人工胰与生物材料课件

WhatisanArtificialPancreas?

Theartificialpancreasisatechnologyindevelopmenttohelppeoplewithdiabetesautomaticallycontroltheirbloodglucoselevelbyprovidingthesubstituteendocrinefunctionalityofahealthypancreas.

糖尿病糖尿病是体内缺乏胰岛素分泌的结果。胰岛素对于葡萄糖从血液转移到组织的过程至关重要。胰岛素是存在于血液中的天然分子。当血糖过高时，胰脏中的兰氏小岛(islandsofLangerhans)中的beta细胞分泌胰岛素。胰岛素促进葡萄糖进入到肌肉细胞和其它组织中并且降低血液葡萄糖水平。胰岛素欠缺可能来源于分泌不足或失效。胰岛素欠缺造成血液中反常的高葡萄糖浓度(高血糖)。如果血糖浓度超过肾脏的阈值，葡萄糖就会进入尿中。而这造成必需产生的尿量。同时，在细胞层面缺乏葡萄糖作为基本能量来源意味着身体不得不利用脂肪储存甚至在必要时以肌肉组织本身作为能源。这些机制的组合产生了糖尿病的标准症状-多尿、口渴以及无法解释的体重减轻。糖尿病有两种明显不同的形式I型糖尿病与胰岛素有关的糖尿病，源于胰脏中胰岛素产量不足因而需要注射胰岛素治疗。对造成这个病的因素仍然所知甚少，但某些病毒、免疫系统疾病和遗传可能会有影响。虽然它能发生在任何年龄，这种疾病通常在儿童或四十岁以下的成年人中突然发生。Ⅱ型糖尿病是指身体仍在生产胰岛素但是数量不够或者身体对其具有抵抗力。这种类型的糖尿病与基因有密切关联，而且其发展与肥胖症密切相关。Ⅱ型糖尿病最常见于中老年人。但随着人们越来越肥胖，年轻人甚至儿童的发病率日益增长。Ⅱ型糖尿病的发展不易察觉，常常是在例行健康检查时才被发现。饮食及生活习惯的改变可能足以控制Ⅱ型糖尿病，但有些患者需要降糖药物以增加胰岛素合成或者提高其效能。胰岛素与糖尿病自1889年，国外首次发现切除胰腺的狗可引起糖尿病，第一次说明了胰腺有调节血糖和糖代谢的作用以来，人们对胰腺及胰岛素与糖尿病的关系予以足够的重视。胰岛素给药途径

一、皮下途径皮下给药途径为胰岛素应用的主要方式。1．胰岛素笔。一种笔型注射器，能随身携带，使用方便，注射剂量准确，注射时疼痛轻。新近发展的胰岛素笔可调整剂量，一次最大注射量增至70IU，笔芯容量亦增大至300IU，使用更为方便，使病人愿意接受胰岛素治疗。英国制造-福瑞欧（FRíO）胰岛素低温携带袋

胰岛素笔：【品名】C-Cap这款外型圆滑的胰岛素泵可以发出提醒患者用药的视听信号，或提醒患者已用过药了，或帮助他们在睡前按时注射胰岛素。

C-Cap以钢笔为原型，每隔4~24小时会发出“嘟嘟”声以及短促的绿色闪光，提醒糖尿病患者注射胰岛素。如果C-Cap在报警1小时内仍未使用，就会发出红色闪光；每一次注射后会发出长时间的绿色闪光。2、胰岛素无针注射系统

