sepaflashc18反相柱应用于手性异构体的分离纯化

SepaFlash C18 反相柱应用于手性异构体的分离纯化 孙文，王玉麟，徐波 应用技术研究中心 摘要 化学合成具有手性异构体的药物时，往往会同时合成出多种异构体（参见图 1） ，为了 获得目标化合物，需要对异构体进行拆分。手性异构体的拆分方法主要有结晶法、毛细管 电泳法、高效液相色谱法等。其中，高效液相色谱法主要基于手性固定相和手性流动相对 异构体进行拆分，此类针对手性拆分而开发的手性色谱柱一般报价昂贵，无形中大大提高 了药物研究过程中的成本。而本文利用常州三泰科技公司 SepaFlash Bonded Series C18 反 相柱在快速液相制备色谱系统 SepaBeanTM machine 上对手性异构体进行分离纯化，分别得 到两个手性异构体，并进一步利用 HPLC 分析法确认了目标化合物的纯度。结论：在通用 的 C18 反相柱上分离手性异构体，该方法操作简单，可行性强，为此类手性药物的分离纯 化提供了一种经济效益显著的解决方案。 图 1. 一对手性异构体的化学结构 实验部分 1 .样品分析 首先需要建立针对手性异构体的 HPLC 分析方法。经过处理后的粗品是黄色油状物， 取少量粗品用乙腈溶解，分析方法如表 1 所示。 表 1. HPLC 分析方法建立实验参数 仪器 Agilent 1100 色谱柱 Diamonsil Plus 5m C18(150mm*4.6mm) 检测波长 220nm 流动相 A：0.1%三氟乙酸； B：乙腈 流速 1ml/min % Solvent B Time / (min) 50 0 洗脱梯度 50 100 100 2 8.5 12 经 HPLC 检测，产品纯度为 57.5%，两个手性异构体获得了基线分离，且保留时间适 中（参见图 2） 。 图 2. 两个手性异构体的 HPLC 分析图谱 2 样品制备 通过对样品的 HPLC 色谱图以及梯度洗脱条件进行分析，确定该样品的纯化制备条件。 表 2. 快速分离纯化实验参数 仪器 SepaBeanTM machine 色谱柱 80g SepaFlash C18反相柱（2根相同规格的柱串联使用） （填料：UltraPure irregular C18，粒径40-63 m，孔径60） 波长 220nm 流动相 A：0.1%三氟乙酸；B ：乙腈 流速 30ml/min 进样量 200mg样品（溶于 3ml乙腈） % Solvent B Time / (min) 洗脱梯度 20 0 60 60 45 60 结果与讨论 由于 HPLC 色谱图上只是基线分离，所以制备上我们采用两根 SepaFlash C18 反相柱 串联来提高分离度，该样品在 SepaBeanTM machine 快速液相制备色谱系统上的分离图谱如 图 4 所示。虽然制备图上产品与杂质没有达到基线分离，但是通过后续 HPLC 检测表明分 离得到的产品纯度超过 98%，如图 5 所示；杂质的纯度为 94.6%，如图 6 所示。 该案例说明通过两根 SepaFlash C18 反相柱串联的设置，可以对手性异构体样品进行 有效的分离纯化。我们的方案相对基于手性拆分色谱柱的 HPLC 方法具有成本低廉、简便 可行的优势，为此类手性药物的分离纯化提供了一种经济效益显著的解决方案。 图 4. 手性异构体混合物的制备图谱 图 5. 产品的 HPLC 分析图谱（实验参数见表 1） 图 6. 杂质的 HPLC 分析图谱（实验参数见表 1） 关于 SepaFlash Bonded Series C18 反相柱系列产品 常州三泰科技公司 SepaFlash Bond Series C18 反相柱系列产品具有多种规格（参见表 3 和图 7） 。 表3 SepaFlash Bond Series C18系列反相柱参数 （UltraPure irregular C18，粒径40-63m，孔径60 ） Item Number Column Size Flow Rate(mL/min) Max.Pressure(psi/bar) SW-5201-004-IR 5.9 g 10-20 400/27.5 SW-5201-012-IR 23 g 15-30 400/27.5 SW-5201-025-IR 38 g 15-30 400/27.5 SW-5201-040-IR 55 g 20-40 400/27.5 SW-5201-080-IR 122 g 30-60 350/24.0 SW-5201-122-IR 180 g 40-80 300/20.7 SW-5201-1