故婴幼儿定血型时， 抗体效价低，抗原位点少，易误定,ABO亚型,亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构或抗原位点数有一定差异。 最多见的最有意义亚型是A型中的A1、A2 （A1A、A1B 、A2B)。 A2B含有A1抗体。 凡在血型鉴定过程中出现不明显或可疑结果时应做亚型鉴定。,4、血型鉴定,正向直接定型

9、： 用已知抗体血清检查红细胞的抗原 反转定型： 用已知血型的红细胞检查血清中抗体,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB A细胞 B细胞 O细胞 + - + - + - A -+ + + - - B + + + - - - AB - + + - O,血 型,三、交叉配血、输血原则,1、交叉配血 主侧交叉配血： 次侧交叉配血:：,2、输血原则,输血前复查血型， 做交叉配血;输同型 血，多个不同血源 间互相交叉配血; 严格掌握输血指征; 提倡成分输血,意义,输血； 辅助诊断新生儿溶血病； 器官移植； 遗传分析； 其他,二、Rh系统与临床意义,1900年发现ABO血型，1940年发现Rh血型 。 抗原有C c D E e五种 ，一般以D定型。,含有D抗原的红细胞称为Rh阳性，不含D抗原的为Rh阴性.我国人群汉族