肝功能检验ppt演示课件

肝功能检验 1. n本章内容概要： n本章教学要求： 第二节 肝功能试验 第一节 概述 掌握 :黄疸的发生机理和各型黄疸的代谢特点及实验室鉴别诊断要点；肝 功能实验生化检查指标的种类和重点项目的测定方法及评价。 熟悉 :肝脏的生物化学功能，胆红素代谢；各测定项目的临床意义 了解 ： 肝脏的基本机构；肝功能实验项目选择的原则。 第三节 肝功能试验选择原则 2. 第一节 概 述 n肝脏结构 n肝脏的生化功能 n肝脏疾病的生化改变 3. 一、肝脏结构 （一 ）解剖学特点 双重血液供应 腹主动脉的分技肝动脉 氧 门静脉 营养 双重输出管道 肝静脉 代谢降解物 下腔静脉 胆道系统 脂溶性物质及其代谢产物 体外 4. （二 ）肝脏的显微结构特点 1、组织结构 2、亚细胞结构 （三 ）细胞的再生 5. 二、肝脏的生物化学功能 排泄功能 物质代谢功能 生物转化 重要生化功能 6. （一）排泄功能 主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨 1、胆汁酸代谢 （ 1）胆汁的分泌： 胆汁功能：促进脂类的消化吸收，同时能将体内某些代谢产物及生物转化 产物不断地排入肠道随粪便排出体外。 胆汁的来源： 肝胆汁 胆囊胆汁 十二指肠 胆汁的成分： 水 /胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、脂肪酸和胆固醇 7. （ 2）胆汁酸生成及种类： 初级胆汁酸（肝细胞）初级胆汁酸（肝细胞） 次级胆汁酸（肠道）次级胆汁酸（肠道） 初级游离胆汁酸初级游离胆汁酸 初级结合胆汁酸初级结合胆汁酸 （甘氨酸（甘氨酸 /牛磺酸）牛磺酸） 次级游离胆汁酸次级游离胆汁酸 次级结合胆汁酸次级结合胆汁酸 （甘氨酸（甘氨酸 /牛磺酸）牛磺酸） 8. 初级胆汁酸（肝细胞） 初级游离胆汁酸初级游离胆汁酸 初级结合胆汁酸初级结合胆汁酸 （甘氨酸（甘氨酸 /牛磺酸）牛磺酸） 胆酸胆酸 鹅脱氧胆酸鹅脱氧胆酸 甘氨酸甘氨酸 胆酸胆酸 牛磺酸牛磺酸 胆酸胆酸 甘氨酸甘氨酸 鹅脱氧胆酸鹅脱氧胆酸 牛磺酸牛磺酸 鹅脱氧胆酸鹅脱氧胆酸 次级胆汁酸（肠道） 次级游离胆汁酸次级游离胆汁酸 次级结合胆汁酸次级结合胆汁酸 （甘氨酸（甘氨酸 /牛磺酸）牛磺酸） 脱氧胆酸脱氧胆酸 石胆酸石胆酸 甘氨甘氨 脱氧胆酸脱氧胆酸 牛磺牛磺 脱氧胆酸脱氧胆酸 甘氨酸甘氨酸 石胆酸石胆酸 牛磺酸牛磺酸 石胆酸石胆酸 9. （ 3）胆汁酸肝肠循环： （ 4）胆汁酸的功能： 促进脂类消化 促进脂类吸收 抑制胆固醇从胆汁中析出沉淀 游离型胆汁酸游离型胆汁酸 结合型胆汁酸结合型胆汁酸 10. 2、胆红素代谢 胆色素 尿胆素原 粪胆素原 尿胆素 粪胆素 胆绿素 胆红素 未结合胆红素 (单核吞噬细胞系统如骨髓、脾脏 ) 结合胆红素（肝脏） 胆素原 11. 12. 未结合胆红素的来源与转运： 结合胆红素的来源与转运与代谢： 衰老红细胞 血红蛋白 13. 3、血氨代谢 药物及体内含氮物质（ 如嘌呤、嘧啶等） 来源 去路 相对平衡 14. 部位 肝脏细胞 鸟氨酸 瓜 氨 酸瓜氨酸 精氨酸代琥珀酸 ATP AMP+PPi 延 胡 索 酸 鸟氨酸 精氨酸 H2O 尿素尿素 天门冬氨酸 NH3 CO 2氨 甲 酰 磷 酸 +H2O 尿素循环尿素循环 15. （二）物质代谢功能 1、营养物质代谢 2、激素及维生素代谢 (1) 在蛋白质代谢中的作用 (2) 在氨基酸代谢中的作用 (3) 在糖代谢中的作用 (4) 在脂代谢中的作用 激素的灭活主要在肝脏进行 多种维生素能在肝细胞内储存并进行转化 16. （三）肝脏的生物转化 n定义： 生物转化 : 机体对许多外源性或内源性非营养物质进行化学转变， 增加其水溶性 (或极性 )，使其易随胆汁、尿排出，这种体内变化过程称 生物转化 (biotransformation)。 