实验五、维生素C的定量测定

1、实验五实验五维生素维生素C C的定量测定的定量测定（2 2，6-6-二氯酚靛酚法）二氯酚靛酚法）一、目的与任务一、目的与任务u学习维生素学习维生素C 2C 2，6-6-二氯酚靛酚定量测定法的原理二氯酚靛酚定量测定法的原理和方法。和方法。u进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。u掌握果蔬类样品的处理及数据分析掌握果蔬类样品的处理及数据分析u了解蔬菜、水果中维生素了解蔬菜、水果中维生素C C含量情况。含量情况。 维生素维生素C C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，又称抗坏血酸。对物质代谢的调

2、节具有重要的产生坏血病，又称抗坏血酸。对物质代谢的调节具有重要的作用。作用。 维生素维生素C C是具有是具有L L系系糖型的不饱和多羟基物糖型的不饱和多羟基物，属于，属于水溶性水溶性维生素维生素。 分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量丰富。含量丰富。 二、实验原理二、实验原理维生素维生素C脱氢维生素脱氢维生素C维生素维生素 的结构的结构C可以解离出两个可以解离出两个H+烯二醇结构具有强还原性烯二醇结构具有强还原性脱氢形式不稳定易

3、降解脱氢形式不稳定易降解二酮古乐糖酸二酮古乐糖酸+H2O-H2O（还原型）（还原型）（氧化型）（氧化型）有活性有活性还原型与氧化型可相互转化还原型与氧化型可相互转化O 草酸草酸+ +苏阿糖酸苏阿糖酸易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。酸性溶液酸性溶液(pH4)较稳定，中性以上极不稳定。较稳定，中性以上极不稳定。对光、热、金属离子（铁、铜）敏感对光、热、金属离子（铁、铜）敏感。容易被氧化容易被氧化。维生素维生素C的特性的特性抗坏血酸分子中存在抗坏血酸分子中存在烯醇式结构烯醇式结构 因而具有很强的因而具有很强的还原性还原性，氧化失去两个氢原子，氧化失去两个氢原子

4、而转变成脱氢抗坏血酸。而转变成脱氢抗坏血酸。结构结构2,6-2,6-二氯酚靛酚钠盐特点二氯酚靛酚钠盐特点 在酸性环境中氧化型在酸性环境中氧化型2 2，6-6-二氯酚靛酚呈二氯酚靛酚呈红色红色，在中性或，在中性或碱性溶液中呈碱性溶液中呈蓝色蓝色。 2,6- 2,6-二氯酚靛酚钠盐（二氯酚靛酚钠盐（C C1212H H6 6O O2 2NCNCl2l2Na)Na)染料具有染料具有氧化性氧化性，可，可氧化抗坏血酸而其本身被还原为氧化抗坏血酸而其本身被还原为无色无色的衍生物，可作为维生素的衍生物，可作为维生素C C含量测定的含量测定的滴定剂和指示剂滴定剂和指示剂。 本实验在本实验在酸性条件下酸性条件下

5、进行，此条件下副反应进行得很慢。进行，此条件下副反应进行得很慢。 用用2 2，6-6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗血酸尚未完全被氧化时，滴下的抗血酸尚未完全被氧化时，滴下的2 2，6-6-二氯酚靛酚立即被二氯酚靛酚立即被还原为还原为无色无色，当抗坏血酸全被氧化时，滴下的，当抗坏血酸全被氧化时，滴下的2 2，6-6-二氯酚二氯酚靛酚溶液呈靛酚溶液呈红色红色。所以在滴定过程中当溶液从。所以在滴定过程中当溶液从无色转变为微无色转变为微红色时红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，为滴定的终点。，表示抗坏血酸全部被氧化，为滴定的终点。 根据滴定消耗染料

6、标准溶液的体积，可以计算出被测定根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸（维生素样品中抗坏血酸（维生素C C）的含量。）的含量。三、材料、试剂、器材准备三、材料、试剂、器材准备试剂配制：试剂配制：材料：材料：苹果、梨、青椒、苹果、梨、青椒、VCVC饮料等饮料等l 1 1、2 2草酸溶液草酸溶液l 2 2，6-6-二氯酚靛酚溶液：二氯酚靛酚溶液： 称取称取0.21 g0.21 g碳酸氢钠，碳酸氢钠，0.26g 0.26g 2,6-2,6-二氯酚靛酚，溶于二氯酚靛酚，溶于250ml250ml蒸馏水中，稀释到蒸馏水中，稀释到1000ml. 1000ml. 过滤，装入棕色瓶内，置

7、冰箱内备用，保存不超过过滤，装入棕色瓶内，置冰箱内备用，保存不超过3 3天。天。每次临用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。每次临用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。l 标准抗坏血酸溶液：标准抗坏血酸溶液：准确称取纯抗坏血酸结晶准确称取纯抗坏血酸结晶100mg100mg溶于溶于1 1草酸溶液定容到草酸溶液定容到100ml100ml。装入棕色瓶中贮存冰箱内。装入棕色瓶中贮存冰箱内。器材准备：微量滴定管（微量滴定管（5ml5ml）、匀浆器、离心机等）、匀浆器、离心机等微量滴定管的操作：微量滴定管的操作：l 检查：检查：用蒸馏水检查滴定管的活塞是否漏水，活塞转动是否用蒸馏水检查滴定管的活塞是否漏水，活

