血型与交叉配血

血型和交叉配血（blood group and cross matching test）,本演示文稿可能包含观众讨论和即席反应。使用 PowerPoint 可以跟踪演示时的即席反应，在幻灯片放映中，右键单击鼠标请选择“会议记录”选择“即席反应”选项卡必要时输入即席反应单击“确定”撤消此框此动作将自动在演示文稿末尾创建一张即席反应幻灯片，包括您的观点。,实验诊断学教研室,主要内容,血型ABO血型系统ABO血型鉴定Rh血型系统 交叉配血,血型定义,各种血液成分的遗传多态性标记以血型抗原抗体为表现形式的遗传性状由血型基因决定，是红细胞的主要特征之一人体各种细胞和各种体液成分抗原性差异,RBC血型系统Blood group system,血型系统：由若干个相应关联的抗原抗体组成的血型体系。2002年国际输血协会将红细胞表面抗原分成29个血型系统。ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统。血型鉴定和交叉配血是保证输血安全的主要措施。,血型一、ABO血型系统,本演示文稿可能包含观众讨论和即席反应。使用 PowerPoint 可以跟踪演示时的即席反应，在幻灯片放映中，右键单击鼠标请选择“会议记录”选择“即席反应”选项卡必要时输入即席反应单击“确定”撤消此框此动作将自动在演示文稿末尾创建一张即席反应幻灯片，包括您的观点。,背景：为首个描述的红细胞血型系统，20世纪初由奥地利科学家Landsteiner提出，也是应用最广、与临床输血最密切、最重要、研究和认识较深入的一个血型系统。,发现 在实验中发现,一个人的红细胞,在遇到某些人的血浆时这些红细胞会发生凝集;遇到另一些人的血浆时,却不发生凝集.为什么会有这样的不同呢?,人类的红细胞含有两种凝集原,分别叫做A凝集原和B凝集原;人类血清中则含有与它们相对抗的两种凝集素,分别叫做抗B凝集素和抗A凝集素.按照红细胞所含A,B抗原的不同,把人类血液分成四型:A型 B型 AB型 O型.,（一）ABO血型分类根据红细胞上A、B两种抗原及血清中抗A、抗B抗体不同,血 型 RBC上抗原 血清中抗体 A A 抗B B B 抗A O - 抗A,抗B AB AB -,请你来鉴定,B,AB,O,A,凝集,凝集,凝集,凝集,不凝集,不凝集,不凝集,不凝集,（二）ABO血型系统遗传：,ABO血型系统抗原的合成受位于9号染色体长臂(9q34)上的IA，IB，Io三个等位基因控制。IA和IB为共显性、Io为隐性基因，父母双方各遗传给子代一个基因，由此构成6种基因型和4种表型.,基因型 表型 OO O AO,AA A BO,BB B AB AB,ABO血型的遗传,父亲 母亲,表型 A B,可能的基因型 ？,子女可能的基因型 ？,子女可能的表型 ？,ABO血型的遗传,父亲 母亲,表型 A B,可能的基因型 AA AO BB BO,子女可能的基因型 ？,子女可能的表型 ？,ABO血型的遗传,父亲 母亲,表型 A B,可能的基因型 AA AO BB BO,子女可能的基因型 AB AO BO OO,子女可能的表型 ？,ABO血型的遗传,父亲 母亲,表型 A B,可能的基因型 AA AO BB BO,子女可能的基因型 AB AO BO OO,子女可能的表型 A型 B型 AB型 O型,（三）ABO血型系统抗原1ABO血型系统抗原性质及结构,完全抗原：由多肽和糖链组成的糖蛋白多肽:抗原性，糖链:特异性抗原：A、B和H三种，分别受A、B和H基因控制H抗原：形成A、B抗原的结构基础H物质：H抗原存在于ABO各型红细胞上，以O型红细胞最多。H物质抗原性弱，血清中无抗H抗体。,ABO血型系统的分子基础,ABO血型抗原决定簇是一种特异性多糖，ABO抗原有共同的前身物H物质。 H物质最后的一个糖基决定ABO(ABH)血型的型别。,A抗原和B抗原的合成是以H物质为前提的,O型红细胞也有H物质但不能产生A抗原和B抗原：,基因,酶,合成抗原,在ABO血型物质合成过程中：,控制,控制,ABO血型又称为“ABH血型”。