实验九玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌

实验九 玻璃器皿的清洗包扎，培养基的配制及灭菌一、目的要求 l1、明确培养基的配制原理。l2、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。l3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 l4、了解干热灭菌的原理和应用范围。 l5、了解紫外线灭菌的原理和方法。l6、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作。二、基本原理l牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有牛肉膏、蛋白胨和 NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而 NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下 96 时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在 40 时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其 pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15 20g 水 1000ml pH 7 4 7 6干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。l紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为 200 300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以 260nm的杀菌力最强。为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒 3 5的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。超净工作台内紫外灯（线）灭菌三、器材 l牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅， pH试纸（ pH 5 5 9 0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 l培养皿，试管，吸管，电烘箱等。l牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（ 6套一包），手提式高压蒸汽菌锅等。l紫外线灯， 3 5石炭酸或 2 3来苏尔溶液，牛肉膏蛋白胨平板 。四、操作步骤l一、称量l准确、迅速，一种药品一把药勺，勿盖错药瓶盖l二、溶化l水的加法、加热搅拌l三、调 pHl忌调过头后来回调培养基的制备l四、过滤l五、分装l1、液体分装：试管高度的 1/4左右l 三角瓶容积的 1/2l2、固体分装：试管高度的 1/5左右（制斜面）l 半固体： 1/3左右（垂直穿刺）l马丁氏培养基 定容 ；瓶口棉塞培养基的制备l六、加塞l七、包扎l八、灭菌l一般 15磅（ 121 ） 20分钟l九、摆斜面l温度、斜面长度（试管的 1/2）l十、无菌检查l37 培养 2448 小时常用培养基l一、牛肉膏蛋白胨培养基l应用最广泛的 细菌基础培养基 。l配方：l牛肉膏 3.0gl蛋白胨 10.0glNaCl 5.0gl水 1000ml lpH 7.4-7.6 常用培养基l二、高氏 号培养基l用于培养、观察放线菌形态特征；l加入适量的抗菌物质（抗生素、酚）用于分离放线菌（选择性培养基）。常用培养基l高氏 号培养基配方：l可溶性淀粉 20g 按配方顺序依次溶解否则lNaCl 0.5g 产生沉淀lKNO3 1.0g lK2HPO4.3H2O 0.5g 抗生素现用现加 ,温度不宜lMgSO4.7H2O 0.5g 过高否则易分解lFeSO4.7H2O 0.01gl琼脂 15-25gl水 1000mllpH 7.4-7.6 常用培养基l三、马丁氏培养基l用于分离真菌的选择性培养基l配方：lKH2PO4 1.0g 另加孟加拉红和链霉素lMgSO4.7H2O 0.5g 抑制细菌、放线菌生长l蛋白胨 5gl葡萄糖 10gl琼脂 10-20gl水 1000mllpH 自然试管分装摆斜面摆斜面实物图五、实验报告l结果检查培养基灭菌是否彻底。试管清洁如何，培养基制备的合不合理。玻璃器皿的清洗器皿包扎器皿包扎六、思考题（ 1）培养微生物的培养基应具备哪些条件？为什么？（ 2）在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题？为什么？图 5通气塞 A配制时纱布塞法； B灭菌时包牛皮纸； C培养时纱布翻出（ 3）培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？l（ 4）干热灭菌完毕后，在什么情况下才能