滇重楼连续灌胃对肠黏膜功能障碍的抗炎保护作用

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 滇重楼连续灌胃对肠黏膜功能障碍 的抗炎保护作用 ISA 法检测血浆中二胺氧化酶（DAO） 及小肠中 HMGB1 的含量。结果 模型 组大鼠与对照组比较全血中 CK、PT、AST、BUN 含量升高， PaCO2 含量下降，存活率及小肠推进率 显著下降，差异有统计学意义（P005） 。 1、3、7d 时模型组血浆中 DAO 和 HMGB1 含量高于对照组，而 1、3、7d 时滇重楼治疗组低于模型组，差异有统 计学意义（P005 ） 。结论 滇重楼连续灌 胃可能通过下调晚期炎症因子 HMGB1 表达，抑制全身炎症反应，从而改善肠 黏膜屏障功能，发挥抗炎保护作用。 中国论文网 /6/view-13013892.htm -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 关键词：滇重楼；肠黏膜功能障 碍；脂多糖；高迁移率族蛋白 B1 中图分类号：R2855 文献标志码： A 文章编号： 1007-2349（2017）10- 0068-04 Anti-inflammatory and Protective Effects of Continuous Intestine Administration of Paris Polyphylla var Yunnanensison on Intestinal Mucosal Dysfunction XIONG Wei， CHEN Si-ru， XIU Guang-hui， LING Bin， SUN Jie， LIU Ping （Department of Severe Cases， the Fourth Affiliated Hospital of Kunming Medical University， Kunming 650021， China） 【Abstract】Objective： To observe the effect of different doses of Paris polyphylla var yunnanensison on -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 intestinal mucosal dysfunction and to explore its correlation with systemic inflammatory response Methods： The rat model of intestinal mucosal dysfunction （LPS 15mg/kg） was established and the rats were continuously administrated with different doses （20， 40， 80mg/kg） of Paris polyphylla The survival rate and the small intestine propulsion rate were measured at 24 hours The rats were sacrificed to take their arterial whole blood to determine the contents of PaCO2， creatine kinase （CK） ， prothrombin time （PT ） ， aspartate aminotransferase （AST） and urea nitrogen （BUN） The small intestine was examined by histopathology at the 1st and 7th day The arterial whole blood and small intestine were taken to determine diamines oxidase （DAO） and HMGB1 in the small intestine by ELISA at the 1st， 3rd， 7th and 14th -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 day Results： Compared with that of the control group， the level of CK， PT， AST and BUN in the whole blood of the model group increased， but the content of PaCO2 decreased The survival rate and the small intestine propulsion rate significantly decreased （P005） The levels of DAO and HMGB1 in the plasma of the model group were higher than those of the control group at the 1st， 3rd and 7th day of modeling and the difference was statistically significant （P005） Conclusion： Continuous intestine administration of Paris Polyphylla var Yunnanensison may inhibit systemic inflammatory response by down-regulating the expression of late inflammatory cytokines HMGB1， thereby improve intestinal mucosal barrier function and exert anti-inflammatory and protective effect 【Key words】Paris -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 polyphylla var；Yunnanensison；intestinal mucosal dysfunction；lipopolysaccharide；HMGB 1 肠黏膜功能障碍是脓毒症患者常 见并发症之一，也是脓毒症发病的始动 环节，其机制包括肠黏膜细胞凋亡、肠 通透性增加、胃肠动力失调、菌群移位、 炎症因子级联释放等，可使肠黏膜屏障 （机械、免疫、生物、化学屏障）严重 受损，从而加速全身炎症反应综合征 （SIRS）向多器官功能障碍综合征 （MODS）发展 1-3。