,首先是H基因控制的L一岩藻糖转移酶的合成，它使一个分子的岩藻糖(Fuc)加在血型前体物质上，形成H物质(H抗原)：,然后IA基因合成A型转移酶，它使个N乙酰基半乳糖加在H物质末端糖残基上、形成A抗原：,IB基因控制合成B型转移酶，它将一个半乳糖分子加在H物质末端糖残基上，形成B抗原。,A、B两种抗原的差异，只在于一个单糖残基的不同。Io基因为无效等位基因、所以O型红细胞只有H物质，不能由此形成A抗原或B抗原。O型RBC的H抗原浓度最高，而A、B型仍有一定数量未转变的H抗原，其H抗原活力强度的顺序为: OA2A2BBA1A1BAB型红细胞受IA和IB基因控制，能产生A和B两种抗原。,2ABO血型系统抗原产生及存在部位,产生妊娠5-6w胎儿RBC可产生ABH抗原出生时抗原的抗原性弱20岁左右时达高峰老年的抗原性下降血型抗原一般终身不变ABH抗原的表型，可因种族、基因交互影响及疾病的状态而异。,ABO血型系统抗原的分布,ABH抗原主要存在于RBC 膜上，也分布于许多细胞上。组织细胞合成并分泌的水溶性ABH血型抗原多为半抗原，称为“血型物质”。存在于许多体液中，唾液中最高，其次为血清、尿液、精液、羊水等。凡体液中有血型物质者为分泌型，无血型物质者为非分泌型。,血型物质存在的意义：,辅助鉴定血型 检查羊水，预测胎儿ABO血型等。法医鉴定：利用RBC凝集抑制试验，可检查脏器和组织血型。,1.按照种类分为抗A、抗B抗体2.按照来源分为天然抗体和免疫性抗体。,（四）.ABO血型系统抗体,天然抗体和免疫性抗体,在ABO人群中有规律自然发生的抗体称为天然抗体，没有可察觉的免疫刺激。由于血型不配合输血、妊娠、注射纯化的血型物质或含有血型物质的病毒或细菌产物可以产生免疫性抗体。新生儿的抗体来自母体的为IgG型免疫球蛋白。这两种性质抗体均可以引起血管内溶血。,天然抗体与免疫抗体的鉴别,抗体产生,出生后3-6个月才开始出现，青春期达高峰。产生抗体的功能可持续终身，效价随年龄增高而逐渐降低。新生儿血清中可检测出的抗体常是来自母体的IgG，偶尔也有胎儿自身产生的IgM。ABO血型抗体滴度变化大：O型人抗A滴度高于B型人B型人的抗A 又高于A型人中的抗B,（五）ABO系统亚型,亚型是指同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异所引起的变化。ABO血型系统中以A亚型最多见。A型中的两个主要亚型是A1和A2。在AB型中还有A1B和A2B亚型。,A亚型,具有A抗原的红细胞可以被抗A1凝集称为A1或A1B，红细胞不被抗A1血清凝集，称为A2型或A2B型。 A1型RBC上既有A抗原又有A1抗原，而A2型RBC上只有A抗原而无A1抗原。我国人中A2和A2B型在A、AB型人中分别不到1%。,A1型与A2型鉴定,检查亚型的目的,防止误定血型，避免输血反应A1与A2之间输血可能引起输血反应亚型抗原性弱，易漏检或误定,A2型易误定血型的原因,A2型及A2B型的抗原性较弱，如B型血清中含抗A1多，抗A少，致使抗A血清效价低，不能在体外与A2型，或A2B型RBC发生反应，易误定血型，因此要求抗A效价比抗B高。,两型受血者的抗A 抗体均可能与输入的A2型RBC发生溶血反应,A2型易误定血型的后果,二、ABO血型鉴定,检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判断血型。 常规的方法包括正向定型与反向定型正定型：已知抗体特异性的血清检查红细胞抗原反定型：已知血型红细胞检查血清抗体使用O型血作正反定型，其目的是防止误定血型。,ABO血型鉴定常用方法,盐水凝集法凝胶微柱法,1盐水凝集法,ABO血型抗体一般IgM，属为完全抗体IgM抗体分子链较长，能克服红细胞表面排斥力，同时分子量较大，它能与相应抗原特异性结合，在生理盐水中发生肉眼可见的凝集现象。,简便，不需要特殊仪器玻片法：操作简单，不需要离心，适于大规模血型普查反应时间长，易忽略较弱的凝集而导致定型错误。不适于反定型和交叉配血。试管法：反应时间短适用于急诊定型。