医用细胞工程学课程班复习题.doc

研究生课程班细胞工程复习题 姓名：名词解释：1、 组织培养：人和动物，昆虫及植物的某组织在试管中培养成活的生物技术。特点：细胞不从组织中失散，保持与组织原来的关系。2、细胞培养：是从活体中取出小块组织分离出的细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。3、器官培养技术：将器官切成几立方毫米大小，保持器官原有的结构和功能的培养方式。4、细胞系：是原代培养经传代成功后生成的细胞群体，群体内细胞生长稳定并逐渐趋向于一致，由原先存在于原代培养物中的细胞所组成。5、细胞株：系通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定性质或标志的细胞群。6、克隆：系指由同一个祖先细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。7、原代培养期：亦称初代培养期，为新鲜组织自体内取出接种培养至第一次传代的阶段，一般持续14周。8、次代培养：用胰酶等将原代细胞消化分散后，传代再培养的一代，此操作过程叫传代。9、贴壁型生长细胞：需贴附于底物表面生长者称为贴壁性或锚着依存性细胞，培养时需消化分散，利于观察细胞形态、结构。10、悬浮型生长细胞：无需附着物的支持表面，呈悬浮状态生长，呈圆形，易形成团块。11、接触抑制：当细胞过少，培养液与细胞的容积太大 ，均会影响细胞增殖。若培养液中的PH值变碱，则细胞生长受到抑制，甚至会脱落死亡。 12、限定性细胞系：细胞系一旦作出了一些实验指标者为限定性细胞系。13、核质体：细胞经离心1520分钟，可使99%的细胞发生脱核，形成无核的细胞质体14、胞质体： 细胞经脱核后无胞质称为核质体 15、细胞周期：是指指分裂的细胞，从前一次有丝分裂结束，到完成下一次有丝分裂所经历的整个序列过程。可分为两个时期间期和有丝分裂期。16、杂交瘤；将分泌特异抗体的B细胞和某一个永生化的骨髓瘤细胞系进行融合，杂交后代称之为杂交瘤。 17、基因导入：将外源性基因(或基因组DNA) 导入细胞中的技术称为基因转导或称基因转移，也简称为导入，是研究基因表达、结构和功能的重要研究手段。18、诱导分化：诱导分化因素的作用，可使高度分化的细胞通过重新分裂，回复到胚胎细胞状态，这种现象称为去分化或诱导分化 ，又称“逆转” （肿瘤细胞） 19、细胞凋亡：又称程序性细胞死亡，是由基因编程控制的细胞主动参与的自杀过程，是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，是一种生理性调节机制，在机体中承担着重要的调控作用。20、细胞转化：是细胞发生遗传性改变而导致细胞永生化的转变方式，由限定性细胞系转变成连续性传代细胞系，获得了永生化。21、细胞生长曲线：是细胞培养实验中最基本的指标，是测定细胞绝对增长数值和生长繁殖基本规律常用的简便方法。22、 基础培养基：人工合成培养基的主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子及其他一些辅助物质。 23、完全培养基 ： 将合成基础培养基再添加小牛血清，就称为完全培养基24、免疫荧光染色法:此法基本原理是将已知抗体或抗原标记荧光素，用此特异性试剂，浸染含有相应抗原或抗体的组织细胞标本，借助抗原抗体的特异性结合，于抗原或抗体的存在部位呈现荧光，从而可以定位标本内的抗原或抗体。25、台盼蓝染色法：用0.5%浓度的台盼蓝，用PBS配制，室温保存，该染料只对死细胞着色，测定活细胞数和计算成活百分率。 26、细胞融合:两个或两个以上细胞合并成一个细胞的过程,即将两个离体细胞在特殊融合剂的作用下使细胞膜发生一定变化，使两个或多个细胞发生融合，形成体细胞杂交，产生一个新的杂种细胞。 27、克隆形成率：生成克隆数/每皿接种细胞数*100%，克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。28、转基因技术：是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体性状的可遗传的修饰，这一技术称为转基因技术。