测定蛋白质含量

测定蛋白质含量Tag内容描述：<p>1、肝脏蛋白的提取 和浓度测定 医学基础实验室 实验目的实验目的 了解并掌握 蛋白质的提 取方法 了解掌握考 马斯亮蓝法 （Braford法 ）测定蛋白 质含量的原 理和方法 实验内容 实验目的 肝脏组织蛋白肝脏组织蛋白 的提取的提取 蛋白的浓度测蛋白的浓度测 定定 原理： RIPA裂解液是一种传统的细胞 组织快速裂解液，主要裂解成分含 1% Triton X-100, 0.5% 胆氧胆酸钠 （sodium deoxycholate）, 0.1% SDS，得到的蛋白样品可以用于常规 的Western。 1.肝脏组织的提取 操作 步骤 超声匀浆 冰上放置 4度离心 吸取上清 1.肝脏组织的提取 组织取材 1.。</p><p>2、实验三 食品中蛋白质含量测定 （凯氏定氮法） 标准依据： 50095-2003食品中蛋白质含量测定 n一、目的与要求 n1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。 n2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的 消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。 n二、实验原理 n蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化 剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与 硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加 碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标 准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换 算系数，即得蛋白质含量。 n因为食品中除蛋白质外，还含有其它含。</p><p>3、实验七蛋白质含量测定测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有染料法，双缩脲(Biuret)法，酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法。目的要求1掌握测定蛋白质的含量基本方法。2了解染料法、双缩脲法、Lowry法和紫外吸收法测定原理。一、染料法实验原理在酸性溶液中染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合，此时考马斯亮蓝G-250颜色从红色变为蓝色，吸收高峰从460nm移至595nm。利用这个原理可以测定蛋白质含量。该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准。</p><p>4、实验二十 蛋白质含量测定双缩脲法测定蛋白质含量一、实验目的学习和掌握用双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。二、实验原理在碱性溶液中，双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(CO-NH2)，或与此相似的基团如CH2-NH2，CS-NH2，C(NH)NH2的任何化合物，无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连，均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(CO-NH)，可发生双缩脲反应，且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测。</p><p>5、蛋白浓度测定蛋白质的定量分析是生物化学和其它生命学科最常涉及的分析内容，是临床上诊断疾病及检查康复情况的重要指标，也是许多生物制品，药物、食品质量检测的重要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析，则是经常进行的一项非常重要的工作。蛋白质是一种十分重要的生物大分子：它的种类很多，结构不均一，分子量又相差很大，功能各异，这样就给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法代来了许多具体的困难。目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法：物理。</p><p>6、实验 蛋白质的定量测定方法【实验预习】1.试比较Folin酚法与考马斯亮蓝染料结合比色法的优缺点。2.试比较二喹啉甲酸法与Folin酚法的优缺点。3.凯氏定氮法中在消化样品时，加入浓硫酸，硫酸钾和硫酸铜粉末的目的是什麽？4.紫外吸收法测定蛋白质含量的原理是什麽？一、Folin酚试剂法(Lowry法)【实验目的】1.学习Folin酚试剂法测定蛋白质含量的原理。2.掌握Folin酚试剂法测定蛋白质含量的方法和操作。【实验原理】蛋白质中含有酪氨酸和色氨酸残基，能与Folin酚试剂起氧化还原反应。反应过程分为两步，第一步：在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽。</p><p>7、实验十四 考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量一、 目的学习和掌握考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量的原理和方法。二、原理考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradfo。</p><p>8、考马斯亮蓝法测定考马斯亮蓝法测定 蛋白质含量蛋白质含量 一、实验目的。 掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质的原 理与方法。 熟练分光光度计的使用和操作方法。 双缩脲法和Folin酚试剂法的 明显缺点和许多限制，促使科学家们去 寻找更好的 蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法 （Bradford法），是根据蛋白质与染料 相结合的原理设计的。这种蛋白质测定 法具有超过其他几种方法的突出优点， 因而正在得到广泛的应用。这一方法是 目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮蓝法出现背景 二、实验原理 考马斯亮兰G-250染。</p><p>9、实验三 奶粉中蛋白质含量的测定1.1实验目的要求：1、掌握样品处理方法2、掌握凯氏定氮法2.1 蛋白质含量测定蛋白质是生命的物质基础，是人体重要的营养物质，因而也是食品中重要的营养指标。