n转化对象： n转化特点： n生理意义： 保护机体 ,致癌、致畸 内源性非营养物 :氨、胺、胆色素、激素 外源性非营养物 :药物、毒物、食品防腐剂、色素 连续性， 多样性， 失活与活化双重性 17. 三、肝脏疾病的生化改变 （一）胆红素代谢障碍（黄疸） n定义 : n黄疸分类 : 黄疸 和阻塞性黄疸 溶血性黄疸 肝细胞性黄疸 高胆红素血症 18. 19. （二）胆汁酸代谢障碍 1、胆汁酸合成障碍 2、胆汁酸向肠道排出障碍 3胆汁酸肠肝循环紊乱 4胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱 20. （三）血浆酶异常 1肝脏合成酶类 :胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白； 2. 肝细胞内酶 : ALT、 AST 3肝脏阻塞性疾病酶活性改变： ALP、 GGT 4肝硬化疾病酶活性改变： 单胺氧化酶（ MAO） （四）血浆蛋白异常 21. 第二节 肝功能试验 n血清（浆）蛋白 n测定血清酶测定 n血清胆红素测定 n血清胆汁酸测定 n血氨测定 22. 一、血清（浆）蛋白测定 （一）总蛋白、白蛋白、及白蛋白 /球蛋白（ A/G）比值测定 1总蛋白测定 化学法 (双缩脲法 )、 物理法、染料结合法、电泳法 染料结合法 (BCG、 BCP） 、沉淀法 2.白蛋白测定 3 A/G比值 23. 【 参考范围 】 总蛋白 60 80g/L 白蛋白 35 55g/L 球蛋白： 15 32g/L A/G比值： 1.5 2.0/1 【 临床意义 】 严重肝病时，肝脏合成分子量小的蛋白质能力降低，血中 白蛋白浓度减少；而免疫系统、单核巨噬细胞合成球蛋白增加， 导致 A/G比值减少。严重则会出现 A/G比值小于 1，称为 A/G比值 倒置，表示肝功能损害严重。 24. （二）纤维蛋白原测定 （凝血因子 ） 测定方法： 分为三大类 根据纤维蛋白原的生物学特性测定方法 根据纤维蛋白原理化性质而建立的测定方法。 根据纤维蛋白原免疫学特点而建立的测定方法。 【 参考范围 】 2.22 4.22g/L(热沉淀比浊法 ) 【 临床意义 】 (1) 纤维蛋白原增加： 感染； 无菌炎症； 其它。 (2) 纤维蛋白原减少 : 严重的肝脏疾病； 其它疾病引起纤维蛋白原减少的疾病。 25. （三）甲胎蛋白（ 1-fetoprotein ， AFP）测定 测定方法： 【 参考范围 】 成人 10 30g/L 400g/L作为肝癌诊断标准 【 临床意义 】 酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、斑点免疫结合法、火箭电泳放射 自显影法、酶联火箭电泳法等 (1) 原发性肝细胞肝癌的诊断标准：血清 AFP测定值超过 400g/L(400ng/ml) ； (2)活动性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的诊断 26. （四）其它 【 临床意义 】 肝豆状核变性（ Wilson病）和遗传性色素沉积症 1.铜蓝蛋白测定 【 参考范围 】 52.9 167.7 IU/L 【 临床意义 】 遗传性血色素沉积症铁沉积 2转铁蛋白 【 原 理 】 双联吡啶法 【 原 理 】 铜蓝蛋白具有氧化酶活性 【 参考范围 】 TIBC 男 50 77mol/L 女 54 77mol/L 转铁蛋白饱和度为 33.0% 35.0% 27. 