(亦称胰岛素无针注射器)该注射仪的出现是注射系统领域一次划时

代的革命，取代传统有针注射器。其安全、无痛、杜绝感染，使用方便、简单、快捷，被美誉为“软注射”或“温柔注射”。长期打胰岛素的患者，每天都要打上两三针。不但疼痛，还会因长期注射引起局部硬结，使药物很难吸收，影响疗效。高压无针注射仪为实现胰岛素的无针无痛注射而设计，使用永久性材料制成，使用寿命可达30万次。注射仪采用高压原理，使胰岛素在压力驱动下通过一个微孔以微型雾化的喷射流进入皮肤，并在注射部位的皮下组织中扩散。消除了因针头注射造成的皮肤创伤和疼痛，使病人更易接受一日多次胰岛素方案，且经高压喷雾注射的胰岛素在皮下组织中呈弥漫状分布，使药液吸收迅速而均匀一致，使餐前注射的正规胰岛素吸收曲线更接近于进食诱发的胰岛素生理性分布状态。新近研究的产品体积更小，携带方便，视力有缺陷者亦能使用。二、腹腔内途径腹膜表面积大，交换能力强，因而胰岛素注入腹腔后吸收较皮下迅速，注射后15分钟即可发挥作用，30～45分钟出现血浆胰岛素高峰，随即迅速下降，这一变化规律与进餐后内源性胰岛素分泌相似。再者注入腹腔的胰岛素大部分由门脉系统吸收，比较符合胰岛素生理性代谢过程，腹腔给药有助于减轻外周高胰岛素血症。缺点：（1）易造成腹腔内感染；（2）需手术植入导管，增加病人痛苦；（3）导管开口处易被纤维蛋白凝块阻塞。静脉途径急性并发症需静脉给药。早期曾较多应用静脉途径，现已少用。口服给药胰岛素通过口腔粘膜吸收极少，吞服后酶的消化作用难以克服，微包'囊技术可减少酶的破坏，但离实际应用尚有很大距离。鼻腔给药虽然在理论上可行，但无明显实用价值。肌肉途径。直肠途径胰岛素吸收后可在门脉系统中形成较高浓度，用药后30～45分钟血浆中达高峰，但下降较缓慢，不如腹腔给药理想，有多种剂型可供选择。三、其他途径

皮下注射胰岛素疗法是治疗糖尿病的最常规疗法，但患者长期接受性差。主要因为：它无法模拟生理状态下的胰岛素分泌，吸收非常不稳定，胰岛素易滞留在皮下，造成血糖波动大且易出现低血糖,由于血糖未得到良好控制，仍不能完全阻止并发症的发生。人工胰（胰岛素泵）

人工胰是模拟人体胰脏调节血糖功能，使糖尿病患者血糖保持在接近生理水平的装置替代胰功能，释放胰岛素，控制血糖水平人工胰是胰岛素给药的一种新途径四．胰岛素泵

（持续性皮下胰岛素输注）这款于2005年上市的血糖监测仪看上去就像皮带上常见的电子产品。43岁的TomBaldwin是名机组乘务员，他的皮带上佩有两个光滑的装置：一个是iPhone（手机充电器），一个是胰岛素泵和血糖监视仪，这个仪器借定位于腹部的细针，1天可测量288次血糖浓度。

Artificialpancreas

目前应用的胰岛素泵大多数采用持续性皮下胰岛素输注技术。可根据病人血糖变化规律个体化地设定一个持续的基础输注量及餐前大剂量，以模拟人体生理性胰岛素分泌。新近发展的胰岛素泵采用螺旋管泵技术，体积更小，携带方便，有多种基础输注程序选择和报警装置，安全性更高。持续性皮下胰岛素输注治疗在达到良好血糖控制时，低血糖发生率比一日多次胰岛素治疗低，效果更好，但价格较高。

人工胰是一种连接胰岛素泵和葡萄糖感受器的装置

人工胰：

人工胰被植入患者腹腔内的胰腺位置，植入的葡萄糖感受器随时监测体内血糖变化，与之连接的胰岛素泵根据血糖变化按需要向腹部输注胰岛素。（患者每３个月需要通过皮肤将胰岛素注射进储藏器，然后再由胰岛素泵根据具体情况输出胰岛素）胰岛素泵分类与组成

