药典微生物培训资料ppt课件

微生物的基本知识回顾1.什么是微生物：微生物（ microorganism, microbe）是一类个体微小、结构简单，肉眼不可见或看不清楚的微小生物的统称 。2. 微生物的特点： 个体微小，结构简单 :细胞大小以微米和纳米计量。 种类繁多、分布广泛 ： 一克沃土中含菌量高达几亿甚至几十亿生长繁殖快，代谢能力强 ： 大肠杆菌（ Escherichia coli）在适宜的条件下，每 20分钟即繁殖一代， 24小时即可繁殖 72代。遗传稳定性差，容易发生变异 ： 自发突变频率为 10-6左右细菌的性质 1 菌体形态 :球，杆，螺旋革兰氏染色革兰氏染色 1884年丹麦医师 Gram所发明 真细菌根据细胞壁结构分为革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌 约 40层 网状肽聚糖 覆盖在细胞表面， 磷壁酸 贯穿于肽聚糖层，形成厚约 2080nm的细胞壁； 磷壁酸贯穿其中；革兰氏阳性菌（ G+）细胞壁结构 内壁层：靠近细胞膜，为 12层网状肽聚糖； 外壁层： 脂多糖（ LPS）、磷脂层和脂蛋白层；革兰氏阴性菌 （ G-） 细胞壁结构脂多糖的结构模型O-特异侧链核心多糖类脂 A内毒素热源质细菌的特出结构芽孢：在其生长的一定阶段在细胞内形成圆形或椭圆形、圆柱形休眠体结构称为芽孢。 功能：对恶劣环境有很强的抵抗能力 ，有的芽孢，在一定条件下可保持活力数年甚至数十年之久，它本身具有一个细胞维持生命的所有功能。特点：耐高温，抗热性很强；抗化学药物和酸类；对溶菌酶有抗性 。细菌的特出物质 热原质：特点：耐高温；不具挥发性（重要疏水原理）；易被强酸、强碱破坏；可滤过性；易吸附性；可稀释性（水溶性） 内毒素：细胞壁外层，属于细胞壁的组成部分（脂质 A）一般与细胞结合在一起不分泌到环境中，只有当细菌溶解（裂解）后才释放出来，故称内毒素。少量内毒素 0.001g入血即可引起发热反应。内毒素被吞噬细胞吞饮后，细胞释放出内源性致热原，经血流到达下丘脑， 体温调节中枢引起发热。 作用特点：没有组织器官的选择性 肌体发热，腹泻，出血性休克或其他组织损伤 不能经甲醛脱毒2、 菌落（ colony）： 单个 （或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成 肉眼可见 的、 有一定形态结构的 子细胞生长群体。菌落 单位为 CFU ( Colony-Forming Units )。众多菌落连成一片菌苔（ lawn）通常情况下，纯培养能较好地被研究、利用和重复结果，因此，把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是微生物学研究的基础。3 细菌纯培养的群体生长规律 把一定微生物接种到一把一定微生物接种到一定量的液体培养基中，在定量的液体培养基中，在一定条件下进行一次性培一定条件下进行一次性培养，定时取样测定活菌数养，定时取样测定活菌数，以，以 活菌数的对数值活菌数的对数值 为纵为纵坐标，以坐标，以 培养时间培养时间 为横坐为横坐标，就可以画出一条有规标，就可以画出一条有规律的曲线，这就是微生物律的曲线，这就是微生物的典型生长曲线（的典型生长曲线（ 繁殖曲繁殖曲线线 ） .一般把典型生长曲线划分一般把典型生长曲线划分为为 适应期、对数增长期（适应期、对数增长期（指数期）、稳定期和衰亡指数期）、稳定期和衰亡期期 等四个时期。等四个时期。适应期 对数增长期 稳定期 衰亡期 球菌（直径）： 0.5 1 mm 杆菌（直径 长度）：0.2 1 mm 1 5 mm青霉的分生孢子头 根霉的孢子囊和孢囊孢子酵母菌是对一类单细胞真菌的通称；有球形、卵形、椭圆形、圆柱形等；大小在 5-20 m霉菌的霉菌的细胞呈细胞呈分枝或分枝或不分枝不分枝的丝状的丝状，直径，直径约约 210 m细菌菌落 放线菌菌落 霉菌菌落湿干薄而小厚而大密而小厚而大细菌酵母放线菌霉菌酵母菌2010年版中国药典微生物检验主要增修订内容 1.培养基的质量控制 2.菌种的质量控制1.微生物检验培养基质量控制技术培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。1.1培养基制备过程中的注意事项1.1.1培养基的水化 培养基水化时不得用铜锅或铁锅 ,以防有离 子混入培养基中 ,影响微生物的生长； 配制培养基最常用的溶剂是纯化水 ,不能含有任何可能抑制或影响微生物生长的物质；培养基制备过程中的注意事项1.1.2 培养基的溶解在培养基分装灭菌前 ,各成分应溶解均匀 , 使用电炉等设备煮沸培养基时 ,应用小火加热 ,并边加热边搅拌 ,避免培养基焦化或爆沸溢出。