可发现亚型或较弱抗原抗体反应，结果判断可靠，为常规检查方法。,2凝胶微柱法,凝胶具有分子筛效应和亲合效应分子筛效应：低速离心后，凝集红细胞悬浮在凝胶中，而未被抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部。亲合效应：红细胞抗原与相应抗体结合结果观察：肉眼/血型分析仪,操作标准化，结果特异、准确可靠，重复性好、灵敏度高。可手工、半自动及全自动操作不足之处：需要特殊试剂和离心机成本较高。,红细胞的常规ABO定型,正向定型 反向定型 抗A 抗B 抗A,B A细胞B细胞O细胞 - - - + - O + - + - + - A - + + + - - B + + + - - - AB,判断结果,【质量控制】,1标准血清质量必须符合要求2反定型时应注意被检者血清标本问题 3要注意被检查红细胞标本问题4器材质量控制 5综合分析试验结果,1标准血清质量人ABO血型：血清抗体 / 单克隆抗体,高度特异高效性抗A1：128抗B1：64高亲和力无冷凝集素/稳定性无菌灭活补体,2反定型的血清问题,标本新鲜，严防污染婴儿及老年人血清中ABO抗体效价较低，反定型时可出现不凝集或弱凝集。冷凝集素干扰血型鉴定。疾病影响：丙种球蛋白缺乏症：血清中缺乏抗A、抗B而不出现凝集或弱凝集某些肝病和多发性骨髓瘤：血清球蛋白增高引起假凝集。,3正定型的红细胞问题,标本新鲜，严防污染肠道细菌感染，红细胞出现类B抗原，与抗B血清凝集。抗原位点过少/弱/消失：婴幼儿、老年人白血病或恶性肿瘤血浆成分：可能影响鉴定结果，要用盐水多次洗涤红细胞。,4器材质量控制,器材要清洁、干燥，专管专用同时进行正反定型，必要时设置对照注意反应条件的一致性注意亚型的判断，必要时用显微镜复查,5综合分析试验结果,正反定型不一致时须查明原因两人核对血型结果再发报告,ABO血型检查的临床意义,输血：一般同型输血 新生儿溶血病：母子ABO血型不合使胎儿发生溶血几率增加器官移植：一般选择同型ABO血型与疾病有关,三、Rh血型系统,本演示文稿可能包含观众讨论和即席反应。使用 PowerPoint 可以跟踪演示时的即席反应，在幻灯片放映中，右键单击鼠标请选择“会议记录”选择“即席反应”选项卡必要时输入即席反应单击“确定”撤消此框此动作将自动在演示文稿末尾创建一张即席反应幻灯片，包括您的观点。,最复杂的红细胞血型系统之一1937-1939年Landsteiner和Wiener用恒河猴（rhesus monkey ）红细胞免疫家兔和豚鼠得到的抗血清将人红细胞分为Rh阴性和Rh阳性。红细胞含有与恒河猴红细胞相同的抗原，取名为Rh抗原。 临床上将RBC膜上含D抗原者为Rh阳性，无D抗原者为Rh阴性。,（一）Rh血型系统的命名,FisherRace的CDE表述简单易懂，临床常用 Wiener假说（Rhhr命名）Rosenfield等人提出的基因数字表达ISBT红细胞抗原命名专业组：以Rosenfield的表述为基础规范了Rh血型的字母/数字表示方式。,CDE命名法,遗传基因位于1号染色体短臂上的连锁基因，各有三个位点：CDE每位点由一对等位基因组成：D/d、C/c、E/e。CDE连锁基因以复合体的形式遗传三个连锁基因可产生8种基因组合和36种遗传型,（二）Rh抗原,抗原强度仅次于ABO血型系统已发现45种，与临床关系密切的有5种依其抗原性强弱排列：为DECce共5种Rh抗原是胎儿早期就充分发育并维持整个一生，脐带血或新生儿的红细胞Rh血型与成人一样强。,（三）Rh血型抗体,Rh抗体产生极少数是天然抗体，如抗E、抗CW绝大多数：输血或妊娠产生的免疫性抗体Rh抗体种类 5种，即抗D、抗E、抗C、抗c、抗e最常见的是抗D，其余4种依次为抗E、抗C、抗c、抗e。盐水中可检测出某些Rh抗体，具有IgM性质。,（四） Rh血型鉴定,只使用抗D血清检查被检RBC表面有无D抗原以确定被检者的Rh血型配血不合、亲子鉴定、家系调查、产前检查、确定纯合子或杂合子时需做Rh血型全部表现型的定型鉴定,Rh血型鉴定常用的方法与评价,1.酶介质法2.低离子强度盐水实验 3.