肠黏膜功能障碍 常表现为不同程度的食欲不振、便秘、 腹泻、腹胀、腹痛等，严重者甚至出现 便血、肠梗阻、腹膜炎等。研究表明， 脓毒症患者的疾病严重程度与晚期炎症 因子高迁移率族蛋白 B1（high mobility group protein B1，HMGB1）呈相关性4， 因其广泛存在于真核细胞内，病理状态 下可诱导其他炎症因子释放或靶细胞损 伤，在脓毒性肠黏膜功能障碍的进展中 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 具有枢纽作用。 S 彦峰等5 报道重楼水提液可 调节小肠运动从而治疗肠道功能紊乱， 其机理可能与 M 胆碱能受体、肾上腺 素能系统有关。重楼皂苷、 可诱导小鼠淋巴细胞增殖效应，促进小 鼠粒/巨噬细胞克隆形成细胞（GM- CFC）活化，增强细胞吞噬能力，直接 参与抗炎反应6；此外，重楼还可刺激 下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）分泌糖 皮质激素间接参与抗炎反应7。在此基 础上，拟通过脂多糖 （Lipopolysaccharide，LPS）诱导的肠 黏膜功能障碍模型，观察不同剂量滇重 楼连续灌胃对肠黏膜功能障碍的影响， 并探讨其与全身炎症反应的相关性。 1 材料与方法 11 材料 滇重楼由昆明医科大学 第四附属医院药剂科提供。清洁级健康 成年 SD 大鼠雌性 150 只，体重 （22010）g，由解放军昆明总医院科 研实验中心提供（实验动物质量合格证 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 号：SYXK（滇）2015-2016） 。活性炭 末购于天津登科公司，羟甲基纤维素钠 购于上海申光公司。脂多糖购于美国 Sigma 公司；血浆二胺氧化酶（DAO） 和晚期炎症因子 HMGB1 ELISA 试剂盒 购于武汉华美公司。 12 方法 121 动物分组及处理 清洁级健 康雌性 SD 大鼠 150 只，自由饮食，随 机编号为 5 组，30 只/组，分对照组、 模型组、低剂量组、中等剂量组、高剂 量组。各组大鼠禁食 6h 后，低、中、 高剂量治疗组分别予以 20、40、80mg/kg 滇重楼连续灌胃，对 照组及模型组给予相同剂量生理盐水灌 胃；除对照组外，其余组经腹腔注射 LPS 15mg/kg，对照组给予相同剂量生 理盐水腹腔注射；观察大鼠外观、习性 及各项生理反应变化，正常饮食，精心 护理。 122 动物存活率及小肠推进率的 影响 于造模后 24hr 后，统计各组动物 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 存活情况。禁食 6h 后，滇重楼治疗组 分别予以 20、40、80mg/kg 滇重楼连续 灌胃，对照组及模型组给予相同剂量生 理盐水，给药后 30min，各组动物予以 5%炭末悬液（活性炭末+05%羟甲基纤 维素钠）25ml/100g 灌胃，20min 后处 死大鼠，结扎胃幽门部及回盲部，取小 肠直线平铺下测量，以幽门至回盲部为 小肠总长度，以幽门至炭末推进前段为 炭末推进距离，炭末推进率（%）=炭 末推进距离/小肠总长度100%。 123 实验室指标检测 于造模治 疗 24hr 后，4%水合氯醛 1ml/100g 腹腔 注射麻醉大鼠，经腹主动脉取动脉血进 行实验室检测，分别检测各组动物血二 氧化碳分压（PaCO2） 、肌酸激酶（CK） 、 凝血酶原时间（PT） 、谷草转氨酶 （AST）和尿素氮（BUN）观察模型成 立及脏器功能变化情况。 124 小肠病理组织学检测 于 1、7days ，分别取小肠组织用 10%多聚 甲醛溶液固定 324h，经梯度乙醇脱水、 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 二甲苯透明、石蜡包埋、常规切片和苏 木素-伊红染色后，封片镜检观察小肠 组织损害程度。 125 ELISA 法检测 DAO 和 HMGB1 水平 于 1、3、 7、14days ，分 别取血浆制成检测标本，按每孔 100ul 分别加标准品或待测样本，37温育， 依次加生物素标记抗体工作液、辣根过 氧化物酶标记亲和素工作液、底物溶液、 终止溶液，终止反应后酶标仪测量各孔 OD 值，对照标准品进行统计分析。 13 统计学处理 使用 SPSS 200 统计软件进行统计学处理。全部数据均 用均数标准差（xs ）表示， P005 无统 计学意义。各实验组的组间及组内均采 用单因素方差分析（One-Way ANOVA）对资料进行统计处理。率的 比较用完全随机设计资料 2检验， P005 提示两个率之间差异无统计学意 义。 2 结果 21 动物存活率及小肠推进率的 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 影响 模型组大鼠与对照组比较动物存 活率及小肠推进率下降，差异有统计学 意义（P005） ，见表 2。 22 小肠病理组织学检测 对照组 可见黏膜组织结构正常，腺体完整，无 水肿、出血、白细胞浸润。模型组 1d 时可见黏膜明显水肿，腺体部分不完整， 黏膜下及肌层内白细胞浸润增多，7d 时 水肿及白细胞浸润较前明显减轻。不同 浓度滇重楼治疗组，1d 时各组呈现出不 同程度的黏膜水肿及白细胞浸润，与模 型组 1d 时组织结构接近，但中等剂量 组和高剂量组较轻；7d 时各组与对照组 组织结构接近，仅轻度水肿，少量白细 胞浸润。见图 1。 23 滇重楼对 大鼠肠黏膜功能保护作用 1d、3d、7d 时模型组与对照组比较血浆中 DAO 含 量升高，差有统计学意义（P005） 。 见表 3，图 2。 24 滇重楼对大鼠小肠 HMGB1 的表达影响 1d、3d、7d 时模型组与对 照组比较小肠中 HMGB1 蛋白含量升高， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 11 差异有统计学意义（P005） 。见表 4， 图 3。 3 讨论 滇南本草记载重楼“为外科 之至药，主治一切无名肿毒，攻各种疮 毒痈疽，发背痘疔等症最良”。姚勤等8 采 用耳肿法及毛细管通透性法观察不同剂 量重楼醇提物的抗炎作用，结果发现大、 中剂量的重楼醇提物对二甲苯所致的耳 廓肿胀及醋酸所致的毛细血管渗漏有明 显的抑制作用。滇重楼的抗炎特性在体 内外实验均得到证实，因云南独有的气 候孕育了功效奇特的地道药材，具有广 泛的市场开发和临床推广价值，结合前 期实验研究，滇重楼预处理可明显改善 脓毒症大鼠转归及预后。但是，在肠黏 膜功能障碍中滇重楼是否可通过抑制晚 期炎症因子 HMGB1 发挥抗炎保护作用。 本实验发现，模型组与对照组相 比大鼠血中 CK、PT 、AST 、BUN 含量 升高，PaCO2 和小肠推进率下降，差异 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 12 有统计学意义（P005 ） 。