真菌基础知识概述和产品介绍

真菌基础知识概述和产品介绍,市场部,Part 5 联合检测,侵袭性真菌感染概述,Part ,4,真菌是指有细胞壁、不含叶绿素、无根茎叶，以寄生或腐生方式生存，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。 真菌在自然界中分布极为广泛，将近有20万种，大多对人无害，仅有150种可引起人和动物致病。,真菌定义,真菌按形态可分为单细胞和多细胞两大类。 1、酵母菌（yeast)） 属于单细胞真菌，包括酵母菌和类酵母菌两类。目前已知有1000多种。类酵母菌通过母细胞长出芽体繁殖，并延长成芽体，称为假菌丝。假菌丝联接在一起，称为假菌丝体。,大量菌丝和成群芽孢,真菌分类,类酵母菌菌落形态和酵母型真菌的菌落基本相似，不同的是可有假菌丝伸进培养基内，故又称为假丝酵母菌（念珠菌，Candida）。 酵母菌生殖方式有有性生殖和无性生殖两种。假丝酵母菌（念珠菌）不能进行有性生殖。 酵母菌中对人致病的主要是白色假丝酵母菌和新生隐球菌等。,白色假丝酵母菌,隐球菌,2、霉菌（mould） 又称丝状真菌（filamentous fungi），属于多细胞真菌，有菌丝和孢子。菌丝伸长分枝，交织成团，在营养基质上形成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网形丝状菌体。霉菌的菌丝呈长管、分枝状，无横隔壁，具有多个细胞核，并会聚成菌丝体。霉菌的种类很多，约有45000种以上。常见的霉菌有根霉、毛霉、脉孢菌、曲霉和青霉。,烟曲霉,黄曲霉,土曲霉,3、双相真菌（dimorphic fungi） 在不同的温度条件下可产生不同的形态学特征，如在人体内部寄生或在37度条件下为酵母相，而在室温条件下则为霉菌相（菌丝相）。主要包括几种致病菌：皮炎芽生菌、荚膜组织胞浆菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌、申克氏孢子丝菌、马尔尼菲青霉等。,马尔尼菲青霉,皮炎芽生菌,侵袭性真菌病（invasive fungal disease，IFD）即深部真菌病，是指致病性真菌侵犯皮下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病。 真菌寄生是指临床上患有慢性肺部疾病的免疫功能正常者，大多数为真菌在呼吸道寄生，称为定植。 只有当机体免疫功能下降或者粘膜屏障破坏或者菌群严 重失调，真菌可进入血液或组织引起感染。,侵袭性真菌病,5/19/2019,1、侵袭性肺真菌病（曲霉、念珠菌 、隐球菌 、肺孢子菌 、毛霉） 真菌性肺炎占所有侵袭性真菌病的60%，居首位，占医院获得性肺炎的10-15% 2、真菌性败血症（念珠菌、曲霉、隐球菌） 粒缺的血液肿瘤和HSCT及ICU病房的非粒缺患者，美国病死率40% 3、真菌性脑膜炎（新型隐球菌、曲霉、毛霉） 4、真菌性肠炎（念珠菌（最多）、放线菌、毛霉、曲霉、隐球菌） 5、真菌性尿路感染 （皮炎牙生菌、组织包浆菌、球孢子菌） （念珠菌、曲霉、隐球菌、地丝菌、青霉菌） 6、真菌性阴道炎（念珠菌） 7、真菌性角膜炎和眼内炎（念珠菌）,常见侵袭性真菌病,根据文献报告侵袭性真菌感染（ invasive fungal infection，IFI） 占医院获得性感染的8% 15%1，其中以念珠菌为主的酵母样真菌和以曲霉为主的丝状真菌是IFI 最常见的病原菌，分别占91.4% 和5.9%2-3。根据我国医院感染监测网分析，医院真菌感染从90年代初期的 13.9%上升至90年代末期的 24.4%。深部真菌病发病率每年增长约10%-20%。 1 Erjavec Z，Kluin-Nelemans H，Verweij PE Trends in invasive fungal infections，with emphasis on invasive aspergillosisJ Clin Microbiol Infect，2009，15( 7) : 625-633 2 Lau A，Chen S，Sleiman S，et al Current status and future perspectives on molecular and serological methods in diagnostic mycologyJ Future Microbiol，2009，4( 9) : 1185-4222 3 Bellocchio S，Bozza S，Montagnoli C，et al Immunity to Aspergillus fumigatus: the basis for immunotherapy and vaccinationJ Med Mycol，2005，43( S1) : S181-S188,侵袭性真菌感染现状,尽管新的抗真菌药物不断问世，临床医师对IFI 的诊治也日趋重视，但IFI 的死亡率仍居高不下。侵袭性念珠菌病（invasive candidiasis，IC）的病死率可达30% 50%，而侵袭性曲霉病（ invasive aspergillosis，IA）的病死率高达50% 80%，未获得有效治疗的患者死亡率几乎达100% 4 。这主要是因为未能得到早期诊断和及时治疗。 4 Einsele H，Loeffler J Contribution of new diagnostic approaches to antifungal treatment plans in high-risk haematology patientsJ Clin Microbiol Infect，2008，14( Suppl 4) : 37-45,目前深部真菌病的诊断率尚远低于实际感染率，主要是各地医院发展很不平衡，真菌检测技术及水平参差不齐，提高深部真菌病诊治水平的关键在于建立规范、可靠的实验室检查方法以及实施可行、相对统一的诊断标准，以利于临床早期诊断、及时治疗，降低病死率。