29、细胞分裂指数：示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数/100个细胞，一般细胞分裂指数介于0.2%-0.5%，肿瘤细胞可达3-5%.30、3H-TdR掺入法：H-胸腺嘧啶核苷掺入法，原理：T细胞受PHA或特异性抗原刺激后，发生有丝分裂，细胞进入S期，此时在细胞培养液中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷，可被细胞摄入而掺入DHA，测定3H-TDR的掺入量，可判定细胞的增殖程度。 问答：1、 细胞培养的生长方式和特点如何？方式有：贴壁型生长细胞和悬浮型生长细胞特点：1、贴附并伸展：呈现各种细胞形态，细胞的贴附和伸展受一些因素的影响，如附着因子、生长因子、离子作用、温度、培养液的流动速度等，特别是小牛血清和钙、镁离子对细胞贴壁影响更为明显。 2、密度依赖性：正常细胞有接触抑制， 过密 -拥挤，生长环境恶劣，易死亡； 过稀 -PH变碱，生长抑制或死亡。2、 细胞系的细胞培养需经历哪三个阶段？正常细胞体外培养有寿命期限，大致分三个阶段：（1）原代培养（primary culture）期（2）传代期（3）衰退期3、 小牛血清在细胞培养中的作用是什么？影响血清质量的因素有哪些？何谓维持液和营养液（完全培养基）？小牛血清对细胞的作用提供细胞增殖所必须的生长因子 （A因子促进；B、C因子对细胞有抑制生长作用；D因子促进细胞粘连）。对细胞附壁有利。保护作用，解除毒性物质对细胞的毒性作用，使细胞免受冻存、搅拌的损伤。其他：利于染色体分布良好。影响血清作用的因素年龄；血型（ABA或O）；血色素；胆红质脂肪酸；红细胞生成素；肿瘤患者血清；浓度；支原体污染。将合成基础培养基再添加小牛血清，就称为完全培养基4、 影响细胞生长的因素有哪些？为什么？一、温度:一般哺乳类及禽类细胞体外培养的适宜温度是3738， 昆虫细胞25+1高温：蛋白变性，酶失活，类脂质破坏.室温：代谢下降，可短期保存（4 20 ）低温：在降到冰点以下时，细胞因胞外水和胞质结冰而受损死亡。但若向培养液中加入甘油或二甲亚砜等保护剂，以防止胞内冰结晶的形成而刺破胞膜，可用作细胞种子长期冻存。二、渗透压:细胞在高渗溶液或低渗溶液中，可以立即发生皱缩或肿胀、破裂。 不同的细胞需要不同的渗透压，可选用不同渗透压的培养基来适应这一需求。三、气体环境和pH:O2：细胞呼吸，利于生物氧化，促进生长。CO2 :维持培养液的pH（细胞耐酸耐碱，增加CO2将使pH下降 ）四、无毒和无菌五、辐射线和超声波（一）可见光：可见光的各种有色光能引起细胞退变，延长核分裂的间期，还可显著降低细胞的附壁能力。（二）紫外线：核分裂、有丝分裂受破坏，细胞脱水收缩 、起泡和细胞肿胀。（三）放射线：X、射线使核分裂数减少并出现不正常的核分裂。（四）超声波和振动：细胞紊乱，胶体结构变化，染色体畸变六、细胞接种浓度（密度）培养液与细胞的容积比应小于2000:1，接种密度太低或太高都不利于细胞的生长增殖，如果接种密度太高，每个细胞周围培养液的容积降至0.007mm3以下，妨碍细胞的增殖。七、容器转动速度和悬浮搅动速度:搅拌速度既不能太快，也不能太慢。太慢，细胞易结团、下沉和贴壁；太快，容易起泡沫，细胞易窒息致死，搅动易使细胞受机械损伤。5、 原代细胞培养方法有哪些？（标题）组织块培养法、消化培养法、悬浮细胞培养法、器官培养6、 分离培养骨髓细胞有何用途？经体外培养贴壁的骨髓基质细胞，可用于细胞因子自分泌和诱导分泌能力的测试。骨髓基质细胞能分泌多种调节免疫和造血功能的细胞因子，证明基质细胞能支持造血、提供造血微环境，也为体外扩增干细胞用于骨髓移植提供了新技术、新方法。扩增的基质细胞不仅可直接应用于临床治疗骨髓抑制、成骨能力障碍性疾病，而且可通过基因导入法开展基因治疗的研究。7、 细胞污染的类型有那些？如何预防？一、细菌：较常见，G+菌较多，多浑浊。二、真菌：最常见，霉菌较多，见菌丝。三、支原体：常见，不易检测。四、病毒：影响疫苗生产。五、非同种细胞：细胞系丢失。六、化学成分：出现毒害或营养不良。预防：最有效，严密消毒、谨慎操作8、 MTT比色法的主要原理是什么原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。