活性氧（ros）介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研究

活性氧（ ROS）介导的乙醛氧化损 伤心肌致细胞凋亡的初步研究 上海中山医院 心血管病研究所 研究背景 酒精性心肌病迅速蔓延 在西方世界，酒精是继发性非缺血性扩张型心肌病主要原因 1) 据统计，成年人 2/3不同程度饮酒 2) 酒精性心肌病 ,1/3以上与酒精有关 在中国，随着生活水平不断提高，酒精性代谢相关疾病增多 乙醇？乙醛？损伤心肌 乙醇，乙醛诱导心肌细胞比较实验 1）养化应激水平 2）细胞凋亡水平 转基因过表达 ADH或 ALDH比较实验 1）过表达 ADH加剧心肌收缩功能障碍 2）过表达 ALDH减少心肌细胞凋亡 乙醇 乙醛 乙酸ADH ALDH 乙醛通过何种途径损伤心肌？ 心肌肥大、凋亡致功能改变 遗传因素 病毒感染 DNA突变 免疫改变 T细胞杀伤 心肌炎 ROS ROS途经导致静脉内皮细胞凋亡 J. Biol. Chem. 279:11244. 心肌细胞胞浆特异表达 -MHC, 200 体外心肌细胞培养 ROS随乙醛诱导浓度增加的变化 umol/L ROS随乙醛诱导时间增加的变化 h 乙醛诱导心肌细胞 Bcl-2蛋白表达 0 2 6 12 18 24 48 h 不同条件诱导下 ROS的变化 乙醛诱导细胞培液上清 SOD活性 h 乙醛诱导心肌细胞实验结论 ROS介导的氧化损伤是乙醛诱导心肌细胞凋亡的主要原因 乙醛较 H2O2诱导产生的 ROS增量水平低 ， 提示乙醛对心肌 作用为慢性氧化损伤 乙醛介导的氧化损伤可能经线粒体途径发挥作用 降低细胞内氧化应激水平可有效改善心肌缺氧缺血状态， 减少心肌细胞凋亡 心肌凋亡ROS 心力衰竭 功能障碍 扩张型心肌病 ？ ALDH2 蛋白质组学研究意义 筛选出差异蛋白 研究与疾病的相关性 SD鼠心力衰竭模型中 ALDH2明显下调 染色体定位： 12q24.2 蛋白定位： 线粒体内膜 醛脱氢酶 2 aldehyde dehydrogenase(ALDH2) 线粒体功能 ROS产生主要场所 引起氧化损伤 ATP能量来源 抗氧化酶系 凋亡和抗凋亡蛋白 Bcl家族 线粒体功能 ALDH2的 mRNA 转录水平表达 Normal Transplant GAPDH ALDH2 心肌组织 ALDH2活性测定结果 RT-PCR Western Blot 在 SD鼠心衰模型中 D D D D Real time-PCR 54KD 36KD ALDH2/pAd-HM4质粒构建 CAG poly A PI- SceI I-CeuIKpnIApaIXhoI (2) SalI (2) BamHI(2)XbaI (2 ) SalI (2) PstI (2)? SphIHindIII (3) total 35.3kb 1720bp 730bp 30.3kb Ampr XbaI （ 2 ) ALDH2 1954bp EcoR Pst Bgl Bgl Hind 0.8kb2.5kb Adeno virus genome E3(-)(28133-30818) Adeno virus genome E1(-)(342-3523) ITR ITR PacI PacI 技术路线 细胞培液上清 DCM组 转 ALDH2*1 形 DNA ladder 态 TUNEL 基 ALDH2 因 ADH-1 蛋 Bcl-2家族 白 caspase 移植心脏组织 SD鼠心肌细胞 活 ALDH2 性 ROS 对照组 对照组 乙醛干预 转 ALDH