实验八 细菌鉴定中常用的生化实验

1、实验八 细菌鉴定中常用的生化实验1一、实验目的掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。掌握以上实验的用途。2二、实验原理淀粉实验糖发酵实验 发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 （溴甲酚紫变色范围pH5.26.8, pH6.8紫色） 发酵后产生的气体： 甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）3糖发酵试验现象4二、实验原理M.R.及V.P实验 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。5二、实验原理M.R.及V.P实验 VP试验是用来测定某些细菌利用葡

2、萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。6二、实验原理吲哚实验 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。7三、实验器材培养基1、淀粉培养基 :500ml（分装于四个三角瓶，包扎，121126灭菌30min）蛋白胨 10g 可溶性淀粉 2g氯化钠 5g 琼脂 1520g牛肉膏 5g 水 1000ml pH 7.22、糖发酵培养基：300ml（分装于28只

3、试管，包扎，112115灭菌30min）蛋白胨 10g 氯化钠 5g 葡萄糖 10g 水 1000ml pH 7.4 溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml 3、M.R.及V.P实验:600ml（分装于56只试管，包扎，112115灭菌30min）蛋白胨 5g K2HPO4 5g 葡萄糖 5g 水 1000ml pH 7.27.44、吲哚培养基:300ml（分装于28只试管，包扎，121126灭菌30min）蛋白胨 10g 氯化钠 5g 水 1000ml pH 7.68三、实验器材菌种1、大肠杆菌2、枯草芽孢杆菌3、未知菌其他1、试管6组 28个/组（每个试管带一个德汉氏小管）2、平皿2组 16

4、个/组3、三角瓶2组 8个/组9四、实验步骤（一）准备实验器材，配制培养基（二）接种培养10试验名称被接菌种1被接菌种2被接菌种3对照（管数）1.淀粉水解实验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种2.糖发酵大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种3.MR试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种4.VP试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气肠杆菌1支/每组不接种5.吲哚试验大肠杆菌枯草芽孢杆菌葡萄球菌1支/每组不接种11（三）结果观察葡萄糖/乳糖发酵试验，H2S产生试验直接观察。VP试验：去塞，加40KOH 15滴，振荡，再加等量奈酚，振荡，37振荡培养30min，观察。MR试验：加甲基红试剂23滴，观察。吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。12五、实验结果及分析13六、思考题1、糖发酵试验中，所安装的杜氏小管起什么作用？2