金汤匙中黄酮的提取和抗氧化性研究毕业论文

楚雄师范学院本科论文（设计）楚 雄 师 范 学 院本 科 生 毕 业 论 文题 目：金汤匙中黄酮的提取及抗氧化活性研究专 业： 化 学 学 号： 20091051236 学生姓名： 毕先琴 指导教师： 邹 艳 丽 职称： 讲师 论文字数： 7136 字 完成日期 ： 2013 年 5 月教 务 处 印 制楚雄师范学院本科论文（设计）目录摘要 I关键词 IAbstract . 错误！未定义书签。Key words . 错误！未定义书签。前言 11 实验部分 . 11.1 原料、试剂与仪器 11.1.1 原料 11.1.2 试剂 11.1.3 仪器 11.2 实验部分 11.2.1 原料处理 11.2.2 芦丁标准溶液的配制 21.2.3 最大吸收波长的选择 21.2.4 标准曲线的绘制 21.2.5 黄酮的提取 21.2.6 提取液定性实验 2楚雄师范学院本科论文（设计）1.2.7 黄酮含量的测定 21.3 单因素实验 21.3.1 回流时间对金汤匙中黄酮提取率的影响 21.3.2 提取温度对金汤匙中黄酮提取率的影响 21.3.3 料液比对金汤匙中黄酮提取率的影响 21.3.4 乙醇体积分数对金汤匙中黄酮提取率的影响 31.4 正交试验 31.5 清除羟基自由基实验 32 结果与分析 32.1 最大吸收波长的选择结果 32.2 标准曲线的绘制结果 42.2.1 标准曲线的绘制结果与分析 42.3 提取液定性实验结果 42.4 单因素实验结果与分析 52.4.1 回流时间对金汤匙中黄酮提取率的影响 52.4.2 提取温度对金汤匙中黄酮提取率的影响 62.4.3 料液比对金汤匙中黄酮提取率的影响 72.4.4 乙醇体积分数对金汤匙中黄酮提取率的影响 82.5 正交试验结果与分析 82.5.1 正交试验 82.5.2 正交试验结果与分析 82.5.3 平行三次实验 92.6 清除羟基自由基实验与结果 92.6.1 清除羟基自由基实验 92.6.1 清除能力分析 9楚雄师范学院本科论文（设计）3 结论 10参考文献 11致谢 12楚雄师范学院本科论文（设计）I金汤匙中黄酮的提取及抗氧化活性研究摘要：用索氏回流法从金汤匙中提取黄酮类化合物，采用乙醇水溶液作为溶剂，通过单因素实验，正交试验确定最佳提取条件，以芦丁为标准对照品，采用分光光度法测定金汤匙中总黄酮的含量；结果显示，金汤匙提取液中含黄酮类化合物，最佳提取条件为：提取时间 2h、提取温度80、料液比为 1：40、乙醇体积分数 60%。在该提取条件下，测得金汤匙中的黄酮含量为7.09%。 黄酮提取液对羟基自由基的清除率作用实验。通过实验证明黄酮类化合物具有一定的抗氧化性。关键词：金汤匙；黄酮；提取；含量测定；抗氧化性楚雄师范学院本科论文（设计）IIThe studies on exeraction of flavonoids and antioxidant activity in folium pyrrosiaeSummary: with return law from gold spoon in the extraction yellow ketone class compounds, used ethanol water solution as solvent, through single factors experiment, orthogonal test determines best extraction conditions, to Reed d for standard against products, used points light photometric law determination gold spoon in the total yellow ketone of content; results displayed, gold spoon extraction liquid in the with yellow ketone class compounds, best extraction conditions for: extraction time 2H, and extraction temperature 80 , and material liquid than for 1:40, and ethanol volume score 60%. In the extract under conditions measured in breeding for flavonoid content of 7,013%. Brass