b族链球菌筛查

B族链球菌 筛查蔄日明 生物梅里埃2 B族链球菌（ GBS） /无乳链球菌，兼性厌氧菌， 革兰阳性球菌，单个、成双、链状排列、长短不一 正常寄居于阴道和直肠，它是一种条件致病菌，围产 期妇女在分娩过程中，新生儿在通过产道时可被感染。 在血琼脂平板上 35 培养 18 24 h ，形成灰白色、表面光滑、有乳光、圆形、 溶血的菌落，部分菌株 无 溶血环 主要危害群体：孕产妇，尤其是新生儿 在美国，大约 25%到 40%的孕妇的产道携带这种细菌。 其中 40% 70%在分娩过程中会传递给新生儿 早发 B族链球菌病（小于 7天的婴儿）是引起新生儿疾病和死亡的 首位感染性疾病什么是 GBS？3孕产妇 GBS 定植在发展中国家中平均为 12.7%。也是我国孕妇主要携带细菌之一 ( 8. 95% 10. 10% )； 临床致病表现为菌血症、泌尿系统感染、胎膜感染、胎膜早破、 产褥感染 （发病率为 1% 7.2%，是产妇死亡的四大原因之一）、子宫内膜感染以及创伤感染。 GBS感染诱发 早产率 最高达 60%，研究表明， GBS阳性孕妇早产合并低出生体重儿、极低体重儿的可能性增加 20%-60%。新生儿 超过半数的新生儿是在母亲 GBS 检查阳性但没有接受治疗的情况下出生，约有 2% 最终发展成为侵袭性疾病 早发型感染 -80%(生后 7 d以内 )主要引起 肺炎和败血症 ,是新生儿死亡的主要原因之一 晚期感染 -20%（生后第 1周至 3个月，平均 1个月 )，通常因横向传播引起，表现为 菌血症发热和脑膜炎 。 值得注意的是， GBS感染即使治愈，也可能 遗留长期病理状态 如耳聋、视力受损、发育障碍以及脑瘫等GBS的主要危害4 70年代美国新生儿 GBS感染的发病率是 (2 3) /1000活产婴 ,病死率大于50%。 90年代以来 ,美国的产前抗生素预防策略使 GBS感染的发病率和病死率均有所降低 ,其中新生儿早发型 GBS感染的发病率下降了 70% ,但在晚发型却没有明显变化。 GBS新生儿感染率母亲阴道携带 GBS是新生儿感染的主要高危 因素之一。要降低孕产妇的带菌率以及新生儿的发病率和病死率 ,就需要先进的 GBS诊断技术 ,这样才能有效地对感染者进行预防和治疗CDC与其他机构共同制定了 围产期 B族链球菌感染筛查及防治指南 ，并于2002年和 2010年进行了修改，发病率从90年代早期 1.7/1000个新生儿降低到了近些年的 0.34-0.37/1000个新生儿。5Case analysis67 对 所有 孕妇于妊娠 35-37周进行 GBS筛查，结果阳性者进行预防性治疗 以下情况，应进行 GBS检查和预防性治疗： 本次妊娠有 GBS菌尿； 上次新生儿 GBS感染史； 在妊娠 37周之前分娩； 胎膜早破 分娩温度超过 38 GBS阳性孕妇新生儿出生 以后 产程中发生宫内感染的产妇及新生儿 根据 统计，这种方案会对 26.7%的分娩 者进行 预防性治疗，可以预防 86%的 新生儿早 发 GBS感染美国 CDC-2010 GBS筛查指南8美国 CDC-2010 GBS筛查指南 GBS治疗给予青霉素预防(对于青霉素 过敏 的病患 )孕 35-37周取阴道和直肠拭子做 GBS检测毋须药物预防GBS(+)GBS(-)GBS(+)GBS(-)未做分娩期预防性使用抗生素，以防止围产期 B族链球菌感染， B组链球菌的发病率在过去十年中 下降 70 -US 产时高危因素：产时发热38 ，胎膜早破 18小时进行 GBS检测青霉素 G首剂 480万单位，后每 4小时 240320万单位静滴直至分娩或阿莫西林首剂 2g，后每 4小时 1g静滴直至分娩患者使用青霉素出现下列症状：过敏反应；血管性水肿；呼吸困难；荨麻疹否 是是否对克林霉素和红霉素敏感头孢唑啉首剂 2g，后每 8小时 1g静滴直至分娩万古霉素每 12小时 1g静滴直至分娩 克林霉素 900mg每 8小时静滴直至分娩是是否否9GBS检测方法比较显色培养基 PCR 免疫 备注原理 培养 DNA PCR ELISA/胶体金 培养方法是细菌检测的金标准操作流程 采样 -接种 -孵育 -观察采样 -准备样品（震荡离心）-准备对照品 -DNA提取 -准备反应液和反应管 -扩增 -分析结果胶体金：采样 -稀释 -加样 -观察结果 ELISA:样品准备 -加样 -孵育-洗板 -底物反应 -读数显色培养基操作最简单所需设备 无 离心机、荧光 PCR仪、漩涡混合器、恒温震荡器 ELISA:酶标仪、洗板机； 胶体金：无 显色培养基检测毋需设备，节省成本作用培养 +初步鉴定 GBS，培养的菌落可用于后续药敏实验鉴定 GBS 鉴定 GBS显色培养基除可做培养和初步鉴定外，其菌落可用于后续的药敏实验，而PCR和免疫方法则仅用于鉴别，如需药敏实验必须重新做培养可检测样本 阴道直肠拭子；尿液；新生儿胃吸出物等 阴道直肠拭子 血清，血浆等 孕妇筛查适用样本为阴道直肠拭子检测时间 18-24小时 2小时 2小时虽然 PCR和免疫学方法有速度优势，但对于筛查的病人，并不急于诊断，所以实验室和临床可以接受培养相对较慢的速度用户成本 较低 较高 ？ 