二、血清酶测定 （一）氨基转移酶测定 1赖氏法测定 ALT （）原理： ALT催化 丙氨酸 (alamine)与 - 酮戊二酸 (-oxoglutarate )之间的氨基转移 反应，生成 丙酮酸 (pyruvate)和谷氨酸 (glutamate)。 在 37 及 pH7.4条件下反应 30min，以 2， 4-二硝基苯肼 终止反应，并与底物 - 酮戊二酸和产物 - 丙酮酸的 羰基生成 2， 4-二硝基苯腙 ，苯腙在碱性条件下生成红棕色，与 505nm波长处读取 吸光度后计算活性。 （） 方法评价： 赖氏法的实验结果需与 卡门分光法的结果 对比后求出； NaOH的浓度 对显色有影响； 该法的 重复性差 。 28. 卡门氏单位 ： 1.0ml血清在 25 ， 340nm，反应体积 3.0ml,光径 1.0cm时每分钟测 定吸光度下降 0.001，即消耗 4.82 10-4mol NADH 为一个卡门氏单位 29. 【 参考范围 】 5 25卡门氏单位 【 临床意义 】 (2) 慢性活动性肝炎或脂肪肝： (1) 肝细胞损伤的灵敏指标 : ALT轻度增高 (100 200IU),或属正常范围 , 30. 2. 连续监测法测定 ALT （）原理： 采用酶偶联反应 ,即 L-丙氨酸和 - 酮戊二酸 在 ALT作用下，生成 丙酮酸 和 L-谷氨酸 。 丙酮酸再在 LD作用下生成 L-乳酸 ，同时 NADH被氧化为 NAD+,可 在 340nm处连续监测到 NADH的消耗量 ,从而计算出 ALT活性浓度。 双 试剂法 :首先使血清与缺少 - 酮戊二酸的底物溶液混合， 37 保温 5 分钟，将 标本中所含的 - 酮酸 (如丙酮酸 )消耗完 ，然后，加入 - 酮戊二酸 启动 ALT催化的反应，在波长 340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反 应期吸光度下降速率 (-A/min) ，来计算 ALT的活性。 31. （） 方法评价： 存在着两个副反应，会使测定结果偏高； A、血清中存在的 - 酮酸 (如丙酮酸 )能消耗 NADH。 B、血清中谷氨酸脱氢酶 (GLDH)增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗 NADH。 双试剂法，因温育期长，能有效地消除干扰反应，测定准确性 高，是 ALT测定的首选方法； 血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。 32. 3.赖氏法测定 AST （）原理： 血清中的 AST可催化 门冬氨酸 (aspartate)与 - 酮戊二酸间的氨基移换， 生成 草酸乙酸 (oxaloacetate)和 L-谷氨酸 。 草酸乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸 。反应 60 分钟后，加入 2， 4-二硝基苯肼终止反应 ，并与 酮酸生反应生成两种 2， 4-二硝基苯 腙 。在碱性条件下 ,两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在 505nm处差异最大，由草 酸乙酸转变成的丙酮酸所生成的苯腙呈色强度显著大于 - 酮戊二酸苯腙 。据此可 用比色法测定 AST活性。 （）方法评价： 赖氏法的实验结果需与 卡门分光法的结果 对比后求出； 该法的重复性差： 负干扰现象 33. 【 参考范围 】 8 28卡门氏单位 【 临床意义 】 肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎：血清 AST也可轻度增高。 