SDS-PAGE所有详细试剂配方

1、.sds-page30%聚丙烯酰胺溶液-30%（w/v）acrylamide 【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(ml)或质量(g)30%acr-bis(29:1)1000ml100ml29%acrylamide(丙烯酰胺)290g29g1%bis(n,n-亚甲丙烯酰胺)10g1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克n,n-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。0.45m微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4避光（用铝箔纸包扎起来）保存。严格核实ph不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不

2、得超过两个月，隔几个月须重新配制。如有沉淀，可以过滤。【保存条件】4避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。称量丙烯酰胺和n,n-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。1mtris-hcl（ph6.8）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1mtris-hcl名称用量备注tris12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称量121.1gtris碱溶于800ml的去离子水，充分搅拌溶解，加0.

3、7ml的浓hcl调节所需要的ph值（7.4-大约0.7ml，7.6-大约0.6ml，8.0-大约0.42ml），将溶液定容至1l，高温高压灭菌后，室温保存。应使溶液冷却至室温后再调定ph值，因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的ph值大约降低0.03个单位。【保存条件】室温保存。精品.【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。1.5mtris-hcl（ph8.8）(分离胶buffer)【组分浓度】1.5mtris-hcl名称用量备注tris18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml(36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方

4、法】1l称量181.7gtris碱溶于800ml的去离子水，充分搅拌溶解，加浓hcl调节所需要的ph值=8.8，将溶液定容至1l，高温高压灭菌后，室温保存。（1.5mmol/ltris-hcl(ph8.8):18.15gtris和48ml1mol/lhcl混合，加水稀释到100ml终体积。过滤后40c保存。）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定ph值，因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的ph值大约降低0.03个单位。 10%十二烷基硫酸钠sds溶液-10%(w/v)sds 【组分浓度】10%(w/v)sds名称用量备注sds10g去离子水80

5、ml加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称取2g高纯度的sds置于100200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水，68加热溶解，滴加浓盐酸调节ph至7.2，定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】保存条件：4保存。注意事项：易燃，有腐蚀性，请注意防护。易挥发，使用后请盖紧瓶盖。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。保存条件：4保存。注意事项：易燃，有腐蚀性，请注意防护。易挥发，使用后请盖紧瓶盖。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套对人体有害，请注意防护。精品.10%过硫酸铵溶液-10%(w/v)ap 【组分浓度】10%(w/v) 过硫酸铵

6、名称用量备注过硫酸铵0.1g去离子水1ml现配现用【配制方法】称取0.1g过硫酸铵置于1.5ml离心管，加1ml去离子水吹打溶解，4保存【保存条件】4保存【注意事项】10%过硫酸铵溶液在4保存时，可使用2周左右，超过期限会失去催化作用5tris-甘氨酸电泳缓冲液-5tris-glycine buffer （sds-page电泳缓冲液）【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(ml)或质量(g)1000ml500ml0.125m tris15.1g1.25m glycine(甘氨酸)94.0g0.5%(w/v)sds5.0g【配制方法】称取15.1gtris，94.0g甘氨酸（gly

7、cine），5.0gsds，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。得0.125mol/l tris-1.25mol/l甘氨酸电极缓冲液。临用前稀释5倍。【保存条件】室温保存，两年有效。【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。 电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。 5sds-page加样缓冲液-5sds-page loading buffer 【组分浓度】0.25mtris-hcl(ph6.8)；10%(w/v)sds；0.5%(w/v) bpb(溴酚蓝)；精品.50%(v/v) 甘油；5%(w/v

8、)-巯基乙醇(2-me)各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(ml)或质量(g)5ml3ml1mtris-hcl(ph6.8)1.25mlsds0.5gbpb(溴酚蓝)25mg甘油2.5ml（0.5ml/份）分装，室温保存，使用前加25l 2-me/小份，保存一个月左右。-巯基乙醇(2-me) 0.25ml【配制方法】量取1.25ml 1mtris-hcl（ph6.8），0.5g sds，25mg bpb，2.5ml甘油，置于10ml塑料离心管中，加去离子水溶解后，定容至5ml，小份（0.5ml/份）分装，于室温保存。使用前将25l的2-me加入到每小份中。加入2-me的loading buffer可在室温下保存一个月左右。【保存条件】-20保存，至少一年有效。 【注意事项】sds-page蛋白上样缓冲液(5x)中含少量dtt和巯基乙醇，有轻微刺激性气味，必须完全溶解后再使用。 摘自takara 商品目录-实验室常规试剂配制方法 temed原液直接使用考马斯亮蓝r-250染色液 【组分浓度】0.1%(w/v)考马斯亮蓝r-250，25%(v/v)异丙醇，10%(v/v)冰醋酸各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(ml)或质量(g)1000ml400ml备注考马斯亮蓝r-2501.0g0.4g异丙醇250ml100ml搅拌溶解，可用甲醇替代冰醋酸