耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制研究

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药机制研究

肠球菌科的细菌包括大肠菌、肺炎克雷伯菌和肠球菌。它们可能会导致呼吸感染、尿道感染、胆肠感染和其他类型的感染。这是医院感染的重要条件。碳青霉烯类抗菌药物曾被认为是治疗其严重感染最有效的药物之一。然而,近年来,随着该类药物在临床上的广泛应用,肠杆菌科细菌对其敏感性逐渐下降甚至耐药,给临床抗感染治疗造成极大的挑战1材料和方法1.1质控菌株及质控菌株选取某院2011年1月-12月医院临床分离非重复性肠杆菌科细菌2203株。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603均购自卫生部临床检验中心,菌株ATCCBAA-1705和ATCCBAA-1706由北京大学临床药理研究所李耘教授惠赠。1.2主试剂和设备1.2.1pcr扩增仪和dy-7型电泳仪VITEK-2全自动微生物分析系统(法国梅里埃生物公司);ABI2720PCR扩增仪(美国ABI公司);InGenius凝胶成像分析系统(英国Syngene公司);DYY-7型电泳仪(北京六一仪器厂);高速冷冻离心机(Eppendorf公司)。1.2.2edta溶液和dnamackVITEK-2GN鉴定卡和药敏卡均购自法国生物梅里埃公司;0.5mmol/l的EDTA溶液为本室所有;2×TaqMasterMix、DNAMarker(D2000)均购自北京百泰克生物技术有限公司;所有引物均由上海生工生物工程公司合成。1.3方法1.3.1菌株鉴定及药敏试验采用VITEK-2全自动微生物分析系统对收集的菌株进行鉴定及药敏试验,结果判断参照2014年CLSI标准进行结果的判断(CLSI,2014,M100-S24)。1.3.2表1的初步过滤1.3.2.atccbaa-175和atccbaa-176对菌株atccba-176的表达采用改良Hodge试验,大肠埃希菌ATCC25922作为指示菌株,菌株ATCCBAA-1705和ATCCBAA-1706分别作为阳性、阴性对照。具体操作参考文献1.3.2.2-edta-ipm合作法和ipm双捕获法确认了金属酶的表面类型EDTA-IPM协同法具体操作参考文献1.3.3基因检测和分析煮沸法提取细菌总DNA。PCR法检测A类(bla2结果2.1标本来源及检出率2203株肠杆菌科细菌中共检出17株CRE,检出率为0.7%。标本来源包括痰液标本、尿液标本、胆汁以及各种穿刺液等。科室分布主要在ICU,其他的包括普外科、消化内科及神经外科等。2.2头孢哌酮/舒巴坦的耐药性药敏结果显示,17株CRE菌株对常用抗菌药物高度耐药,除对阿米卡星和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率低分别为35.3%和47.1%,对其他抗菌药物的耐药率均在76.4%~100.0%。另外,其中1株肺炎克雷伯菌(菌株编号KP1)除对阿米卡星敏感外,对其余抗菌药物均耐药。见表1。2.3表1的初步过滤2.3.1标准初验中的碳青霉烯酶17株CRE菌株改良Hodge试验阳性12株,检出率为70.6%,见图1。2.3.2edta-ipm协同法和ipm双胶片增效法确认金属酶表型17株CRE菌株中两种方法检测几个均为阳性的仅有2株,菌株编号为KP-1和KP-2,另外还发现1株EDTA-IPM协同法阳性,而IPM双纸片增效法阴性的菌株(抑菌圈直径相差4.0mm),菌株编号为E.cloacae-13。其余的均为阴性,见图2。2.4基因检测和分析17株CRE菌株中bla3菌株对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率碳青霉烯类抗菌药物包括亚胺培南、美罗培南以及厄他培南等,自20世纪80年代应用于临床以来,表现出具有良好的抗菌疗效,被认为是治疗革兰阴性杆菌,尤其是肠杆菌科细菌所致的严重感染最有效药物之一。然而,近年来,随着其在临床上的广泛应用,肠杆菌科细菌对其敏感性发生了明显的改变。据美国SENTRY监测结果显示本研究对某院2011年1-12月临床分离CRE菌株进行了收集,从2203株肠杆菌细菌中共检出17株非重复性CRE菌株,检出率为0.7%,明显低于同年CHINET的监测结果,说明该院肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物仍高度敏感。但值得注意的是,17株CRE菌株对常用抗菌药物具有较高的耐药率,除对阿米卡星和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率低分别为35.3%、47.1%,对其他抗菌药物的耐药率均较高。其中1株肺炎克雷伯菌(菌株编号KP-1)仅对阿米卡星