甜菜组培快繁技术规程

1、ICS65.020.20B 05DB15内蒙古自治区地方标准DB 15/ TXXXX甜菜组培快繁技术规程Technical Regulation for Tissue Culture and Rapid Propagetion of Sugarbeet点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施内蒙古自治区市场监督管理局发布DB15/ TXXXX前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。本标准由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。本标准起草单位：内蒙古自治区农牧

2、业科学院。本标准主要起草人：白晨、李晓东、张惠忠、张自强、王良、韩平安、张必周、赵尚敏、付增娟、鄂圆圆、郑文哲、张辉。4甜菜组培快繁技术规程1 范围本标准规定了甜菜组培快繁的技术要求。本标准适用于甜菜组培快繁技术规程管理的全过程。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1种球 bulb甜菜通过杂交形成的种子。2.2腋芽 axillary bud侧芽的一种，特指从叶腋所生出的定芽。2.3花序 inflorescence花序轴及其着生在上面的花的通称。3 培养基配置3.1 琼脂粉培养基用于甜菜种球的萌发。具体成分为（1 L）：琼脂粉7.5 g。3.2 诱导分化培养基用于甜菜无菌苗诱导分化培养

3、。具体成分为（1 L）：MS培养基4.75 g，蔗糖30 g，NAA（萘乙酸）0.7 mg，KT（激动素）1.2 mg，琼脂粉7.5 g。3.3 继代培养基用于甜菜无菌苗的继代培养。具体成分为（1 L）：MS培养基4.75 g，蔗糖30 g，NAA 0.5 mg，KT 0.4 mg，琼脂粉7.5 g。3.4 生根培养基用于甜菜无菌苗的生根培养。具体成分为（1 L）：MS培养基4.75 g，蔗糖30 g，NAA 1.2 mg，琼脂粉7.5 g。4 外植体的获取4.1 种球的获取种子库房中，选取健康、籽粒饱满、外观完好的甜菜种球。4.2 腋芽的获取选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取非老

4、化主枝或者侧枝带回实验室。4.3 花序的获取选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取花序的末端约20 cm带回实验室。5 灭菌与萌发5.1 灭菌前准备制备灭菌水，配制75 %酒精，配制0.1 %升汞，配制80 %次氯酸钠。5.2 种球消毒将磨掉花萼完整的甜菜种球，用百菌清（烟剂型）密闭熏蒸24 h后，在超净工作台中移至灭过菌的三角瓶中，随后用75 %酒精消毒2 min，灭菌水漂洗3 次，接着用0.1 %的升汞处理20 min，灭菌水漂洗3 次，最后将消毒后的种子接种于琼脂粉培养基上。5.3 腋芽消毒取回的主枝或者侧枝剪成小段，每个小段视节间的长短保留12 个腋芽，装入烧杯放在自来水下冲洗

5、1 h，冲洗后在超净工作台上用75 %酒精消毒1 min，灭菌水洗3 次，接着用80 %次氯酸钠消毒12 min，灭菌水洗3 次，洗完后按照形态学上端向上接种到继代培养基中。5.4 花序消毒室外取回的花序放入烧杯中，放到自来水下冲洗花序1 h，冲洗后将花序切成1.5 cm左右长度的花序小段，在超净工作台上将花序小段首先用75 %酒精消毒1 min，灭菌水洗3 次，接着用80 %次氯酸钠消毒2 min3 min，灭菌水洗3 次，洗完后按照形态学上端向上接种到继代培养基中。6 无菌苗获取6.1 种球成苗置于组培室培养，23 条件下进行培养，7 d10 d即可萌发。待芽长 2.0 cm2.5 cm时

6、，带子叶一起切下，接种到新的继代培养基中。培养环境：温度23 ，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。培养20 d25 d成苗。6.2 腋芽成苗在组培室内培养，培养环境：温度23 ，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。腋芽培养20 d25 d即可长出新芽，切下新芽接种到新的继代培养基上，约20 d可得到健壮无菌苗。6.3 花序成苗在组培室内培养，培养环境：温度23 ，光照强度3000 Lux，光照时间13 h。花序培养30 d40 d即可长出新芽。切下新芽接种到新的继代培养基上，约20 d可得到健壮无菌苗。7 甜菜无菌苗快繁7.1 诱导分化培养在超净工作台上，选取健壮无菌苗，接种于分化培养基中进行分化诱导培养。培养环境：温度23 ，光照强度3000 Lux，光照时长为14 h。7.2 继代培养当诱导的丛生芽长到约1 cm2 cm，在超净工作台中将丛生芽分切为单苗，接种于培养基中进行继代培养。培养环境：温度23 ，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。7.3 生根培养将生长健壮的丛生芽分切成1 cm2 cm单芽，接种到生根培养基中。培养环境：温度23 ，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。20 d30 d即可诱导出新生根。8 移栽8.1 炼苗去掉封口膜，在组培室锻炼2 d3 d。8.2 室内移栽选择根系生长健壮的无菌苗，用自来水浸