食品中常检病原微生物的检验技术课件

食品中常检病原微生物的检验技术 病原微生物是严重危害人体健康的一种指标菌。病原微生物检 验它是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品能否 食用的科学依据之一。通过病原微生物的检验，可以判断食品加工 环境及食品卫生环境，能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评 价，为各项卫生管理工作提供科学依据，提供传染病和人类，动物 和食物中毒的防治措施，有效地防止或者减少食物中毒人畜共患病 的发生，保障人民的身体健康；同时，它对提高产品质量，避免经 济损失，保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。食品中 不允许有任何病原微生物，一旦检出，则该食品卫生质量不合格。 目前食品中经常检验的致病菌有沙门氏菌、副溶血性弧菌、致病性 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及志贺氏菌等。通过本章学习要达到以 下目的： 1、了解食品的质量与常检病原微生物检验的意义。 2、掌握常检病原微生物的生物学特性。 3、掌握常检病原微生物的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中常检病原微生物检验的方法。 第一节沙门菌检验 学习目的与要求 1. 掌握志贺菌的生物学特性。 2.掌握沙门菌的致病性。 3.掌握沙门菌的检验程序。 n 一、沙门氏菌的生物学特性 n （一）培养特性： 需氧或兼性厌氧；普通营养 琼脂上生长良好，菌落中等大小，无色半透明 、圆形、光滑、湿润。 3 n （二）生化特性： n 大部分发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇和山梨 酸产气； n 一般不发酵乳糖和蔗糖，不发酵侧金盏花醇 ； n 一般不产吲哚， V-P反应阴性； n 不分解尿素，苯丙氨酸不脱氨； n 三糖铁琼脂斜面常产生 H2S。 4 5 二、沙门菌检验二、沙门菌检验 （一）检验所需器材与培养基（一）检验所需器材与培养基 1、器材、器材 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下 ： 冰箱（冰箱（ 25 ），恒温培养箱），恒温培养箱 (361 、 421) ， 均质器均质器 ，振荡器，电子天平（感量，振荡器，电子天平（感量 0.1g），全自动微生物生化鉴定系统等），全自动微生物生化鉴定系统等 。 2、培养基、培养基 缓冲蛋白胨水（缓冲蛋白胨水（ BPW），四硫磺酸钠煌绿（），四硫磺酸钠煌绿（ TTB）增菌液，亚硒酸）增菌液，亚硒酸 盐胱氨酸（盐胱氨酸（ SC）增菌液，亚硫酸铋（）增菌液，亚硫酸铋（ BS）琼脂，）琼脂， HE琼脂，木糖赖氨琼脂，木糖赖氨 酸脱氧胆盐（酸脱氧胆盐（ XLD）琼脂，沙门氏菌属显色培养基，三糖铁（）琼脂，沙门氏菌属显色培养基，三糖铁（ TSI） 琼脂等。琼脂等。 （二）检验程序（二）检验程序 检样 25g样品 +225mLBPW 1mL+SC10mL1mL+TTB10mL BS XLD(HE、显色培养基 ) 挑取可疑菌落 非沙门氏菌 生化鉴定试剂盒 或全自动微生物 生化鉴定系统 + H2S+靛基质 - 尿素 -KCN- 赖氨酸 + H2S+靛基质 + 尿素 -KCN- 赖氨酸 + H2S+靛基质 - 尿素 -KCN- 赖氨酸 +/- 反应结果与左 侧描述不符 甘露醇 +、山梨醇 + ONPG- 沙门氏菌，血清学试验 报告 TSI，赖氨酸，靛基质，尿素（ pH7.2）， KCN 42 1,18h 24h 36 1,40h 48h 36 1,18h 24h 36 1,18h 24h 36 1,8h 18h n 前增菌：食品样品在含有营养的非选择性培养基中增菌 ，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。加 工食品均应经过前增菌。 n （选择性）增菌：此培养基允许沙门氏菌持续增菌，同 时阻止大多数其他细菌的增殖。未经加工的食品不必经 过前增菌而直接增菌。 n 选择性平板分离：采用固体选择培养基，抑制非沙门氏 菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别 。 n 生物化学筛选：排除大多数非沙门氏菌，也提供了沙门 氏菌培养物菌属的初步鉴定。 n 血清学技术鉴定培养物菌种。 二、沙门菌检验共分二、沙门菌检验共分 5个步骤：个步骤： 注意事项 1、亚硫酸铋琼脂 BS，使用注意事项：不可过度加热；使用前一天 配制，且在 48h内使用；倾注平板前需摇匀；不能反复溶解；平板需避光 保存于室温环境。 2、一株待检菌需同时接种氰化钾试验管和氰化钾对照管各一支。两 管均需滴加无菌液体石蜡覆盖液面，因为氰化钾易分解，产生氢氰酸， 易挥发，影响试剂浓度 。 思考题 n 1、进行沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？ n 2、沙门氏菌在三糖铁培养基上的反应结果如何？为什么？ 第二节金黄色葡萄球菌 检测 学习目的与要求 1. 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 2.掌握金黄色葡萄球菌的致病性。 3.掌握金黄色葡萄球菌的检验程序。 一、生物学特性 （一）培养特性 金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需 氧或兼性厌氧，最适生长温度 37 ，最适生长 pH7.4，干燥环境下可 存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径 0.51.0m。 血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐 性，可在 1015%NaCl肉汤中生长。 n 1、分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不 产气； n 2、甲基红反应阳性， V-P反应弱阳性； n 3、许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝 酸盐，液化明胶。 （二）生化特性 （三）致病性 n 金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱 主要 取决于其产生的 毒素和侵袭性酶 ： a.溶血素 ：外毒素，分 、 、 、 四种，能损伤血小 板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素 ：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶 ：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶 使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻 碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化 与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶 ：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖 核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球 菌； e.肠毒素 ：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠 炎的蛋白质性肠毒素，分为 A、 B、 C、 D、 E五种。 金黄色葡萄球菌是人类 化脓感 染 中最常见的病原菌，临床表现多种 多样，可引起局部化脓感染，也可引 起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚 至败血症、脓毒症等全身感染。 n 葡萄球菌性 食物中毒 是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同 程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹 泻次之。 n 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制 品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经 8-10小时即可相当数量的肠 毒素。 14 二、金黄色葡萄球菌检验二、金黄色葡萄球菌检验 （一）检验所需器材与培养基（一）检验所需器材与培养基 1、器材、器材 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下 ：恒温培养箱：恒温培养箱 (361) ，冰箱，冰箱 (25) ，恒温水浴箱，恒温水浴箱 (3765) ，天平，天平 (感量感量 0.1g)， 均质器，振荡器，无菌吸管：均质器，振荡器，无菌吸管： 1mL（具（具 0.01mL刻度）、（刻度）、（ 10 mL具具 0.1mL刻度）或微量移液器及吸刻度）或微量移液器及吸 头，无菌锥形瓶头，无菌锥形瓶 (容量容量 100mL、 500mL)，无菌培养皿，无菌培养皿 (直径直径 90mm)，注，注 射器射器 (0.5mL)， pH计或计或 pH比色管或精密比色管或精密 pH试纸试纸 。 2、培养基、培养基 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，氯化钠胰酪胨大豆肉汤， 7.5%氯化钠肉汤，血琼脂平板，氯化钠肉汤，血琼脂平板， Baird-Parker琼脂平板，脑心浸出液肉汤琼脂平板，脑心浸出液肉汤 (BHI)，兔血浆，稀释液，兔血浆，稀释液 ( 磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 )，营养琼脂小斜面，革兰氏染色液，无菌生理盐水。