8、塞转动是否灵活。灵活。l 装滴定剂装滴定剂：摇匀试剂溶液，用试剂润洗滴定管：摇匀试剂溶液，用试剂润洗滴定管2-32-3次，约装次，约装10-15ml10-15ml左右。左右。l 排气泡排气泡：调节起始刻度（最好在整：调节起始刻度（最好在整mLmL的刻度处，或调零，并的刻度处，或调零，并记录初始刻度数。记录初始刻度数。l 滴定：滴定：勿顶活塞，防漏液，轻轻转动活塞，滴定时边用手腕勿顶活塞，防漏液，轻轻转动活塞，滴定时边用手腕轻轻摇动锥形瓶，近终点时要轻轻摇动锥形瓶，近终点时要“半滴半滴”操作操作冲洗。冲洗。l 观察颜色的变化和读数观察颜色的变化和读数。注意滴定管要垂直，视线与刻度平。注意滴定管要

9、垂直，视线与刻度平行，保留行，保留小数点后三位小数点后三位。l 滴定完毕，清洗干净，凉干后在活塞处放一小纸片存放。滴定完毕，清洗干净，凉干后在活塞处放一小纸片存放。四、操作方法四、操作方法样品制备：样品制备： 水洗干净整株新鲜蔬菜或水果，用纱布或吸水水洗干净整株新鲜蔬菜或水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。称取纸吸干表面水分。称取5g5g，加入，加入20ml 220ml 2草酸，匀草酸，匀浆，定容至浆，定容至50mL50mL，8000rpm8000rpm10min10min离心，留上清。离心，留上清。为什么要用为什么要用2%2%草酸溶液配制样品？草酸溶液配制样品？ 准确量取准确量取1ml1ml标

10、准抗坏血酸标准抗坏血酸溶液加入溶液加入9ml 19ml 1草酸溶液于草酸溶液于100ml100ml锥形瓶。锥形瓶。 用用2 2，6-6-二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微红色持续二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微红色持续1515秒秒不退色为终点。不退色为终点。 计算计算2 2，6-6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每二氯酚靛酚溶液的浓度，以每ml2ml2，6-6-二氯酚二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的靛酚溶液相当于抗坏血酸的mgmg数来表示。数来表示。平行平行2 2次次 取取10ml 110ml 1草酸液做空白对照，按以上方法滴定。草酸液做空白对照，按以上方法滴定。标定：标定：为什么要做标定？为什么要做标定？

11、 量取量取10ml10ml样品提取液于锥形瓶中。用微量滴定管，以样品提取液于锥形瓶中。用微量滴定管，以2 2，6-6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微粉红色色，持续二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微粉红色色，持续1515秒钟不退色为终点，记录所用秒钟不退色为终点，记录所用2 2，6-6-二氯酚靛酚的二氯酚靛酚的mlml数。数。 另取另取10ml 210ml 2草酸做空白对照滴定。草酸做空白对照滴定。 样品及空白同时各做样品及空白同时各做2 2份。份。滴定：滴定：l 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被其他还原剂整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被其他还原剂氧化。每次滴定过程一般不超过

12、氧化。每次滴定过程一般不超过2min2min。l 滴定所用的染料应在滴定所用的染料应在1-4ml1-4ml间。样品含间。样品含VCVC太高或太低时，可太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。l 每个小组需测出每个小组需测出8 8个数据个数据，完成后数据教老师检查：标定、，完成后数据教老师检查：标定、样品测定、样品测定、1%1%草酸对照、草酸对照、2%2%草酸对照各草酸对照各2 2次。次。特别注意特别注意 干扰滴定因素有：干扰滴定因素有：p色素色素：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色

13、。，可用白陶土脱色。p还原剂还原剂：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于角瓶直至呈粉红色，于15s15s内不消退为终点。内不消退为终点。 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。可加数滴丁醇或辛醇。注意各管滴定终点均为微红色注意各管滴定终点均为微红色五、结果计算

14、五、结果计算 l 维生素维生素C C含量（含量（mg/100gmg/100g样品样品）= = l V VA A为滴定样品提取液所用的为滴定样品提取液所用的 2 2, ,6-6-二氯酚靛酚溶液的二氯酚靛酚溶液的mLmL数数l V VB B为滴定空白对照所用的为滴定空白对照所用的 2 2, ,6-6-二氯酚靛酚溶液的二氯酚靛酚溶液的mLmL数数l S S为为1mL1mL染料能氧化抗坏血酸染料能氧化抗坏血酸mgmg数数( (需根据标定值计算）需根据标定值计算）l W W为待测样品的重量。为待测样品的重量。注意测定时样品有稀释的要乘上稀释倍数注意测定时样品有稀释的要乘上稀释倍数100WS)VV(BA六、课后研讨六、课后研讨l 重点：重点：结果记录和计算结果记录和计算l 总结本实验的操作要点和注意事项。总结本实验的操