此法已广泛运用于一些生物活性因子的活性检测，抗肿瘤药物的筛选、细胞毒性试验和肿瘤放射敏感性的测定。何谓细胞脱核技术？脱核后可收获哪两种产物？细胞脱核技术有何应用价值？细胞经松胞菌素B以10mg/L浸没，以12000r/min离心1520分钟，可使99%的细胞发生脱核，形成无核细胞质体和无胞质的核质体脱核技术可用于细胞融合、胞质、胞核、胞膜的成分分析及基因转移技术等方面的研究。9、 哪些诱变剂可引起细胞转化？细胞转化研究有什么医学意义和应用价值？物理因素：如放射线、温度、电磁波、药物等；化学因素：如甲基胆蒽、甲基硝基亚硝基胍类化合物等；生物因素，如毒素、黄曲霉素、逆转录病毒等；促癌剂( Promotor )：如TPA培养细胞转化研究可疑致癌因素的作用有很大的实用价值，已成为研究癌变机制、癌变因素的重要方法。10、 有哪些检测方法可证明细胞凋亡？（一）光镜的形态学观察： 普通光镜：细胞圆缩，核浓缩、破碎。透射光镜：凋亡小体。（二）细胞DNA提取物的核酸电泳（三）MTT法： （四）荧光法：（五）流式细胞仪检测法: （六）Bcl-2、Bax胞浆蛋白检测：（七）Bcl-2/Bax基因表达检测：（八）其他方法：11、 进行细胞毒实验常用哪些方法？方法：（一）淋巴细胞对瘤细胞的细胞毒试验（二）抗体加补体的细胞毒试验（三） ADCC试验（四） NK细胞毒试验之一 51Cr释放法（五） NK细胞毒试验之二3H-TdR法（六）可溶性杀伤因子活性检测MTT法（七） LAK细胞毒试验125I释放法（八） CTL的细胞毒试验12、 何谓细胞对药物的敏感性？常用哪些方法检测？体外细胞对不同药物所引起的形态结构和生理、代谢的变化。方法：1、美蓝法： 2、染料（台盼蓝、伊红）排除法： 3、生长曲线测定法： 4、集落形成试验法5、噻唑盐（ MTT ）比色法6、放射性同位素的3H-TdR掺入法7、抗癌药物的效能比测定法（CFU-F测定法）： 13、 肿瘤细胞为什么可诱导分化？其诱导剂诱导细胞分化的原理如何？肿瘤细胞的诱导分化： 由于肿瘤细胞并没有丧失调控正常生长和分化的基因表达能力，故癌变有可能因诱导分化而逆转诱导剂的作用：1）诱导肿瘤细胞分化基因重新启动，使恶性的癌基因受到抑制或灭活。（2）使膜表面受体分化导致正常基因表达以产生分化表型。（3）抑癌基因的活化/复活，可表现为细胞生长抑制，出现典型的形态特征，产生特异的糖蛋白、酶及分泌物，出现一些正常细胞的生理功能等。14、 用细胞培养方法研究病毒有何优点？有何应用价值？1、没有隐性感染 2、没有免疫力 3、容易选择易感细胞 4、接种量大 5、培养条件易于控制 6、提高了疫苗的产量和质量 7、加速病毒分离过程 8、真核基因病毒载体的理想宿主价值：可用于病毒的分离鉴定，抗原的制备及疫苗、干扰素的生产，病毒性疾病诊断和流行病学调查等，近年来，还用于繁殖病毒载体以用于基因治疗。15、 将基因向细胞内转导的技术包括哪些？1、磷酸钙DNA共沉淀法2、脂质体介导法3、电击法(电穿孔技术) 4、DEAE葡聚糖法5、细胞显微注射法 17、流式细胞仪技术有何应用价值？你打算在你研究内容中如何应用？流式细胞术操作简便，灵敏度高，测定速度快，应用范围广，可用于测定细胞活力、繁殖周期和细胞定型分析，也可区分死亡细胞、分裂细胞和静止细胞群，既可测定DNA和RNA、测凋亡峰，又可测蛋白量，尤其是胞浆蛋白。18、细胞大量培养包括那些控制要素？1、 容器生长表面的选择和处理(静置贴壁培养) 玻璃应选用明矾-硅硼酸钠玻璃(例如Pyrex)；塑料表面常用聚苯乙烯，不锈钢也可选用，但处理和清洗时要用酸洗2、 悬浮培养基中的添加剂 保护剂：羟甲基纤维钠(纤维素) ；消泡剂：硅油/pluronic F 3、 培养条件：（1）温度（2）pH（3）细胞生长期的选择 应选择对数生长期的细胞接种培养；（4）接种细胞密度 （5）搅拌速度：4、 培养基和营养物质的选择 常用Eagle(BME或MEM)加25%小牛血清，5、 培养系统的控制 (1) pH调控系统： (2) 通气调控系统： (3) 通过测定氧化还原势能（ORP），可监控细胞生长动态及对数生长期19、 细胞培养在肿瘤研究和免疫学研究中有何应用价值？在肿瘤研究中的价值：一、肿瘤病因和发病机制的研究1、肿瘤形成的条件和微环境2、细胞转