培养基制备过程中的注意事项1.1.3 培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌 湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间培养基制备过程中的注意事项1.1.4 培养基的 pH微生物必须在适宜的 pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。调整培养基的 pH,应用 1 mol/LNaOH或 1 mol/L HCl调整 pH，一般灭菌前比最终 pH高 0.2 0.3。培养基制备过程中的注意事项1.1.5 培养基的保温灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度 ,避免长时间保存在灭菌锅内 ,造成过度灭菌 ,影响培养基的营养成分或选择性效果。1.2 培养基质量控制（ 2010版药典）培养基适用性检查计数培养基 控制菌检查用培养基 1.2.1培养基适用性检查的基础一、对照培养基 系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。1.2.2 计数培养基适用性检查 大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌 白色念珠菌黑曲霉 白色念珠菌营养琼脂培养基Nutrient Agar (NA) 玫瑰红钠琼脂培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（ YPD） Yeast Peptone Dextrose Agar 50-100CFU1.2.2 计数培养基适用性检查结果判定 被检培养基上的菌落平均数对照培养基上的菌落平均数菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致 70% 菌落计数法证明培养基生长能力 USP USP要求每批配制培养基作促生长能力测试 菌种选择（变化大）： 每个微生物单独测试 大豆酪蛋白消化培养基：金葡，铜绿，枯草 沙堡葡萄糖培养基：白念，黑曲 方法：在培养中加入少量中（ 不超过 100cfu）的微生物，按要求培养。对于新鲜制备的菌液，生长与前批已通过测试的培养基的前次测试结果一致。标准： 计数结果与标准接种物的计算量差别小于系数 2（即 计数结果在标准接种物数量的 50%-200%）。1.2.3 控制菌检查用培养基适用性检查促生长能力抑制能力指示能力检查项目1.2.3 控制菌检查用培养基适用性检查 促生长能力检查增菌培养基促生长能力检查：分别接种不大于 100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及 最短培养时间 下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管 试验菌应生长良好。 培养基基本要求1.2.3 控制菌 检查用培养基适用性检查 促生长能力检查固体培养基促生长能力检查：取试验菌各 0.1ml（含菌数 50 100cfu）分别 涂布 于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。被检培养基与对照培养基生长的菌落大小形态特征应一致。 培养基基本要求USP控制菌检查用固体培养基能力检查： 使用表面涂布法，在培养中加入少量中（不超过 100cfu）的微生物，在规定温度下培养不超过规定的最短时间。清楚的观察到与前批已通过测试的培养基的前次测试结果一致。 注：有生长就行，无数字上要求。1.2.3 控制菌检查用培养基适用性检查 抑制能力检查培养基抑制能力检查：接种不少于 100cfu 的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及 最长时间 下培养， 试验菌应不得生长。 针对选择性培养基：胆盐乳糖培养基、胆盐乳糖发酵培养基、四硫磺酸亮绿培养基；（金黄色葡萄球菌）溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基，亚碲酸盐肉汤培养基、卵黄氯化钠琼脂培养基，甘露醇氯化钠