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文档简介

1、细胞周期同步化,0912402038陈禄芝,细胞周期同步化,借助某种实验手段(自然地或经人为地),使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相的现象。 细胞周期同步化分：自然同步化和人工同步化。,自然同步化：是自然界存在的现象, 在动、植物细胞都有发现。 1.多核类；如粘菌只进行核分裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中，进行同步化分裂，使细胞核达108，体积达56cm。疟原虫也具有类似的情况。 2.某些水生动物的受精卵； 3.增殖抑制解除后的同步分裂。,人工同步化：是利用细胞培养的方法, 用各种理化因素处理获得的同步化生长的细胞。 人工同步化可分为选择同步化和

2、诱导同步化。,1、选择同步化 是指人为地将不同时期的细胞分离开来，从而得到不同时相的群体。 （1）主要是有丝分裂选择法。经单层培养可获得一定数量的M期细胞。 对数期的单层培细胞震荡培养瓶悬浮培养液离心培养一定数量的分裂期细胞 优点是细胞未经任何药物处理，细胞同步化效率高。缺点是分离的细胞数量少。 （2）另一个方法是密度梯度离心法。 如裂殖酵母，不同时期的细胞体积和质量上差别显著。 优点是方法简单省时，效率高，成本低。缺点是对大多数种类的细胞并不适用。,1) 有丝分裂选择法：使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃，分裂指数高,MI高。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻振荡，

3、M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，这样每隔1h摇一次并收获一次，倾出培养液贮存于24冰箱中保存可连续收集24h，则可获得一定数量的中期细胞。其优点是，操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害，缺点是获得的细胞数量较少。（分裂细胞约占1%2%） 2）细胞沉降分离法：不同时期的细胞体积不同，而细胞在给定离心场中沉降的速度与其半径的平方成正比，因此可用离心的方法分离。其优点是可用于任何悬浮培养的细胞，缺点是同步化程度较低。,2、诱导同步化,DNA合成阻断法： 用DNA合成抑制剂可逆地抑制DNA合成而不影响其它各期细胞沿细胞周期运转，最终将细胞群体阻断在S期。TdR双阻断法最常用，细胞最终阻断于G1/S交界处。,中期阻断法 利用秋水仙素、秋水酰胺等抑制（微管聚合）有丝分裂器的形成，将细胞阻断在有丝分裂中期。 优点是操作简便，效率高。 缺点是这些药物的毒性相对较大。细胞常常不能恢复细胞周期运转。 条件依赖性突变株在细胞周期同步化中的应用 将与细胞周期调控有关的条件依赖性突变株转移到限定条件下培养，所有细胞便被同步化在细胞周期中某一特定时期。,细胞周期同步化的意义,使细胞大量的处于同一细胞时期，以便获得某一时期大量的物质，如细胞中期时的染

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