心肌梗死：血清中 AST活性增高 各种肝病病人：血清 AST的升高 34. 4连续监测法测定 AST （）原理： 采用酶偶联反应 ,即 L-门冬氨酸和 - 酮戊二酸 在 AST作用 下，生成 草酰乙酸和 L-谷氨酸 。草酰乙酸在 苹果酸脱氢酶 作用 下生成 L-苹果酸，同时伴有 NADH转化为 NAD+， 在 340nm监测 NADH 的转化速率 ，从而计算出 AST的活性。 双试剂法 :同测定。 35. （）方法评价 误差可来自内源性和 (或 )外源性 内源性干扰主要来自血清中高浓度丙酮酸和 L-谷氨酸脱氢酶 (GLDH)。 外源性干扰来自试剂中污染的 GLDH和 AST。 【 参考范围 】 5 40 IU/L(连续监测法测定 ) 【 临床意义 】 见赖氏法 36. (二 )ALP测定 n化学法 n连续监测法： 鲍氏法 金氏法 皮氏法 37. 、金氏法测定 ALP （）原理 ： ALP在碱性环境中作用于 磷酸苯二钠 ，使之水解释放出 酚 和磷酸 。 酚在碱性溶液中与 4氨基安替比林作用，经铁氰化 钾氧化形成红色醌类化合物 ，根据红色深浅确定 ALP的活力。 (2) 方法评价： 磷酸苯二钠比色法与更早的 - 甘油磷酸钠法 相比具有较大的 优点，如 水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色稳定 、不需去蛋白、操作简单、快速 。但与 磷酸对硝基酚连续监测 法 相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐 ,，灵敏度低。 38. 【 参考范围 】 成人： 3 13 单位 ，儿童： 5 28单位 ALP金氏单位 定义是 100ml血清， 37 与底物保温 15分钟，产生 1mg酚为 1个金氏单位。 ALP主要用于诊断肝胆和骨骼疾病 【 临床意义 】 39. 2.连续监测法测定 ALP （）原理： 以磷酸对硝基酚 (p-nitrophenyl phosphate,4-NPP)为底物， 2-氨 基 -2-甲基 -1,3-丙醇（ 2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙 醇胺为磷酸基的受体。在碱性环境下， ALP催化 4-NPP水解产生游离 的对硝基酚，对硝基酚 (p-nitrophenol， 4-NP)在碱性溶液中转变成 黄色。根据 405nm处吸光度增高速率来计算 ALP活性单位。 （）方法评价： 线性范围可达 500U/L，批内 CV为 2.06% 2.36%，批间 CV为 2.74%。 40. 【 参考范围 】 男性： 1 12岁 15岁 40 150U/L， 25岁 40 150U/L。 【 临床意义 】 见金氏法 41. (三 )GGT测定法 化学法（重氮反应比色法）和连续监测法。 1. 重氮反应比色法测定 GGT (1)原理： 【 参考范围 】 男性 3 17 U/L； 女性 2 13 U/L 2.连续监测法测定 GGT (1) 原理： (2) 方法评价： (2) 方法评价： 重氮比色法活性单位： 100ml血清在 37 下反应 1hr, 生成 0.5mol的 -苯胺为 1个 GGT活性单位。 男性： 11 50 U/L； (以 - 谷氨酰 -3-羧基 -4-硝基苯胺为底物 ) 女性： 7 32 U/L 男性： 40U/L ；女性： 30U/L( 以 - 谷氨酰 -4-硝基苯胺为底物 ) 【 参考范围 】 42. (四 )MAO测定 (1)原理 : MAO主要作用于 CH2-NH2基团，在氧参与下，氧化脱氨生成 相应的卞醛、氨及过氧化氢。