extracts on hydroxyl radical scavenging rate effects. Experimentally demonstrate flavonoids have antioxidantKey words: folium pyrrosiae; extract; content; antioxidant楚雄师范学院本科论文（设计）1金汤匙中黄酮的提取及抗氧化活性研究前言蕨类植物是植物中主要的一类，分布广泛，种类丰富，约有 12000 种，我国是世界上蕨类资源最丰富的国家之一，约有 2 600 种，其中我国的华南、西南地区的蕨类植物蕴藏量较大,仅云南省就有 1 000 余种，被誉为“蕨类植物王国”，此外有几百种蕨类植物中含有黄酮化合物，具有多种生物活性的多酚类化合物，具有多种生理和药理活性，如抗炎抑菌,降血糖,抗氧化,抗肿瘤以及增强免疫能力等药理作用，民间常用其治疗风湿性关节炎, 肠胃病, 脚扭伤等。金汤匙是蕨类植物中的一种，主要分布于安徽,浙江 ,福建 ,台湾 ,四川, 云南 ,贵州等地 1。根据所查阅的资料，目前提取黄酮的主要方法有超声波法 , 有机溶剂提取法, 微波法 , 酶解法 , 大孔树脂吸收法等 2，但超声波提取法器设备要求和生产成本都较高且方法单一，大孔树脂吸附法使有机溶剂难以收回,损耗大,成本高,易燃易爆,对环境污染严重。本文拟采用有机溶剂法从金汤匙中提取黄酮类化合物。经查阅文献，目前对金汤匙中黄酮的研究并不深入，为了开发和利用金汤匙中的黄酮物质，本文对金汤匙中黄酮的提取优选及抗氧化活性进行初步研究，为其黄酮的活性及开发利用的深入研究提供基础性资料 。1 实验部分1.1 原料、试剂与仪器1.1.1 原料：金汤匙（采于昭通威信县）1.1.2 试剂：无水乙醇（AR） 、芦丁(标准品) 、亚硝酸钠(AR) 、氢氧化钠(AR) 、硝酸铝(AR) 三氯化铁(AR) 、锌粉 (AR)。1.1.3 仪器：722 型光栅分光光度计（上海青华科技仪器有限公司） ；HH-S2S 恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器厂） ；CP214C 电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司） ；电热鼓风干燥箱（浙江宁波检测仪表厂） ；摇摆式植物粉碎机。1.2 实验部分1.2.1 原料处理将金汤匙根叶洗干净 ，置于阴凉处晾干，粉碎备用。1.2.2 芦丁标准溶液的配制 3将芦丁标准品置于干燥洁净的称量瓶中，置于干燥箱中。在 120下恒重 1.5h，取出置于干燥器中冷却，冷却后准确称取 0.0133g 芦丁置于烧杯中，用 70%的乙醇溶解后移入 50mL 容量瓶中，定容，摇匀备用。1.2.3 最大吸收波长的选择 3准确移取 1.5mL 标准液于 25mL 比色管中，加入 0.80mL 5%亚硝酸钠溶液，放置 6min 后，加入 0.80mL10%硝酸铝溶液，放置 6min 后，加入 5mL4%氢氧化钠溶液，用 70%乙醇稀释至 10mL，再放置 10min，以试剂为参比，在 460-530m 波长范围测定吸光度。1.2.4 标准曲线的绘制 3分别准确移取 0.266mg/ml 芦丁对照液 0.00 mL ，1.00mL，2.00 mL，3.00 mL，4.00 mL, 5.00mL 于 25mL 比色管中，加入 0.80mL5%亚硝酸钠溶液，放置 6min 后，加入 0.80mL10%硝酸铝楚雄师范学院本科论文（设计）2溶液，放置 6min 后，加入 5mL4%氢氧化钠溶液，用 70%乙醇定容至 10mL，再放置 10min，以试剂为参比，在最大吸收波长下分别测其吸光度。1.2.5 黄酮的提取 4称取 1.0g 粉碎后的金汤匙粉末，在提取时间 2 h、提取温度 80、料液比为 1：40、乙醇体积分数 60%的条件下水浴加热回流提取 ，待冷却后，移入 50mL 容量瓶中，洗涤液一并移入，用乙醇稀释定容至 10mL，摇匀，得黄酮提取液。1.2.6 提取液定性实验 5铝盐反应：取提取液 1mL 于试管中，加几滴硝酸铝溶液，振荡。若溶液呈黄色，说明含有黄酮。氢氧化钠反应：取提取液 1mL 于试管，加氢氧化钠溶液，振荡。若溶液呈亮黄色，说明含黄酮。铁离子反应：取提取液 1mL 于试管中，加铁离子溶液，振荡。若溶液呈墨绿色，说明含黄酮。盐酸-锌反应：取提取液 1mL 于试管中，先加少量锌粉，再加几滴浓盐酸溶液，微热。若溶液呈橙黄色，说明含有黄酮。