版中国药典卫生学检验培训 抑菌剂效力检查法指导原则.ppt

抑菌剂效力检查法指导原则,2010年版中国药典一部附录XVIII D 2010年版中国药典二部附录XIX N,抑菌剂效力检查法指导原则目的,如果药物本身不具有充分的抗菌活性，在正常贮藏和使用过程中可能发生微生物污染和繁殖使药物发生变质而对使用者造成危害。故在生产过程中根据制剂特性添加适宜的抑菌剂以保证药品的质量。 所有抑菌剂都具有一定的毒性，其抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素而提高或降低，为保证药品的质量和用药安全，添加抑菌剂的量应根据制剂本身是否具抗菌活性，保持最低有效量。 抑菌剂效力的测定可为生产过程中添加抑菌剂提供指导，随着科学发展，新型抑菌剂大量出现，抑菌剂效力的测定更为重要；使生产者正确掌握产品中添加的抑菌剂的效力，有助于选择合适的抑菌剂，也可对抑菌剂使用的正确性给予评价。,抑菌剂效力检查法指导原则国内外现状,目前欧洲、美国、英国等国药典均已在附录中收载了抑菌剂效力测定法，我国2010版药典增订抑菌剂效力检查法指导原则，目的在于缩短与欧美国家的距离，评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂的确定。,抑菌效力检查法指导原则基本规定,抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂的确定。 如果药物本身不具有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物发生变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。 在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非灭菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。,所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。同时，为保证用药安全，最终包装容器中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度并在药品包装上注明添加抑菌剂的名称和数量。 在制剂通则中要求具有抗菌活性的制剂，不管是添加的抑菌剂，还是药物本身具有抗菌活性，在药物研发阶段，均应确认其抗菌效力。抑菌剂的抗菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而提高或降低，因此，应验证最终容器中的抑菌剂效力在效期内不因贮藏条件而降低。 本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。,抑菌效力检查法指导原则实验要点,设计实验方案； 验证计数测定方法； 制备浓菌液（108cfu/ml）； 原包装接种； 立即计数与第7、14、28天计数； 计数结果的常用对数值比较； 结果判断。,抑菌剂效力测定实验 1.培养基：胰酪胨大豆肉汤培养基(TSB)；胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)；沙氏葡萄糖液体培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基。 注意：用于抑菌剂效力测定的培养基必须通过适用性检查（包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基）。,2.菌种： 铜绿假单胞菌 CMCC (B)10 104 大肠埃希菌 CMCC (B) 44 102 金黄色葡萄球菌 CMCC (B)26 003 白色念珠菌 CMCC(F)98 001 黑曲霉 CMCC(F)98 003 试验所用的菌株传代次数不得超过5代。 制备成浓菌液（108cfu/ml）,菌液制备,接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，3035培养1824小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中， 2025培养2448小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中， 2025培养57天，加入35ml 含0.05(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50100cfu的孢子悬液。 菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在28,可以在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的贮存期内使用。,适用性检查 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48小时，计数； 取白色念珠菌、黑曲霉各50100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2025培养72小时，计数； 同时用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定： 若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判断该培养基的适用性检查符合规定。,3.供试品接种：为了达到试验目的，根据供试品的给药途径和用途将供试品分为四类，以便标准的制定和执行。 1类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 耳用制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于黏膜的乳剂 3类 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4类 非固体抗酸制剂,抑菌剂效力可能受试验用容器特征的影响，如容器的材质、形状、体积及封口的方式等。因此，只要供试品每个包装容器的装量足够试验用，同时容器便于按无菌操作接入试验菌液、混合及取样等，一般应将试验菌直接接种于供试品原包装容器中进行贮存。每一容器接种一种试验菌，接种量按供试品类别确定。若因供试品的性状或每个容器装量等因素需将供试品转移至无菌容器时，该容器的材质不得影响供试品的特性（如吸附作用），特别应注意不得影响供试品的PH，PH对抑菌剂的活性影响很大，同时容器的口径大小应便于供试品的进出及混匀。,取包装完整的供试品至少5份，直接接种试验菌，或取适量供试品分别转移至5个适宜的无菌容器中（若试验菌株数超过5株，应增加相应的供试品份数），每一容器接种一个试验菌。 1、2、3类供试品1g或1ml接种菌量为105106cfu，4类供试品中1g或1ml接种菌量为103104cfu，接种菌液的体积不得超过供试品体积的05%1% ，充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布。,4.贮存：接种的供试品在试验期间置2025避光贮存，控制温度变化尽可能小，并防止被污染。 5.存活菌数测定：根据产品类型及表2规定的时间，分别从上述每一容器取供试品1ml（g）， 用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释成1：10； 1：100；1：1000等稀释级，按验证过的菌数测定方法（由于供试品中含有抑菌活性，所以菌数测定方法应进行验证）测定供试品中所含的菌数，并换算成lg值。,6.结果判断：计数结果与初始值（0时菌数）的常用对数值比较，根据表2进行判断。试验结果按有效数字的修约规则进舍，保留一位小数。结果符合表2要求可判断该产品抑菌效力符合规定。,表2 抑菌剂抑菌效力判断标准,1类供试品 细菌：7天菌数下降不少于1.0lg，14天菌数下降不少于3.0lg，14天到28天菌数不增加 真菌：与初始值比，7、14、28天菌数均不增加 2类供试品 细菌：14天菌数下降不少于2.0lg，14天到28天菌数不增加 真菌：与初始值比，14、28天菌数均不增加 3类供试品 细菌：14天菌数下降不少于1.0lg，14天到28天菌数不增加 真菌：与初始值比，14、28天菌数均不增加 4类供试品 细菌、真菌：与初始值比，14、28天菌数均不增加 注：表中“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过0.5lg,实例 1、 氯化钠注射液、 碳酸氢钠注射液不含抑菌剂加入菌从初始到6h就开始无限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液从初始到24 h对数值无