胰岛素泵从结构上分闭环式和开环式两种。闭环式装置非常复杂，由三部分组成：①血糖感受器，能连续自动测定血糖浓度并将测定结果转变为电脉冲信号；②电子计算机，能将血糖感受器传输来的电脉冲信号加以处理，并计算出胰岛素的输入剂量向装有胰岛素的注射泵发出“指令性”电脉冲信号，可调整注射泵输出的时间和速度；

③胰岛素注射泵，能按电子计算机的“指令”输出胰岛素。此仪器体积大，不便携带，仅作为床边抢救用。而开环式仅由电控部件与注射泵两部分组成。医生根据化验测定的血糖浓度，调拔电扭，预先安排电控部件的工作程序，然后通过电控部件“指令”注射泵输液速度和起止时间，以调节胰岛素的剂量和输入时间。

注射泵有两种可调变的注射速度：一是基础速度，即24小时内均匀地注射的速度，它的胰岛素输出量称基础剂量；二是脉冲速度，即在餐前或餐时增加一次注射的速度，它的胰岛素输入量称脉冲剂量。这两种注射即可将已知胰岛素需要量连续输入人体，又可在餐前开动调节器增加输人剂量，以模仿餐后血浆胰岛素浓度升高情况。另有警报器可发出信号以示各种需要紧急处理情况，如胰岛素液注完、电池耗尽、空针或脱落受阻等。这种注射泵装置，体积小、重量轻，携带方便。袖珍胰岛素注射泵（携带式双速注射泵）生物材料包埋胰岛素制备

人工胰

利用生物相容性良好的材料包埋胰岛素微球制备人工胰。通过温度、pH或电流的变化促使膜表面物理形态的改变，致使人工胰在低温时负载大量的胰岛素，但在高温时又可释放出药物从而维持体内的血糖浓度。微囊化载药

医用生物材料微球的制备方法

采用微囊化技术将药物包裹在可生物降解的生物材料（聚合物）中，这种微球通常为核-壳复合结构，其中壳层为材料，而核为特定的药物，如胰岛素、神经生长因子、内皮生长因子、转化生长因子、多肽、蛋白质药物等。

微球的制备方法

有多种微球的制备方法，如相分离法、复乳-液中干燥法、喷雾干燥法、低温喷雾提取法、熔融-挤出法等，以下着重介绍最常用的两种方法。复乳-液中干燥法

将生物可降解聚合物，如PLGA:聚(丙交酯-co-乙交酯）溶解在有机溶媒(二氯甲烷或醋酸乙酯)中，水相中加入定量的药物成溶液或混悬液。将水相加入上述有机相中，匀化或超声振荡成初乳(w/o)，初乳再转入含PVA的水溶液中，搅拌成复乳(w/o/w)，升高系统温度，除去有机溶媒，固液分离后，干燥即得。低温喷雾提取法

将药物及其稳定剂的粉末或冻干品和生物可降解聚合物的二氯甲烷溶液均匀混合，混悬液经一喷头以雾状喷至冰冻的乙醇溶液中，后者界面封以液氮。在-70℃温度下，乙醇将微球中二氯甲烷不断抽提，经过滤去除乙醇，得流动性佳的微球，干燥即得。

复乳法是目前制备微球最常用的方法，它具有工艺稳定、设备简单等特点。比较复乳法与低温喷雾法，前者制备的微球突释效应常达15%～35%，而用低温喷雾法制备的微球可明显改善上述缺点，而且据报道药物包裹率可达100%，国外已有从实验室到中试规模的设备。微囊及特性

微囊系利用天然的或合成的高分子材料将固体或液体药物包裹而成的直径1-500μm的微小胶囊，其外型取决于囊心物质的性质和囊材凝聚的方式，微囊外面呈球状实体或呈平滑的球状膜壳形，葡萄形及表面平滑或折叠的不规则结构等各种形状，它常用于增加药物的稳定性，掩盖药物的不良气味，改良和延缓药物的释放，近来来国外对该技术的研究应用较多。胰岛素微球常用材料