1.2.7 黄酮含量的测定 5准确移取 0.5mL 稀释后的提取液于 25mL 比色管中，加入 0.80mL5%亚硝酸钠溶液，放置 6min后，加入 0.80mL10%硝酸铝溶液，放置 6min 后，加入 5mL4%氢氧化钠溶液，用乙醇定容至10mL，再放置 10min，以试剂为参比，在实验 1.2.3 所确定的 最大吸收波长下测定吸光度，平行测定三次，结果取平均值。按公式（1）计算金汤匙中黄酮的含量。黄酮提取率= 100% （1） 23105VMCV1=10mL ；V 2=0.50mL；C测量液中黄酮的浓度(g/mL)；M金汤匙粉末的质量(g)1.3 单因素实验1.3.1 回流时间对中金汤匙黄酮提取率的影响 5取 1.0g 金汤匙粉末，按料液比 1:20、乙醇体积分数 80%、温度 80，分别在时间1.5h，2.0h，2.5h，3.0h，3.5h 下水浴加热回流提取金汤匙中的黄酮，测定黄酮提取率，以确定最佳回流时间。1.3.2 提取温度对金汤匙中黄酮提取率的影响 6取 1.0g 金汤匙粉末，按料液比 1:20、乙醇体积分数 80%，用 1.3.1 所确定的最佳回流时间，分别在 50，60，70，80，90下，水浴加热回流提取金汤匙中的黄酮，测定黄酮提取率，以确定最佳的提取温度。1.3.3 料液比对金汤匙中黄酮提取率的影响 6取 1.0g 金汤匙粉末，用 1.3.1 和 1.3.2 所确定的最佳回流时间和提取温度，乙醇体积分数楚雄师范学院本科论文（设计）380%，分别在料液比（g/mL）1:10 ，1:20 ，1:30，1:40，1:50 下水浴加热回流提取金汤匙中黄酮，测定黄酮提取率，以确定最佳的料液比。1.3.4 乙醇体积分数金汤匙中黄酮提取率的影响 7取 1.0g 金汤匙粉末，用 1.3.1、1.3.2 和 1.3.3 所确定的最佳回流时间、提取温度和料液比，分别在乙醇体积分数为 40%，50%，60%，70% ，80%下水浴加热回流提取金汤匙中的黄酮，测定黄酮提取率，以确定最佳的乙醇体积分数。1.4 正交试验 8在上述单因素实验的基础上，结合金汤匙中黄酮提取工艺的实际情况，选定提取温度（70，80,90） ，提取时间（2h,2.5h,3h） ，料液比（1:30,1:40，1:50） ，乙醇浓度（40%，50%，60%）四因素三水平进行正交试验，以黄酮提取率为指标，优化工艺条件。1.5 总黄酮提取液对羟基自由基（OH）的清除作用 9-10参照 fenton 反应的方法建立反应体系模型，利用 H2O2 与 Fe2+混合后长生存活时间短，具有很高反应活性的OH 这一性质，在反应体系中加入水杨酸后，就能有效地捕捉 OH,并产生有色产物，该产物在 510nm 波长处有强吸收。若加入具有清除 OH 功能的黄酮类化合物时，黄酮类化合物便会与水杨酸竞争OH，从而使有色产物生成量减少。采用固定反应时间法，在 500nm 波长处测定量含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，便能测定被测物对OH 的清除作用。反应体系为：在 10ml 比色管中加入 9mmol/LFeSO4 溶液 2.00mL， 9mmol/L 水杨酸- 乙醇溶液2.00mL,不同体积的金汤匙总黄酮提取液，在最后加入 8.8mmol/LH2O22.00mL 启动反应，加蒸馏水定容至 10mL，让反应体系在 37的水浴中反应 30min，以蒸馏水为参比，以试剂空白作比较，在500nm 处测定吸光度。考虑到提取液本身的吸光度，在 10mL 比色管中加入 9mmol/LFeSO4 溶液2.00mL，9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液 2.00mL，不同体积的金汤匙总黄酮提取液，加蒸馏水定容至10mL，让反应体系在 37的水浴中反应 30min，作为提取液的本底吸收，按下式计算样品液对羟基自由基的清除率：OH 清除率（%）=A 0-(AX-AX0)/A0100%式中：A 0为空白对照溶液吸光度； AX 为提取液吸光度；A X0 为不加 H2O2 提取液的本底吸光度。2 结果与分析2.1 最大吸收波长的选择结果根据实验 1.2.3，在 440550nm 范围内对芦丁标准溶液进行吸光度测定。以波长为横坐标，吸光度 A 为纵坐标作图，结果见图 1。表 1 460530nm 范围内芦丁标准溶液的吸光度波长/nm 460 470 480 490 500 510 520 530吸光度 0.361 0.379 0.402 0.418 0.423 0.415 0.393 0.351楚雄师范学院本科论文（设计）4图 1