,侵袭性真菌病之所以诊断困难，主要是因为: 1、临床表现不典型，易被基础疾病所掩盖。 2、确诊常需侵入性手段获得组织标本，侵入性操作常因患者的病情所限难以实施。 3、真菌检测项目开展相对不足或滞后。,目前有关真菌实验室检查和诊断手段主要包括： 1、显微镜直接检查（包括涂片和病理切片） 2、培养法（包括小培养） 3、血清学试验（含真菌结构及抗原） （1）抗原：曲霉菌的半乳甘露聚糖（GM试验）；(1，3)- -D 葡聚糖试验（G 试验） 、念珠菌甘露聚糖（MA试验）和隐球菌荚膜多糖（ GXM） （2）抗体：念珠菌IgM、IgG抗体，曲霉菌IgM、IgG抗体 4、核酸检测（PCR等）,侵袭性真菌感染诊断方法,临床诊断 实验室微生物检查 病史（宿主因素） 培养法 非培养法 症状（高热或体温不升等） 影像学（肺、颅脑等） 培养鉴定 形态学 血清学 分子生物学 +药敏 涂片 病理 PCR （种） （种） G试验（界） DNA GM试验（属） RNA MA试验（属） 隐球菌抗原（种） 念珠菌 抗体（属或种） 曲霉菌抗体（属或种）,真菌病的临床诊断流程和实验室方法,真菌全套检测方案提供者,1、核心产品介绍医疗器械,IGL-800全自动型微生物 快速动态检测系统,2、核心产品介绍体外诊断试剂,GKT-1M GKT-5M,GKT-2M GKT-5M GKT-12M GKT-25M,真菌(1-3)-D检测,5/19/2019,真菌（1,3）-D 葡聚糖简介,葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，1,3-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌细胞壁上的特有成分，或称为真菌的分子标志物。,在浅部真菌感染中，1,3-D 葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高，因此能区分定植和感染。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G试验灵敏。,5/19/2019,真菌（1，3）-D葡聚糖检测原理,5/19/2019,真菌检测试剂盒,1,3-D 葡聚糖检测试剂盒-1M 试剂盒组成 反应主剂 A 0.2mL 样品处理液 B 0.9mL 产品规格 20人份/盒 1,3-D 葡聚糖检测试剂盒-5M 试剂盒组成 反应主剂 A 0.6mL 样品处理液 B 0.9mL 反应主剂溶解液 C 0.6mL 产品规格 50人份/盒,2,试剂盒规格 GKT-2M ：50人份/盒； GKT-5M ：50人份/盒； GKT-12M：50人份/盒； GKT-25M：50人份/盒。,注：不同批号，不同规格试剂盒中各组分不可以互换。,碱处理法试剂盒规格及组成,5/19/2019,结果判读,诊断值 血清 临床解释 - 阴性值 60pg/ml 无宿主因素和临床表现可排除侵袭性真菌感染 阳性值 100pg/ml 有宿主因素和/或临床表现可诊断侵袭性真菌感染 如不具备宿主因素和侵袭性真菌感染临床症状,也 不要轻易诊断 灰色区间 60-100pg/ml 结合临床动态观察 - 危急值 ：尚不明确，建议将G试验两次阳性结果作为危急值报告。,内毒素检测,Part 3,5/19/2019,细菌内毒素简介,细菌内毒素（ Endotoxin ）是G-菌细胞壁上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖（LPS）中的类脂A。,5/19/2019,细菌内毒素检测原理,内毒素检测原理,5/19/2019,内毒素检测试剂盒,1M-试剂盒组成 反应主剂 A 0.2mL 样品处理液 B 0.9mL 产品规格 20人份/盒 5M-试剂盒组成 反应主剂 A 0.6mL 样品处理液 B 0.9mL 反应主剂溶解液 C 0.6m 产品规格 50人份/盒,5/19/2019,结果判读,诊断值 血清 临床解释 - 阴性值 10pg/ml 无宿主因素和临床表现可排除革兰阴性菌感染 阳性值 20pg/ml 有宿主因素和/或临床表现可诊断革兰阴性菌感染 如不具备宿主因素和革兰阴性菌感染临床症状,也 不要轻易诊断 灰色区间 10-20pg/ml 结合临床动态观察 - 危急值 ：尚不明确，建议将内毒素试验两次阳性结果作为危急值报告。,曲霉菌半乳甘露聚糖检测,Part 4,5/19/2019,Lin SJ, et al. J Clin Infect Dis, 2001, 32(3): 358-366,烟曲霉,黄曲霉,黑曲霉,曲霉菌(Aspergillus)是广泛存在于自然界一种腐生菌，孢子较小直径2-3um，可在空气中漂浮，可通过呼吸道进入人体。 多种曲霉菌都可引起侵袭性曲霉病，如烟曲霉、黑曲霉、土曲霉、黄曲霉和构巢曲霉等。,一、曲霉菌简介,曲霉菌简介,5/19/2019,的检测原理,检测物质 本实验检测曲霉菌中的半乳甘露聚糖。 半乳甘露聚糖（Galactomannan，简写GM）是曲霉菌细胞壁上特有的成分，当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。 当曲霉在深部组织中生长时，半乳甘露聚糖可释放入血液，因此检测病人血液或者是体液中的半乳糖甘露聚糖可以作为早期诊断感染的方法。,5/19/2019,试剂盒组成,试剂盒组成： 酶标板 标准品 半乳甘露聚糖抗体 半乳甘露聚糖抗体稀释液 酶标抗体 酶标抗体稀释液 底物溶液 终止液 封板膜 存储条件：2-8冷藏保存 试剂规格：96人份/盒,5/19/2019,阳性：GM0.95g/L 阴性：GM0.75g/L 灰区：0.75GM0.95g/L，建议连续多次检测并应结合临床资料综合评价,结果判读,联合检测 Part 5,5/19/2019,Suhail Ahmad, Ziauddin U. Khan. Diagnostic value of DNA, (1-3)-D-glucan, and g