抗人球蛋白法（Coombs实验）4.聚凝胺法5.人源盐水介质抗D试验 6.凝胶微柱法,1.酶介质法,Rh抗体属IgG型不完全抗体，不能在盐水中与相应红细胞发生凝集。木瓜酶或菠萝酶可破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面负电荷，使红细胞之间的距离缩小；同时酶还可以部分地改变红细胞表面结构，使某些抗原得以暴露，促使Rh血型系统的抗原与相应的不完全抗体IgG抗体反应，从而使红细胞发生肉眼可见的凝集。 本法简单快速，但灵敏度低。,2.低离子强度盐水实验,当降低介质的离子强度时，可减少红细胞外围的离子云，促进IgG型Rh抗体与红细胞结合发生凝聚反应。当离子强度由0.17降至0.03时，可提高抗D抗体与红细胞结合率，所以在低离子的强度盐水中，能缩短抗原与抗体的反应时间，并提高其灵敏度。,3.抗人球蛋白法（Coombs实验）,最早用于检查不完全抗体的方法，可用作Rh血型鉴定。被检者血中的不完全抗体与RBC结合形成抗原抗体复合物，使RBC处于致敏状态，抗人球蛋白作为第二抗体，通过连接致敏RBC表面的Rh抗体，与致敏RBC发生凝集反应。本法虽较灵敏可靠，但操作复杂，费时，试剂贵，不利于急诊检查和血库的大批量工作。,4.聚凝胺法,聚凝胺是带有高价阳离子的多聚季铵盐，溶解后能产生正电荷可中和红细胞表面的负电荷，减少细胞间排斥力，促进Rh抗体致敏的红细胞发生特异性的不可逆凝集。快速、灵敏、准确性高，应用较广。,5.人源盐水介质抗D试验,免疫球蛋白变性剂作用于人源IgG类抗D血清，使其成为具有大分子IgM性质，在盐水介质中可与相应RBC发生凝聚反应。操作简单、灵敏、特异，应用广泛，但试剂较贵。,凝胶微柱法(卡式),原理：微管内有凝胶颗粒和试剂。凝胶颗粒具有分子筛作用，离心后，不凝集的红细胞通过全程进入微管底部，而凝集的红细胞则悬浮停留在颗粒中。操作标准化，结果特异、准确可靠，重复性好、灵敏度高，但需要特殊试剂和离心机，成本较高。,Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因,高蛋白试剂引起缗钱状凝集纤维蛋白造成的凝块定型试剂中存在的其它抗体多凝集细胞造成的假阳性鉴定器材和试剂血清被污染,Rh血型鉴定可能出现假阴性的原因,受检细胞悬液浓度太高，与试剂血清比例失调。漏加或错加定型试剂观察结果时摇动用力过度，摇散弱凝集。试剂血清保存不当引起变质RBC表面其他抗体干扰,质量保证,检测前标本：新鲜，防止污染。试剂：使用有效期内的合格试剂。抗血清妥善保存，防止污染。器材：清洁干燥。,质量保证,检测中：严守操作规程严格控制反应条件的一致每次需设置阴性、阳性、试剂对照必要时须用显微镜观察确认,质量保证,检测后：核对无误后发报告标本需4保存1周，以备复查,Rh血型系统的临床意义,1.Rh血型与输血Rh+血2.Rh血型与妊娠3.新生儿溶血的诊断,Rh-患者,抗Rh抗体,再次输入Rh+血,溶血,四.交叉配血,目的：发现ABO血型的不规则抗体发现ABO血型以外的配血不合防止因错误定型所致的输血事故,交叉配血,主侧交叉配血 用患者血清(Ps)与供血者红细胞(Dc)进行试验次侧交叉配血 供血者血清(Ds)与患者红细胞(Pc)进行试验,操作,盐水介质配血试验操作表,结果判断,1 主次两测均无凝集，示为同型配血，无输血禁忌，可以输血。若主、次两管和自身（Ps+Pc）对照均显凝集，可能为自身抗体所致，应采用恰当方法，重新交叉配血。如发现任何一测或两测有凝聚，示血型有误，即异型配血，应立即复查血型，绝对不能随便发血。,交叉配血试验方法,1.盐水介质配血2.酶介质配血菠萝酶，木瓜酶3.抗球蛋白介质配血经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法4.聚凝胺介质配血5.微柱凝胶方法配血,1.盐水介质配血方法,离心看结果,盐水配血法,优点：反应迅速，如有不配合问题， 可立即显示出来，故使用方便；缺点：只能检出完全抗体，若要检测不完 全抗体，则需采用其他配血法。