检验项目标准操作规程-HIV AbAg

1、检验项目标准操作规程LIAISON 人类免疫缺陷病毒抗原及抗体联合检测 （HIV Ab/Ag）(化学发光法，CLIA)类别信息用途本产品用于体外定性检测人血清或血浆中的人类免疫缺陷病毒1 型（HIV-1）的P24 抗原，以及两种人类免疫缺陷病毒1 型（M 群和O 群）和/或人类免疫缺陷病毒2 型（HIV-2）特异性抗体。此试剂仅用于全自动化学发光免疫分析仪（LIAISONXL）系列。临床意义获得性免疫缺陷综合症（艾滋病）的发病原因已被确定为两种类型的逆转录病毒，统称指定为人类免疫缺陷病毒（HIV）。HIV是由HIV感染者之间的性接触、接触到受污染的血液或者血液制品进行传播的，以及受感染的母亲传

2、染给胎儿或围产期感染给新生儿。艾滋病患者和HIV感染的无症状个体中可以检测到HIV抗体；通过细胞培养或者病毒RNA和/或前病毒DNA的扩增后在艾滋病患者和阳性个体中能检测到HIV病毒感染。通过系统进化分析HIV-1可以分成M群（主要的或较多的），N群（新的，非-M群，非-O群），O群（外部的）和P群（Plantier 等，Nat. MED. 2009年）。全球艾滋病的流行主要是由M群的病毒引起的，而N群和O群病毒相对少见，而且是非洲西中部特有的。然而，已经确定在欧洲和美国存在O群感染。 HIV-1 M群由遗传亚型（A，B，C，D，F，G，H，J和K）组成，而且是循环重组的形式（CRFs）。 H

3、IV-1 B亚型是在美国，欧洲，日本和澳大利亚的主要亚型，但在欧洲新的HIV-1病毒感染的很大比例是由非B亚型引起的。与之密切相关但不同类型的免疫缺陷病毒是人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）。人类免疫缺陷病毒2型与HIV-1在形态结构，基因组组织，细胞嗜性、体外致细胞病变性，传播途径，以及导致艾滋病的能力方面都是类似的。 HIV-2比HIV-1致病性弱些，相比HIV-1而言，HIV-2从感染到全面爆发有一个较长的潜伏期，疾病进展慢，病毒滴度较低，垂直和水平传播概率低。 HIV-2的西非流行，但在美国，欧洲，亚洲，非洲等地区感染HIV-2的频率比HIV-1低。HIV-1和HIV-2之间的血清学交

4、叉反应已经显示出不同样本的高度可变性。这种变异需要HIV-1和HIV-2两种病毒的抗原来筛选HIV-1和HIV-2的抗体。 HIV-1和/或HIV-2抗体和/或p24抗原在血液中的存在表明潜在感染HIV-1和/或HIV-2。HIV感染后的早期，但在转阴之前，在血清或血浆标本中可检测HIV抗原。最经常作为抗原血症标记使用的HIV结构性蛋白是一种核心蛋白， P24。人类免疫缺陷病毒抗原及抗体联合检测试剂盒（化学发光法）使用HIV P24单克隆抗体检测转阴之前的HIV p24抗原，从而降低转阴窗口期并提高HIV感染的早期检测。样本信息样本类型样本管/抗凝剂最小样本量血清200 L 标本+ 150 L

5、 死体积血浆 柠檬酸盐 EDTA 肝素 草酸钾 ACD CPDA标本保存样本在收集后7天内检测，可保存在 2-8C 条件下; 否则，标本需要分包装冷冻保存 (20C 或更低)。如果标本冷冻保存，使用前需要解冻并混匀。标本的特定要求 含有颗粒物质、浑浊、脂血或红细胞残片的样本使用前需要过滤或离心。 严重溶血或脂血样本以及含有。颗粒物质或明显微生物污染的样本不能用于检测。 检测前检查并去除泡沫。方法学HIV 特异性抗体的定性测定采用抗原夹心化学发光免疫检测(CLIA)技术。HIV p24抗原的定性测定采用P24抗原的单克隆抗体夹心化学发光免疫检测(CLIA)技术。试剂1. LIAISON HIV抗

6、体检测试剂盒1.1 磁微粒：(2.5mL) 包被有HIV-1 gp41（M群和O群）以及HIV-2 gp35重组抗原（两者都从大肠杆菌中获得）的磁性微粒，BSA，PBS缓冲液，0.1%的叠氮化钠1.2 校准品：(1.8 mL ) 含有低浓度HIV抗体的人血清/血浆，BSA，PBS缓冲液，EDTA，0.2的ProClin300，惰性黄色染料。校准品的值可溯源到厂家的室内参考品。1.3 样本稀释液：(11 mL) 绵羊血清，BSA，PBS缓冲液，EDTA，0.2的ProClin300，防腐剂。1.4 结合物稀释液：(2*21 mL ) 牛血清，BSA，TRIS缓冲液，0.2的ProClin300，