聚左旋乳酸（poly-L-lactide），L-PLA聚(丙交酯-co-乙交酯）

Poly(D,L-lactide-co-glycolide），

PLGA聚乙烯醇Polyvinylalcohol，PVA聚左旋乳酸

L-PLA（poly-L-lactide）

聚乳酸是一种性能优良的，具有生物相容性和生物可降解性的聚合物，聚乳酸(PLA)无毒、无刺激性，强度高，易加工成型，具有优良的生物相容性，可生物降解吸收，在生物体内经过酶解，可最终分解成水和二氧化碳，不污染环境，PLA在人体内的降解和降解产物的高度安全性已得到证实，同时被认为是最有发展前景的医用高分子材料同时，聚乳酸及其共聚物具有良好的物理、化学性能。其强度、机械性能、降解速率等可通过分子量控制、共聚体的组成及配比得以方便的调节，而且制成制品的形状可从微球、纤维、膜到模塑成品等，因此聚乳酸广泛应用于医药及医用行业，包括医用缝合线，药物缓释材料，骨固定及修复材料及其它组织工程用材料等。

FigureEncapsulationofindividualcellsbyphotopolymerization聚乳酸的应用Theencapsulationisformedbythepolymerizationofaphotomonomer(PM).PMisattachedtopoly-L-lactide(PLA)andthetripeptideRGD.TheRGDmotifwillattachtothecellsurface.聚(丙交酯-co-乙交酯）

poly(D,L-lactide-co-glycolide)(PLGA)聚(丙交酯-co-乙交酯）的合成

聚(丙交酯-co-乙交酯）

PLGA是由丙交酯（LA）和乙交酯（GA）两种单体在催化剂的作用下聚合而成的高分子共聚物。由于其良好的生物降解性和生物相容性，可广泛应用于生物医学组织工程；药物控制释放体系如多肽、蛋白质药物的控制释放体系。多肽、蛋白质类药物经PLGA包埋，制成缓释微球，可有效拓宽给药途径，提高药物的生物利用率，减少给药次数和剂量；生物体吸收缝合材料；骨科固定及组织修复材料和其他人体植入的装置等。该材料已被美国FDA批准。聚(丙交酯-co-乙交酯）的特点

1．良好的生物相容性。PLGA与生物体有非常好的生物相容性，在体内不会引起任何排斥反应。

2．良好的生物降解性。PLGA在生物体内可以降解成乳酸、水和二氧化碳，参与体内的新陈代谢。

3．可控性。不同的多肽、蛋白质药物需要不同的释放速度，PLGA在体内的降解时间可以根据LA和GA的比例来调节，从而调节药物的释放速度。

4．无毒。PLGA是一种无毒的合成高分子材料，在体内不会引起任何毒性反应。聚乙烯醇

Polyvinylalcohol

(PVA)

-(-CH2-CH-)n-

OH

聚乙烯醇是一种亲水性强、毒性低、生物相容性好的合成高分子材料，其分子链上存在大量可进行功能基化反应的亲水性羟基

生物人工胰

Inbioartificialpancreas,isletsareencapsulatedintoasemi-permeablemembraneandthenimplantedintothediabeticpatientstoprotectthemfromimmunerejection.Thesemi-permeablemembranepermitspermeationofoxygenandnutrientwhicharenecessaryforisletsurvival,butprohibitscontactofisletcellswithcomponentsofthehostimmunesystem.生物人工胰示意图

bioartificialpancreas(left)Electronmicrograph(right)

生物人工胰制备与植入Approximately4x106pigsisletscellsisolatedfrom6-month-oldpigsmacroencapsulationimplantedintoasubcutaneoussite2007:

HyperglycemiaandDiabeticRenalChangeinaModelofPolyvinylAlcoholBioartificialPancreasTransplantationIsletIsolation,Encapsulation,andXenotransplantationIsletswereisolatedfromtheWistarrats,asdescribedpreviously.Briefly,theisolatedisletswerepurifiedfurtherbyhandpickingandthenincubatedat37°Cin5%carbondioxide/95%airovernightinculturemedium,followedbyencapsulationwithpolyvinylalcohol(PVA)gel.Approximately800isletsweremixedwithEuro-Collinssolution(肾脏移植灌流保存液)containing3%PVA,10mMnicotinamide,10%fetalbovineserum,and5%dimethylsulfoxide(Sigma).

A100-µLofthismixturewasthencooledandkeptat-80°Cfor24hourstoinitiateformationofacrystallizedgel.Thegelleddevicewasthenthawedrapidlyat37°Cwaterbathandimmersedincold(4°C)solutionforadditional24hours.Afterovernightculture,thePVAgelbioartificialpancreaswasusedinthestudy.Thebioartificialpancreasandculturedfreeisletsisolatedatthesametimeareincubatedfor1hourinthemediumcontainingeither3.3mMor16.7mMglucose.Afterincubation,insulincontentofthebioartificialpancreasandthefreeisletsweremeasured.Transplantationofthebioartificialpancreasinperitonealcavitywasperformedin14ofthediabeticmice

微型可植入泵

目前美国已研制出一种可植入式胰岛细胞传感器胰岛素泵，该装置结合了“将体积较小的胰岛素泵植入人体”与“胰岛细胞移植”的双重技术。胰岛素泵中含有海藻酸钠、壳聚糖等包埋的猪或狗的胰岛细胞，可在糖尿病患者体内制造胰岛素。

这种装置结合电化学和计算机技术使监控葡萄糖和胰岛素合为一体，在人体血液中释放胰岛素，同时可以监控血中葡萄糖和胰岛素水平。

Thedevicewillworklikeanartificialpancreaswhenthebodyneedsinsulinanddeliveritinprecisedoses.

isletentrapment

Alginate-Chitosan-Polyethylene

GlycolMicrocapsules

Sodiumalginateofmedium(a2%solution);PEG,molecularweight,20,000;chitosanderivedfromcrabshell

Alginate：海藻酸钠Chitosan：壳聚糖PolyethyleneGlycol

（PEG）：聚乙二醇

SodiumalginateG：葡萄糖醛酸残基M：甘露糖醛酸残基海藻酸钠

藻酸盐是从海藻中分离出的一类多糖。在二价离子如钙离子存在时可通过离子交联作用形成开放晶格的水凝胶。藻酸钙水凝胶可塑性好，可预先制成各种形状。其力学强度与钙浓度和藻酸盐浓度均有关。在钙浓度高达500mmol/L或藻酸盐浓度达4%时，对生物活性物质的渗透扩散仍无阻碍作用。藻酸钙通过酶解作用分解，产物对人体无毒害作用。因此，藻酸盐被用作伤口覆盖材料、药物载体和细胞培养载体等。具有良好的生物相容性(无免疫原性)壳聚糖

甲壳素甲壳素，亦称甲壳质、几丁质，是自然界中仅次于纤维素的天然多糖，广泛存在于昆虫、甲壳类动物外壳及真菌细胞壁中。壳聚糖

壳聚糖是由甲壳素在碱性条件下经脱乙酰化反应而制得的天然聚氨基糖，甲壳胺，即壳聚糖。该化合物呈弱碱性，在酸溶液中，其氨基葡萄单位转化为R-NH3+而溶解。由于其生物可降解性、低毒性和良好的生物相容性等优点，它在生物医学和制药领域有着广泛的应用。在制药领域，它被用作直接压片的稀释剂、缓释剂和漂浮型口服给药系统的赋型剂和在促进水不溶性药物的溶出速率和生物利用度时与药物共同研磨的添加剂。