不完全抗体常用以下配血法。,酶介质配血方法,主次侧均加酶,2.酶介质配血方法,离心看结果,37 ,37水浴30分钟,酶介质配血法,（木瓜酶、菠萝酶等） 优点：易检出Rh血型抗体，操作简 便，试剂易购得，敏感性高。 缺点： 操作较盐水配血法繁杂。,3.抗人球蛋白配血法,患者,献血者,主侧,次侧,37水浴30分钟,三洗,抗人球蛋白配血法,加抗球蛋白,离心看结果,阳性,阴性,抗人球蛋白介质配血法,优点：检查不完全抗体最可靠； 缺点：试剂供应少，价格较贵，操作步骤较繁杂，仅适用于某些特殊需要。,4.聚凝胺配血法,聚凝胺法：快速灵敏、准确可靠。可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现引起溶血性输血反应的决大多数抗体。聚凝胺配血法的原理：聚凝胺是带有高价阳离子的多聚季氨盐，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，缩小了其间之距离，有利于红细胞产生凝集。,聚凝胺(Polybrene)配血方法,室温放置1 分钟,主次侧均加聚凝胺,聚凝胺(Polybrene)配血方法,离心,聚凝胺引起红细胞非特异性凝集,主次侧均加重悬液看结果,5.微柱凝胶方法配血,以经典的抗人球方法与先进的判读方法有机的结合成了一体。在透明的微柱内置有凝胶，内装有抗人球抗体，通过控制凝胶的浓度而形成一定的分子筛。利用微柱凝胶的微孔过滤作用，红细胞上的抗原与抗体反应后离心，发生了凝集的红细胞将被阻滞在凝胶之内，判读为阳性；而未凝集的单个红细胞则穿过微孔运动至柱底，判读为阴性。,微柱凝胶方法配血,优点：操作标准化，结果特异、准确可靠，重复性好、灵敏度高，结果可长期保存。缺点：需要特殊仪器试剂和离心机成本较高。,质量保证,检测前建立标本签收制度，审查申请单与标本是否相符。标本：血清和血浆均可，血清更佳。溶血的标本不能使用，因为可能掩盖抗体引起的溶血；对输液的病人允许从输液管中抽血，但要用盐水冲洗管道，并弃去最初抽取的5ml血液；细胞最好洗涤,质量保证,检测前详细询问病人的病史，包括病人的临床诊断、妊娠史、输血史及近期使用的药物。有妊娠史和输血史的血标本要在48h内留取。试剂应在有效期内。实验器材清洁干燥，防止溶血。,质量保证,检测中：工作人员要有高度的责任感实验器材要专管专用RBC须洗涤，RBC浓度与血清比例要适当严格控制反应条件的一致有输血史和妊娠史的需同时用酶介质和抗人球蛋白交叉配血用血量大时供血者之间也应交叉配血必要时用显微镜观察鉴别,质量保证,检测后：患者和供血者标本应置4冰箱保存7天以备复查。仔细分析配血时的凝集或溶血现象，查明原因。认真填写报告和登记，核对无误后才能发报告。如有疑问及时联系临床。,临床意义,保证输血安全：及时纠正定型错误，避免输血反应。发现亚型和不规则抗体ABO血型系统中含有抗A1血清与A1红细胞交叉配血时可出现凝集Rh或其他血型不同时也可发生严重的输血反应,ABO血型鉴定及交叉配血错误可以引起严重的后果。鉴定结果错误及交叉配血错误因素主要有技术问题及血型本身的问题,造成血型鉴定及交叉配血错误的原因,鉴定结果错误因素：操作原因,1.用了不洁的玻璃器皿或污染的血清、红细胞。2.红细胞与血清的比例不当，以及过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。3.将溶血误认为阴性结果。4.温度过高造成假阴性。5.搞错标本或试剂等。6.ABO标准血清质量不高。,鉴定结果错误因素：血型的问题,1.患者未产生ABO抗体或抗体被抑制2.被检查红细胞异常3.被检者血浆成分异常,1.患者未产生ABO抗体或抗体被抑制：,新生儿老年人白血病、淋巴瘤以及使用免疫抑制药患者先天性丙种球蛋白缺乏症骨髓移植患者等。,2.被检查红细胞异常,弱A或弱B亚型白血病时可使A或B抗原减弱，而误定为O型霍奇金病也有类似白血病的情况类B抗原：大肠杆菌O86感染时，可使O型、A型患者的RBC获得一种抗原细菌性凝集,3.被检者血浆成分异常,某些疾病如多发性骨髓瘤、霍