测定食品中蛋白质的含量，对于评价食品的营养价值，合理开发利用食品资源、提高产品质量、优化食品配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极其重要的意义。测定蛋白质最常用的方法为凯氏定氮法。此法是通过测定出样品中的总氮含量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质含量的。经过人们长期的应用和不断改进，凯氏定氮法已演变成常量法、微量法、半微。</p><p>10、怎样测定血清中蛋白质的含量,蛋白质含量测定的常用方法比较,选择测定方法时应考虑：,1、实验样品对测定所要求的灵敏度和精确度； 2、蛋白质的性质； 3、溶液中存在的干扰物质； 4、测定所花费的时间等。,Lowrys法（Folin-酚试剂法）测定蛋白质含量,Determination of protein content by Lowrys method,实验目的,1、掌握Folin-酚试剂法测定蛋白质含量的原理 及其实验操作技术。 2、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线 求样品溶液中待测物质含量的方法 。,原理,1921年，Folin 首创，利用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基（酚基）还原酚试。</p><p>11、使用凯氏定氮的方法检测蛋白质含量。凯氏定氮法凯氏定氮法蛋白质测定的国标规定方法凯氏定氮法介绍【GB/T 5009.51985】食品中蛋白质的测定方法本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。1 原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。2 试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。2.1 硫酸铜。2.2 硫酸钾。2.3 硫酸。2.4 2%硼酸溶液。2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红。</p><p>12、龙志敏 200930220121 09制药一班实验二 绿豆芽的蛋白质含量测定 (考马斯亮蓝G-250比色法) 一、实验目的 1、了解考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理，掌握其测定方法。 2、熟练掌握分光光度计的使用技术。 二、实验原理 考马斯亮蓝G-250是一种染料，在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，该结合物在595nm波长下有最大光吸收。在一定的蛋白质浓度范围内(01000g/mL)，其吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于可溶性蛋白质的定量测定。 三、仪器、试剂和材料 1、仪器设备 分析天平、10mL塑料离心管、5mL移液管、研钵、量筒、50mL离心。</p><p>13、蛋白样品的获得主要包括破碎法、沉淀法、蛋白溶解等，可以根据实验目前选择最合适的方法，本文主要总结了蛋白抽提的仪器和材料的准备，试剂溶液的配制以及具体的操作步骤。蛋白提取方法1 材料和方法1.1 材料1.1.1 组织和细胞的来源：1.1.2 仪器设备机械组织匀浆器低温高速离心机 (40,000 g)超速离心机超生细胞破碎仪超纯水装置1.1.3 试剂三氯醋酸 (TCA)丙酮二硫苏糖醇 (DTT)尿素CHAPSPMSFEDTA乙醇磷酸考马斯亮蓝R350抑肽素A亮肽素试剂纯度均应是分析纯或以上。1.1.4 溶液配制(1) PBS：NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1.44 g, KH2PO4，溶于8。</p><p>14、蛋白质含量测定（考马斯亮蓝G250法）一、目的蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大分子之一，承担着各种生物功能。蛋白质的定量分析是蛋白质构造分析的基础，也是农牧产品品质分析、食品营养价值比较、生化育种、临床诊断等的重要手段。根据蛋白质的理化性质，提出多种蛋白质定量方法。考马斯亮蓝G250法是比色法与色素法相结合的复合方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种较好的常用方法。通过本实验学习考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量的原理，了解分光光度计的结构、原理和在比色法中的应用。二、原理考马斯亮蓝G250是一种染料，在游。</p><p>15、食品中蛋白质含量的测定院系：机械工程学院；专业：食品科学与工程；年级10级；班级：一班；姓名：姜海洋；学号：201044035摘要随着食品工业的快速发展，人们对食品中营养元素的要求越来越严格。蛋白质是人体生命的物质基础，是人体重要的营养元素,测定蛋白质的含量有利评价食品的营养价值，合理开发利用食品资源。同时对提高产品质量，优化食品配方有重要意义。关键字：食品 蛋白质 含量 测定前言化学分析是一门以实验动手为基础的理论课程。其主要以化学分析为基础，根据物质分子的一些理化特征：酸碱特性，氧化还原特性等用一些化学试。</p><p>16、血清白蛋白的分离与纯化、蛋白定量测定,实验目的,掌握DEAE纤维素层析法分离纯化蛋白的方法 掌握考马斯亮兰法测定蛋白质的原理,DEAE纤维素层析法分离纯化白蛋白,离子交换层析基本原理,根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法 以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式,离子交换剂,离子交换剂由基质、电荷基团（或称功能基团）和反离 子组成。基质一般是不溶性聚合物，如纤维素，交联葡聚糖， 交联琼脂糖等；,树脂 O N+(CH3)2 OH-,纤维素O CH2 COO- Na,基。</p><p>17、实验 双缩脲法测定蛋白质浓度,一、实验目的 1.学习分光光度法测定的原理和方法 2.学习蛋白质含量测定的原理和方法 3. 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法,二、原理,一、分光光度法的基本原理及方法 （一）利用吸收光谱对物质进行定性分析 1原理,2主要方法： （1）比较吸收光谱曲线 （2）比较最大吸收波长 蛋白质的最大吸收波长为280nm， 核酸的最大吸收波长为260nm。,（3）比较吸光度的比值 纯DNA,（二）利用吸收光谱对物质进行定量分析,1原理 Beer-Lambert（比尔）定律： T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 其中：T为透光率；A为吸光率；I0为入。</p>