壳聚糖在体内溶菌酶、甲壳酶的作用下水解成低聚糖。由于壳聚糖的体内降解属于酶解作用，故难于对它的降解速度进行人为调控。降解产物为对人体无毒的N-乙酰氨基葡萄糖和氨基葡萄糖。降解过程中产生的低分子量甲壳素(胺)或其寡聚糖在体内不积累，无免疫原性。壳聚糖具有良好的生物相容性(无免疫原性)。

聚乙二醇

PolyethyleneGlycol(PEG)

聚乙二醇是一种聚醚高分子化合物，在医药、卫生、食品和化工等众多领域广泛应用。聚乙二醇具有良好的亲水性(可溶于水、有机溶剂和机体内的组织液)；优异的生物相容性(无免疫原性)；抗凝血性和抗巨噬细胞吞噬的特性；可被机体排出，无任何毒副作用；加上其分散性、成膜性、润滑性和缓释性，它已被FDA批准可以作为药物辅料。聚乙二醇用于人体。从化学反应原理分析，聚乙二醇携带的羟基可以与细胞表面抗原分子的-NH2、-COOH、-CHO、-CO等基团发生化学反应，共价结合，而高分子PEG则起到空间遮蔽细胞表面抗原分子的作用。实现对人红细胞血型、白细胞血型、动物红细胞血型、人造血干细胞表面抗原的改造，重要的是这种修饰对细胞本身的形态、结构和功能不会有破坏作用。海藻酸钠、壳聚糖是一些天然化合物，具有良好的生物相容性(无免疫原性)，可以在近乎生理条件下经物理化学反应制备生物微胶囊膜，这种微胶囊的大小、膜厚度和孔径可控。

isletsweresuspendedinanisotonicsolutionofSodiumalginateatadensityof4x106cells/mlandwereencapsulatedwithinSodiumalginate.Approximately20mlofthissolutionwasdroppedintoabeakercontaining100mlofcalciumchloridesolutionundergentlestirring.Sterileairwasintroduced.

alginatemicrospheres

Preparationofislets

containingalginate-chitosan-PEGmicrocapsules

Byadjustingtheairflowrateto0.5L/min,thesizeofthebeadscanbecontrolledat1.0mmindiameter.Thecapsulesformed(alginatemicrospheres)wereallowedtohardenfor15mininCaCl2solutionandthenwerefilteredwithamembranefilter.Theresultantcapsuleswererinsedwithdistilledwater.(A)Singlealginatecapsules(SAC)

(B)doublealginatecapsules(DAC).

alginatemicrospheresalginate-chitosanmicrospheresAchitosansolutionin0.01MHClwasprepared,thepHwasadjustedto5.7using0.1NNaOHsolution,andthesolutionwasfilteredtoobtainaclearsolution.A100mlchitosansolutioncontaining1.5%CaCl2wasusedforthegelationofalginate(Alg-Chitmicrospheres).alginate-chitosan-PEGmicrospheres

a0.1g%PEGsolution(100ml)containingCaCl2andchitosanwasusedforbeadformation.PEGsolutionin0.1Mtris-HClbuffer,pH5.0,waspreparedandfilteredtoobtainaclearsolution.（Tris-HCl：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐）ThecapsuleswerepreparedfromthisPEGsolutionandthealginate,asmentioned,togetAlg-Chit-PEGmicrospheres.Therinsedcapsuleswereallowedtodryinairatroomtemperatureuntilconstantweightwasachieved.TheSEMmicrographsareofan

isletsencapsulatedalginate-chitosan-PEG（beadfixedwith0.02%GA）

SEM：

Scanningelectron

microscopy

Assessmentofmechanical

stability

Onehundredcapsuleswereplacedin100mlof0.9%NaClsolutionin500mlflasks.Theflaskswereputinashakerat150rpmat37°C.Allrupturedcapsulesasafunctionoftime.Theexperimentswererepeatedinanunbiasedway3times,andtherupturedcapsuleswereenumeratedforstatisticalevaluationMembranepermeability