，营养琼脂小斜面，革兰氏染色液，无菌生理盐水。 血平板 18h24h Bairdparker 平板 18h24h或者 45h48h 25g（ ml)样品 +225mL 75%氯化钠肉汤或 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质 Bairdparker 平板，血平板 涂片染色 BHI肉汤和营养琼脂小斜面 血浆凝固酶试验 361 18h24h 361 观察溶血 报 告 （二）检验程（二）检验程 序序 注意事项 1、平板分离：在 Baird-Parker平板上，菌落为圆形，直径 23mm， 颜色灰或黑色，周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。 2、革兰氏染色及镜检：金黄色葡萄球菌，革兰氏阳性，显微镜下呈 葡萄状排列无芽胞，直径 0.51m。 思考题 n 1、金黄色葡萄球菌在血平板或 B-P平板上的菌落特征如何？为什么 ？ n 2、食品中能否允许有个别金黄色葡萄球菌存在？为什么？ n 3、鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么？ 第三节志贺菌检验 学习目的与要求 1. 掌握 志贺菌 的 主要生物学特性 、 检验程序和检验方法。 2. 了解志贺菌的致病性。 3. 了解其他肠道杆菌。 一、生物学特性 （一）培养特性： 需氧或兼性厌氧菌，最适温度 37 ， pH6.47.8，在普通琼脂培 养基和 SS平板上，形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘 整齐、中等大小的菌落，半透明的光滑型菌落。宋氏致贺菌菌落较 大，较不透明，粗燥而扁平，在 SS平板上可迟缓发酵乳糖，菌落呈 玫瑰红色。在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 n （二）生化特性 n 1、分解葡萄糖，产酸不产气。除宋氏致贺菌，均不发酵乳糖； n 2、 VP试验阴性，不分解尿素，不形成硫化氢，不能利用柠檬酸 盐作为碳源； n 3、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷； n 4、甲基红阳性、靛基质不定； n 5、痢疾致贺菌不分解甘露醇，其它（福氏、鲍氏、宋内氏）均 可分解甘露醇。 （三） 、 致病性 致病物质： 1. 侵袭力：菌毛可粘附回肠和结肠粘膜上皮 细胞 ，并侵入细胞内生长繁殖，在粘膜固有层形成感染灶引起 炎症反应。 2. 内毒素： 作用于肠粘膜使其通透性增高，促 进内毒素吸收，形成内毒素血症（高热、意识障碍、中毒 性休克）； 直接破坏肠粘膜。形成炎症溃疡、出血，呈 典型的脓血粘液便； 还可以作用于肠壁植物神经，使其 肠蠕动失调和痉挛（直肠括约肌最明显）出现腹痛、里急 后重的症状。 3. 外毒素 ：此与霍乱弧菌、 ETEC产生的毒素相同。 其作用有三： 肠毒素性：引起早期的水样腹泻 ； 细胞毒性，对 Vero细胞、 Hela细胞、血管内皮细胞 、肾小管内皮细胞、人肝细胞均有毒性； 神经毒性或 致死毒性：注入家兔可使其麻痹、死亡。 二、检验程序 检样 25g+GN 225mL HE琼脂或 SS 麦康凯或 EMB 挑取可疑菌落 TSI，葡萄糖半固体 TSI底层产酸，斜面产碱， H2S-，不产气，无动力 血清学分型 生化分群试验 志贺氏菌属分群及 分型结果 进一步的生化试验 葡萄糖铵试验、西蒙氏柠檬酸 盐、赖氨酸、尿素、氰化钾（ KCN）、水杨苷和七叶苷 葡萄糖铵 +或任何其他阳性结果 非志贺菌 非如左述的各种结果 非志贺菌 报告 36 1,6h 8h 36 1,18h 24h 1、志贺菌属分几个群，各群有多少个血清型？ 2、志贺菌属在三糖铁尿素半固体琼脂斜面上的生化反应是什么？ 3、志贺菌四种多价血清指哪几种？ 思考题 注意事项 1、三糖铁尿素半固体为三糖铁琼脂与尿素半固体两者合并的复合培养物， 可以同时测定葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵、产酸、产气情况，并观察 H2S的 生成，尿素分解和动力；斜面上的菌苔可做玻片凝集试验。 2、由于分解葡萄糖后产酸使 PH降低，中层及斜面变黄。同时又因为细菌利 用蛋白胨后产生的代谢物，在斜面微氧环境下产碱使斜面变红，而中层保持 厌氧状态，不易氧化及挥发。仍为黄色。 3、尿素加热过高，过久可使尿素酶分解变红；如加热不足又可造成灭菌 不彻底。因此关键问题是准确控制灭菌温度及其加热时间。 第四节致泻大肠埃希氏菌检验 学习目的与要求 1. 掌握致泻大肠埃希氏菌的主要生物学特性。 2.掌握致泻大肠埃希氏菌的致病性。 3.掌握致泻大肠埃希氏菌的检验程序。 n （一）培养特性 1)需氧及兼性厌氧菌 2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好 ，在 15C-45 范围内均可生长，但最适生长温 度为 37 ，最适 pH为 7.2-7.4。 