一般收费 60-80 60-100 ELISA:30-60 胶体金： 10-20 GBS检测方法比较10 chromID StreptoB（ 43461-86）B族链球菌筛查培养基 上海生产 筛查临床样本中 孕产妇 B族链球菌携带情况 。chromID StreptoB B链筛查培养基 &增菌液 Todd Hewitt broth + antibiotics（ 42116）B族链球菌增菌肉汤 法国进口（ 10个月效期） 用于孕妇阴道 肛肠样本中 B族链球菌检测时的选择性增菌 培养基中成分有助于含多种微生物标本中链球菌的生长。 培养基中含抗生素（萘啶酸和粘菌素）能抑制标本附属菌群中的大部分革兰氏阴性菌的生长。11 B族链球菌筛查培养基是一种选择性产色培养基，供医疗机构用于筛查临床样本中孕妇 B族链球菌携带情况。 由不同种类的蛋白胨、 3种 显色底物和抗生素组成，这些成分能够通过培养基上生长出的 浅粉色 到 红色 菌落来筛查无乳链球菌。 其它细菌和酵母菌多数不在这种培养基中生长，或产生紫色、蓝色，无色的不典型菌落。 典型的无乳链球菌落呈 浅粉色 到 红 ，圆形呈珍珠状B链筛查培养基12 采样B链培养基使用方法阴道口 1 / 3 肛门括约肌 25cm孕妇 ：先檫去外阴分泌物，将 1根无菌阴道拭子放入阴道下 1/3内，旋转 1周采取阴道分泌物，再使用 1根棉拭子插入肛门，在肛门括约肌上2-3cm处轻轻旋转取得直肠分泌物新生儿 ：无菌棉拭子在新生儿鼻腔，咽部旋转 1周取分泌物。脑脊液、血液、痰液亦可* 新生儿消化胃液在国外临床实验中为有效样本类型13 接种 读取结果B链培养基使用方法Todd-Hewitt增菌肉汤（ 18-24h）接种到 Strepto产色培养基（避光 18-24h）接种到 Strepto产色培养基（避光 18-24h）如 24h无生长延长至 48小时粉色 至 红色 ，圆形 &珍珠状菌落 -GBS 无生长或蓝色紫色无色不典型菌落 -杂菌使用选择性增菌液，可显著提高阳性率，避免 50%的 GBS携带者出现假阴性结果 (US-CDC2010) （有氧， 37 ）14Streptococcus agalactiae ATCC NCTC 8190无乳链球菌 ATCC 12386 + 粪肠球菌 ATCC 29212无乳链球菌 ATCC 12386 + 白色念珠菌 ATCC 10231颜色典型，清晰明确的判读结果（纯菌落）实验室实物拍摄15颜色典型，清晰明确的判读结果（临床标本）血平板需透光观察少小菌落易漏诊非溶血 B链无法观测StreptoB 产色平板颜色典型，清晰可辨所有的 B链均可被检出：无论是否具有溶血性16增菌液的必要性和色素增菌液的缺陷17 市场容量 平均每年 1600万新生儿（二胎政策开放以后，新生儿数量会增加），目前约一半剖腹产，随着剖腹产手术的管理加强，顺产儿会超过半数 除 35-37围产期筛查之外，有部分医院在 产中 会做筛查，以保证孕妇和胎儿的健康情况，避免因为 GBS引起的胎膜早破，羊膜腔感染和产褥感染等 定位 综合性三级医院 地区性有影响力的妇幼保健医院 外资医院（ GBS筛查指南要求比较严格） 收费情况 GBS筛查 /检测（ 100-200不等） 套用一般性细菌培养与鉴定（ 60-80不等）国内市场容量 /定位 /收费孕妇： X某孕期： 36周症状：发烧标本：阴道拭子 /肛拭子检测方法：产色培养基检测 试剂 ： chromID StreptoBB族链球菌检测 案例（临床标本）郭健飞 市场部 生物梅里埃19采集标本直接接种37 有氧， 24小时后转运培养基，变浑浊阴道标本，无菌生长 肛门标本， 蓝色 细菌37 有氧， 24小时后，没有发现 浅粉色 /红色 ，圆形珍珠状 菌落。继续培养 24小时2048小时的生长情况l 阴道标本 阴性 ， 48小时，没有细菌生长；l 肛门标本 阴性 ， 48小时，没有 B族链球菌（ 浅粉 /红色 ，圆形珍珠状）21根据说明，两个标本均 排除 B族链球菌感染的可能强光照射下下出现疑似菌落，为了验证产色培养基的培养结果，使用 Vitek MS （20 Mins） 进行快速鉴定lac