measurements

SurvivalofMicroencapsulatedAdultPigIslets

SurvivalofMicroencapsulatedAdultPigIsletsEncapsulationwascarriedoutaccordingtothetechniquedevelopedinourlaboratory(23)usinga3.3%wt/volconcentrationofhighlypurifiedalginate(donatedbyJohnHolahan,Pharmacia,Peapack,NJ)withthefollowingproperties:endotoxincontent<100endotoxinunit/galginate;viscosity=900centoPascal;Mannuronicacid(M)/Guluronicacid(G)ratio:61%M/39%GwhichiscalledhighMalginate.Afterovernightculture,isletsweresuspendedinthisalginateataconcentrationof5000isletequivalents(IE)/mLofalginate.Theislet-alginatesuspensionwasloadedintotubingconnectedtoapumpandanair-drivendropletgenerator.Alginatemicrocapsuleswereformedbycross-linkingwithBaCl2(20mM)dissolvedinsteriledistilledwater.Microencapsulationofadultpigisletsprolongedthesurvivalofisletsforupto170daysandgreaterthan193daysforisletsinSACorDACcapsules,respectively(Figure2Aand2B).

Thedevelopmentofalternativevitrificationsolutions

formicroencapsulatedislets

Biomaterials,(2008):isletswereencapsulatedinanagarosehydrogel琼脂糖MicroencapsulationofisletsinagarosehydrogelIsletswereisolatedfromaSyrianhamster(8weeks,female)bycollagenasedigestionmethod[10].Theisletswereculturedfor6daystoremovedamagedcellsandaltertheirirregularshapetoroundedshapeinculturemedium(199medium;Invitrogen,Gibco11150)containing10%FBS(FetalBovineSerum;Equitech-BioInc.),8.8U/mlheparin,8.8mMHepesbuffer,50U/mlpenicillin,and50ml/mlstreptomycin.Then,isletswereencapsulatedinanagarosehydrogelusingpreviouslyreportedprotocols[11,12].Briefly,a5%concentrationofagarose(TaiyoAgarose,AGLT-600,ShimizushokuhinKK,Shimizu,Japan)in3mlofserum-freeMEM(Invitrogen)solutionwasautoclavedina50mlglasscentrifugetube,afterthat,itwaskeptat40Cfor8min.Islets(700~1000)suspendedinasmallquantityofserum-freeMEMweremixedwiththeagarosesolution.Liquidparaffin(15ml)at40C(1.07162.1000,Merck,Germany)wasaddedintothecentrifugetube.Then,themixturewasemulsifiedbymanualshakingtoformagarosedropletsfollowedbyanimmersioninanicebathfor5minwithgentleagitationtoprovokegellationoftheagarosebeads.ColdHank’sBalancedSaltsolutionHBSS(15ml)wasaddedintotheglasstubeandthesuspensionwascentrifugedat2000rpmfor5minat4C.Thesupernatantphasewasremovedbysuction.Afterthisprocedurewasrepeatedthreetimes,microcapsulescontainingisletswerehand-pickedandplacedincellculturedisheswiththeisletculturemediumin5%CO2

95%airat37Cfor7daysbeforebeingusedinExperiments.CryopreservationbyfreezingofmicroencapsulatedisletsThephotomicrographsareofagarosebeads谢谢大家!Scanningelectron

microscopy

TheSEMmicrographsareofdryalginate-chitosan(0.3%)beads

Thephotomicrographsareofalginatebeads(A)andRBCencapsulatedalginate-chitosan-PEGbea...microencapsulatedporcineisletsthetechniqueofislet

microencapsulation

encapsulatedporcineisletsPolyglycolide(PGA).Polyglycolideisthesimplestlinearaliphaticpolyester.PGAwasusedtodevelopthefirsttotallys