7、防腐剂。1.5 结合物：(4.4 mL ) HIV-1 gp41（M群和O群）以及HIV-2 gp35重组抗原（两者都从大肠杆菌获得），与异鲁米诺衍生物结合，BSA，PBS缓冲液，0.2的ProClin300，防腐剂。2. LIAISON HIV抗原检测试剂盒2.1 磁微粒：(2.5mL) 包被有链霉亲和素的磁性微粒，BSA，PBS缓冲液，0.1叠氮化钠。2.2 校准品：(1.8 mL ) 低水平HIV p24重组抗原（从大肠杆菌中获得），重组牛抑肽酶，酪蛋白，PBS缓冲液，0.2的ProClin300，惰性黄色染料。校准品的值可溯源到厂家的室内参考品。2.3结合物B：(4.4 mL) HIV

8、 p24抗原的抗体（单克隆）生物素结合物，人血清/血浆，非特异性IgG抗体（小鼠多克隆），BSA，PBS缓冲液，0.2的ProClin300，防腐剂。2.4 结合物A：(13 mL ) HIV p24抗原的IgG抗体（单抗），与异鲁米诺衍生物结合，非特异性人IgG，非特异性IgG（小鼠多克隆），BSA，PBS缓冲液，EDTA，Igepal 300 CA-630，0.2的ProClin300，防腐剂。3. 试剂盒储存条件3.1试剂盒必须竖直放置以利于磁微粒的重新悬浮。不能冷冻保存。过效期的试剂盒不能再使用。3.2 当试剂盒处于密封和竖直放置的储藏条件下，能够在2-8C 条件下稳定至效期。3.3

9、打开密封膜后，试剂盒可在2-8C 条件下或仪器试剂区中稳定储藏4 周。4. 试剂有效期试剂盒的有效期为12 个月。定标使用试剂盒中包含的校准品定标，分析仪可设置检测项目的临界值（cut-off值）。每个校准品可定标四次。为了正确测试，检测化验必须定标。 如果出现以下的情况需要重新定标，每次定标需要做3份重复测试: 使用新批号的试剂盒或启动试剂。 距上次定标时间超过4周。 分析仪经过维护。 质控结果超出期望范围值。质量控制分析仪需做质控一次进行分析性能监控，本项目须通过检测人类免疫缺陷病毒抗原及抗体质控品来进行。(a)使用当天至少一次，(b)使用新的试剂盒时，(c)对试剂盒进行定标后，(d)使用

10、新批号的启动试剂，(e)评价打开的超过四个星期的试剂盒的性能时，或者按照地方性法规或者认证组织的要求或者指南进行时。质控值必须在靶值范围内：一个质控品或两个质控品检测值都超出靶值范围时，需要重新进行定标并对质控品重新进行检测。如果定标成功后，质控值仍然超出靶值范围，则应使用未开封的质控品重新检测。如果质控值仍然超出靶值范围，则不能报告患者结果。使用其他质控品前，应先评估质控品与本项目的匹配性。然后建立合适的质控范围。检测程序1. 试剂盒的准备在打开试剂盒中各组分的封口膜前，水平轻摇试剂盒，避免产生泡沫。打开各组分的封口膜并转动磁微粒组分底部的齿轮直到悬浮液变为褐色。该步骤可使磁微粒重新悬浮。然

11、后，使试剂盒上的条形码面向左侧将试剂盒滑入分析仪中的试剂区，使用前需在分析仪中放置30分钟。 分析仪可自动搅动使磁微粒充分悬浮。根据分析仪操作手册的规定装载标本并开始检测。2. 必要时申请定标3. 加载样本4. 申请检测5. 按下START检测检验方法的局限性要得到准确可靠的结果，必须严格地遵照操作手册使用熟练操作仪器。细菌污染或热灭活样本可能会影响检测结果。此测试只适用于单个样本，不适用于稀释样本，样本池或热灭活标本。只有以两种试剂同时检测的样本结果才能联合起来。单一检测结果不能视为特定诊断方法得到的确定结果，不能用于与其他诊断分析比较，或建立临床状态。此试剂盒不得单独用于检测HIVp24抗

12、原。分析灵敏度使用HIV-1 p24抗原的第一国际参考试剂进行本研究，NIBSC代码：90/636，显示灵敏度为1.26 IU/ mL。分析特异性分析特异性可定义为此项目在含有潜在干扰因子或交叉反应抗体的样本(例如，抗凝剂、溶血、样本处理的影响)中准确检测出特定分析物的能力。 干扰因子： 针对潜在干扰物或临床情形的研究表明，本项目性能不受抗凝剂(柠檬酸钠，钾乙二胺四乙酸，肝素锂，肝素钠，草酸钾，ACD，CPDA)、溶血(高达1000mg/dL的血红蛋白)、脂血(高达3000mg/dL的甘油三酯)、胆红素血(高达20mg/dL胆红素)或样本冻融循环的影响。结果不受同一天新鲜样本的使用的影响，对于比较研究25份（抗-HIV抗体）+25份（HIV-1 p24抗原）新鲜收集的样本的比较分析都是阳性的。 交叉反应：人类免疫缺陷病毒抗原及抗体联合检测试剂盒（化学发光法）的交叉反应性研究旨在评估可能引起传染疾病的其他微生物抗体 (EBV、hCMV、风疹病毒、细小病毒B19 IgG、刚地弓形虫、梅毒螺旋体、莱姆病螺旋体、HSV、VZV、HAV、HBV、HCV、HTLV-I/II)以及其他条件下可能导致非典型免疫系统活动的抗体(抗核自身抗体、类风湿因子、人抗鼠抗体)的潜在干扰。此研究中的样本已预先通过另一种商业HIV检测试剂盒的筛查。