细胞培养概述

细胞培养概述体外培养 Tissue culture in vitro从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特定的条件下，进行孵育培养，使之生存并增殖细胞培养把取得组织用机械或消化方法分散成单亇细胞悬液，然后进行培养、增殖。组织 块 培养把活体的小片组织置于底物上孵育，细胞自其周围移出并增殖器官培养将活体的器官或器官的一部分取出，置于体外 , 在 适当的培养条件，气相条件和生长基质等条件下， 生存、生长并同时保持其一定的结构和功能持征。器官培养器官培养中的小块组织块包含了不止一种基本组织。是由几种组织共同构成的具有器官的结构和功能特征的组织块。 培养时 ,其内部的细胞能按照在体内器官的正常生长发育规律继续生长，培养的器官内部结构与体内相似，保持与在体内时相似的解剖关系和功能特征。器官培养的目的在体外环境下维持器官内部的发育分化以及结构与功能特征，以便直接观察和研究器官的发育分化过程、功能表现及其影响因素 。细胞培养的优点1.活细胞 ：能 长时间 、 直接观察 、研究活细胞 的形态、结构、生命活动优点2.可控制 ：可控制 -选择对象 ： 均一性、重复性哪一种：类型：上皮？间质？ -性质：正常？肿瘤？ -阶段：可控制 -调节条件 ： 各种因素物理、化学、生物等因素优点2.可控制 ：可控制 -利用方法 ：采用各种研究技术、记录方法：研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦 显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记 -记录：摄影照片、缩时电影、电视 -优点3.应用广 ： 学科多 ：对象广 ：各种动物：低等动物 -高等动物 -人类一种动物：不同年龄 -不同组织 -正常或异常（肿瘤 -）优点4.较经济 ：可提供 大量 、 同时 、 重复性好 的、生物学性状相似 的实验对象细胞培养的缺点 现人工模拟体内环境的技术已经很高 , 但 , 人工所模拟的条件 与 体内 实际情况仍 不完全相同 . 当细胞被置于 体外培养 后 ,生活在缺乏动态平衡的环境中 ,久了， 发生变化 .与体内主要不同缺乏体内的 系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的 影响缺点因此，相对 孤立 、相对单一失去原有组织结构和细胞形态分化减弱或不显细胞趋向 单一化3.提示要正确认识 体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体 。生长类型按生长方式 :2型粘附型 细胞 :能附着在某一固相支持物表面 生长的细胞 。悬浮型 细胞 :不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞 。绝大多数 有机体细胞 属粘附型 细胞，只有少数细胞类型，如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长 贴附 (粘附 )型细胞 粘附 :是大多数有机体 细胞 在体内生存 和 生长发育 的 基本存在方式含义 两 方面结果 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须粘附 于一 固相表面才能 生存 和 生长 。培养时 ：细胞被放到体外环境中以后 ,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞 。粘附 (锚定或锚着 )依赖型性细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞类型细胞在体内、外 的 粘附 方式： 存在差异体内 ： 粘附 是 全方位 -外形 具有 复杂的立体特征体外 ：多数情况，细胞只有 一个附着平面外形 一般 与体内时明显不同按照培养细胞的主要形态，可分为 几大类型 分类 根据形态大致的不同，主要 2类：上皮样成纤维细胞样其它，不定型上皮样细胞型 名称： 仅形态上似体内 ，实际上不完全等于 -来源： 来源于外胚层如：皮肤及其衍生物消化道，乳腺，肺泡 上皮性肿瘤形态： 类似 体内的 上皮细胞扁平 ， 不规则多角形 ，中有圆形核 生长特点易相连 成片相靠 紧密相连 成薄层 铺石状生长 时呈 膜状 移动很少 脱离细胞群而 单个活动成纤维细胞样细胞 名称： 凡在 培养中形态与成纤维细胞类似 的来源： 由 中胚层间充质组织起源 的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，形态： 似体内成纤维细胞 的形态胞体梭形 或不规则三角形胞质向外伸出 23个 长短不等的突起中有卵圆形核生长特点排列成 放射状 ， 漩涡状并不紧靠连成片 ，细胞 细胞接触易断开而单独行动游离的 单独的 成纤维样细胞，常有几个 伸长的细胞突起注意：贴附生长型 -类型1. 与体内 同名的 细胞 不完全相同如： 形态相似 的成纤维细胞， 可不同来源自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但发展趋向不同2. 培养细胞的 形态不稳定条件改变 ，细胞形态 可有变化 培养细胞形态不稳定血清 Hela 高血清 低血清成纤维细胞样 上皮样细胞pH Hela 太酸或太碱 标准 pH成纤维细胞样 上皮样细胞细胞密度 3T3 低密度 高密度成纤维细胞样 上皮样细胞生长状态改变悬浮或贴附 悬浮 贴附圆形 成纤维或上皮样转化与否 未转化 转化后成纤维样 可成上皮样 注意细胞鉴定悬浮生长型概念培养时 不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源自 血 ，