3)在普通琼脂平板上培养 24小时，可形成圆形、 凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等 大小的菌落其菌落与沙门氏菌比较相似，但 是，大肠杆菌菌落对光 (45角折射 )观察可见荧 光。 4)在肉汤培养基中生长 18-24小时变为均匀浑，而 后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。 n 一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性 5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见 溶血 环。 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7）在 S S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌 ，也因发酵乳糖产酸而 形成红色菌落 ； 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的 菌落 9）在麦康凯琼脂上培养 24小时后 孤立菌落呈红色 n 埃希氏菌 在 S S琼脂平板上形成红色菌落 n 在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠 埃希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培 养基是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖 和 pH指示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将 指示剂变红。（麦康基琼脂， 18小时， 37 ） n （二）生化特性 1）可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸 产气，有些不典型的菌株不发酵或迟缓发酵 乳糖； 2）不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵结果 不一致 ; 3）本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸脱羧 。 4）不产生 H2S，不液化明胶，不分解尿素 ; 5）、不能在氰化钾培养基上生长，靛基质试验阳 性， V-P试验阴性，不利用枸橼酸盐。后四项生 化特性是典型的大肠埃希氏菌，与此不一致的 即为非典型大肠埃希氏菌菌。 IMViC试验： 如 IMViC试验为 +、 +、 -、 -，且乳糖发酵，表明 被检物已有粪便污染，有发生肠道传染病的危 险，这是卫生细菌中常用的检测指标。（ I：吲 哚形成试验， M：甲基红试验， Vi： V-P试验， C ：枸橼酸盐利用试验） n 二、检验程序 检样 测大肠菌群 MPN 25g+营养肉汤 225mL 污染严重的检样均液 麦康凯 EMB 肠道菌增菌肉汤乳糖发酵的阳性 管 乳糖发酵或不发酵的菌落 3个 5个，氧化酶 -，革兰氏阴性杆菌 TSI，靛基质， pH7.2，尿素， KCN-，赖氨酸，动力 肠道侵袭性 大肠埃希氏菌 非如左述的 各种结果 TSI地层 +， H2S， KCN-，尿素 - 血清学试验 肠毒素 + 产肠毒素大 肠埃希氏菌 ETEC+ EPEC+或EHEC+(0157) 赖氨酸 -，靛基质 + 动力 -（ 0124动力 +/-） 非如左述的 各种结果 ETEC+ 肠道致病性大肠埃希氏菌 或 肠道出血性大肠埃希氏菌 肠道侵袭性 大肠埃希氏菌 肠道侵袭性 大肠埃希氏菌 报告 36 1 18h24h 36 1 6h 1、志贺菌属分几个群，各群有多少个血清型？ 2、大肠埃希菌在 SS、 KI等培养基上的生长情况如何？ 3、简述大肠埃希菌的检验程序？ 思考题 注意事项 克氏铁琼脂与三糖铁琼脂的主要区别在于后者加蔗糖可以排除一些发酵 蔗糖的非致病性肠道杆菌科细菌，两者主要用于初步鉴别肠杆菌科的细菌。 第五节、肉毒梭状芽孢杆菌及肉 毒毒素检验 学习目的与要求 1. 掌握肉毒梭状芽孢杆菌生物学特性。 2.掌握肉毒梭状芽孢杆菌及肉毒毒素的致病性。 3.掌握肉毒梭状芽孢杆菌及肉毒毒素检验的检验 程序。 一、生物学特性 （一）培养特性 最严格的厌氧菌 生长最适温度： 28 37 ： pH为 6.87.6，产毒的最适 pH为 7.8 8.2。 产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。 C、 D型温 度高些为宜， 35 培养 3d即可，而 E型菌低温度长时间培养效果较好。 对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。 肉毒梭状芽孢杆菌菌落 在固体培养基表面上，形成类圆形， 边缘不整齐，约 3毫米左右的菌落。菌落 半透明，表面一般比较光滑也有的呈颗粒 状，界线不明显，向外扩散。呈绒毛网状 ，常常扩散成菌苔。 u肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株间 的差异。 （二）生化特性 1、生化特性很不规律； 2、一般能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖产酸产气； 3、对麦角、凝固血清、凝固蛋白有水解作用，并引起液化； 4、不形成靛基质。能产生硫化氢。 （三 ） 致病性 1、致病物质：肉毒毒素是已知最剧烈的神经外毒素（对人致死量为 0.1ug）。 肉毒毒素经胃肠道吸收入血后，作用于中枢神经系统的脑神经核和外周神经肌肉 神经接头处以及自主神经末梢，阻碍乙酰胆碱的释放，引起运动神经末梢功能失调 ，导致肌肉麻痹。 2、所致疾病： （ 1）食物中毒：由于肉毒梭菌芽胞污染食品，未经彻底消毒，在厌氧条件下繁殖 产生毒素，食前又未加热烹调而发生食物中毒。临床表现胃肠道症状较少，在整个 病程中病人神智清楚并不发热 ,。出现复视、斜视、眼睑下垂等眼肌麻痹症状；再是 吞咽、咀嚼困难、口齿不清等咽部肌肉麻痹症状，进而膈肌麻痹、呼吸困难、直至 呼吸停止而导致死亡。 （ 2）创伤感染中毒 （ 3）婴儿肉毒： 因食入被肉毒梭菌芽胞污染的食品（如蜂蜜）后发生中毒，早 期症状为便闭，吸吮啼哭无力、眼睑下垂等。病死亡率不高。 二、检验程序 检样 毒素检测 增菌产毒培养 30 ， 5d 观察生长性状染 色镜检 毒素检测 报告（二） 分离培养 观察菌落性状 染色镜检 毒素检测 培养检查 报告（三） 报告（一） 增菌产毒培养 30 ， 5d 1、肉毒梭状芽孢杆菌的培养特性是什么 ? 2、肉毒梭状芽孢杆菌的生化特性是什么 ? 思考题 注意事项 为检出蜂蜜中存在的肉毒梭菌，蜂蜜检样需预温 37 （流质蜂蜜）， 或 52 53 （晶质蜂蜜）充分搅并后立即称取 20g溶于 100mL灭菌燕馏水 （ 37 或 52 53 ），搅拌稀释，以 8000r/min10000r/min，离心 30min （ 20 ），沉淀，加灭菌蒸馏水 1mL，充分摇匀等分各半，接种应肉培养 基 8ml10mL各一支，分别在 30 及 37 下厌氧培养 7d，按肉毒梭菌检出（ 增菌产毒培养试验）方法进行肉毒毒素检测。 第六节 副溶血性弧菌检验 学习目的与要求 1. 掌握副溶血性弧菌的生物学特性。 2.掌握副溶血性弧菌的致病性。 3.掌握副溶血性弧菌的检验程序。 （一） 培养特性 需氧或兼性厌氧 嗜盐， 在 2 % NaCL培养基中生长最好，无盐或食 盐 10% 不能生长。 最适温度 36 ， pH7.57.8 在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面 光滑，较湿润，边缘不整齐。 在血平板上可见溶血环。 一、生物学特性 （二）、生化特性 分解 葡萄糖 产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。 H2S（）、 V-P（）、靛基质（ +）、精氨酸（） 甲基红（ +）、赖氨酸（）、溶血 /- （三）、致病性 1、致病因素 脲酶 产生溶血毒素： 耐热性溶血毒素 (THD)和耐热性溶血毒素 相关的溶血毒素 (TRH)， 此外有的可产生不耐热溶血毒素 (TLH)。 2、所致疾病 食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。 361 8 18h 样品 25g(25mL)+225 mL3氯化钠碱性蛋白 陈水 硫代硫酸盐 -柠檬酸盐 -胆盐 -蔗糖琼脂或科玛嘉弧菌显色培养基划线分离 361 18 24h 挑取可以菌落，接种于 3氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂 3氯化钠碱性蛋白 陈水 3管 3 个合适的稀释度如 果进行定性检测，则不需要进行此步骤 361 18 24h 筛选试验 氧化酶试验，革兰染色 3氯化钠三糖铁琼脂，嗜盐性试验 挑取可以菌落，接种于 3氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂 生化试验 或选用 API20E生化鉴定试剂盒 VITEK 结果报告 血清学试验，神奈川试验 二 、 检验程序 1、简答副溶血性弧菌的生物学特性？ 2、简答副溶血性弧菌的自然生存环境和易受污染的食品类型？ 3、简答根据副溶血性弧菌的抵抗力特点，如何防止吃海产品副溶血性弧 菌中毒发生？ 4、简答副溶血性弧菌的致病性？ 5、解释副溶血性弧菌的检验程序？ 思考题 注意事项 1、此试验要求是用人或兔的新鲜红血球制备高盐血平板，经 37 、 24h培养，如在单个菌落周围呈现透明溶血环或在菌落下面有明显溶血者， 为 “神奈川现象 ”阳性，若不出现透明溶血环或无明显溶血者，为 “神奈川现象 ”阴性。 2、有致病性的副溶血性弧菌，多数为神奈川现象阳性，但亦有少数为 阴性。 第七节 溶血性链球菌检验 学习目的与要求 1. 掌握溶血性链球菌的生物学特性。 2.掌握溶血链球菌的致病性。 3.掌握溶血链球菌的检验程序。 （一） 培养特性 需氧或兼性厌氧菌，营养要