以苄氨偶氮 - 萘酚为底物 ,在 O2 和 H20参与下， MAO催化生成苄醛偶氮 - 萘酚、氨及过氧化氢 ，用环己烷抽提后进行比色测定。 (2) 方法评价： 【 单位定义 】 ： 1ml血清与底物在 37 孵育 60分钟，催化单胺氧化产生 1nmol苄醛偶氮 - 萘酚 为 1 个 MAO单位。 【 参考范围 】 12 40 U/ml (12103 40103 U/L) 。 【 临床意义 】 ： 肝硬化时，肝纤维化现象十分活跃， MAO活性明显升高。 43. 三、血清胆红素测定 重氮盐法 胆红素氧化酶 (bilirubin oxidase,BOD)法 高效液相色谱法 (high performance liquid chromatography,HPLC)、 导数分光光度法 直接分光光度计法 测 定 方 法 44. 1重氮盐改良 J-G(Jendrassik and Grof method,J-G)法 (1) 原理 : 血清中 结合胆红素与重氮盐反应生成偶氮胆红素 ；同样条件下， 游离胆红素 需要在加速剂作用下 ，使游离胆红素分子内的 次级键断裂 ，极性上升并与重氮试 剂反应。反应完成后加入 终止试剂 ，继而加入 碱性酒石酸钾钠 使紫色偶氮试剂转 变为蓝色，波长 600nm下比色分析，求出血样中总胆红素的含量。 (2) 方法评价： 推荐的常规方法，其方法的线性范围较宽，在 342mol/L(200mg/L)浓度 下有较好的准确性和精确性， 高浓度时准确性和精确性降低 。因此，建议浓度过 高时减少血样用量测定。 45. 【 临床意义 】 【 参考范围 】 黄疸的鉴别诊断 总胆红素 : 5.1 19.0mol/L(0.3 1.1mg/dL) 直接胆红素 : 1.71 6.8mol/L (0.1 0.4mg/dL) 46. 2胆红素 BOD测定法 (1) 原理 : BOD在不同 pH条件下催化不同组份的 胆红素氧化生成胆绿素 ， 胆绿素与氧进 行非酶促反应转变为淡紫色化合物 ，胆红素的最大吸收峰在 450nm 附近。随着 胆红素被氧化 ,450nm下降，下降程度与胆红素浓度成正比 。；在 pH8.0条件下 ,未 结合胆红素及结合胆红素均被氧化，用于测定 总胆红素 ,在 pH=4.5的酸性条件 下， BOD仅能催化结合胆红素和大部分 胆红素，而游离胆红素不被氧化，测定 其含量代表 结合胆红素 。 (2) 方法评价： BOD法测定总胆红素的准确性、精密度比改良 J-G法好 47. 【 参考范围 】 血清总胆红素： 10.264.10mol/L 血清结合胆红素： 2.572.56 mol/L 胆红素 mol/L =胆红素 mg/L X 17.1 【 临床意义 】 见重氮比色法 48. 四、血清胆汁酸测定 高效液相色谱法 放射免疫分析法 酶免疫分析法 比色分析测定法 测 定 方 法 49. (1) 酶比色法测定原理 3-HSD胆汁酸 + NAD+ 3-氧 -5 类固醇 + NADH （ 1） NADH + NBT 甲 jie（蓝色化合物 =540nm ） （ 2） 3-氧 -5 类固醇 + NAD+ 3-氧 -5 类固醇 + NADH （ 3） 黄递酶 4-DH u酶比色法 50. 由于胆汁酸在血中含量低，方法检测的灵敏度达不到要求，通过 增加 3-氧 -5- 类固醇脱氢酶 (4-DH) ，胆汁酸经 3-HSD 催化的产物 3-氧代胆酸在 4-DH 作用下再 次脱氢，加大了 NADH 的生成量，提高了反应的检测能力（见反应式 1、 2、 3） 。但 以上两种方法都存在一个缺点：生成的蓝色产物是一种染料，易于附着管壁，难于清 洗或堵塞管道。 酶循环法测定原理为： NA