载脂蛋白e基因多态性检测在脑梗死中的意义

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 载脂蛋白 E 基因多态性检测在脑梗 死中的意义 摘要 目的 探讨载脂蛋白 E（ApoE）基因多态性与脑梗死的发生 发展的相关性。 方法 选择 2015 年 1 月2017 年 3 月在佛山市第一人民医院 （以下简称“ 我院” ）神经内科住院的 348 例脑梗死患者作为病例组，选择同 期我院体检科 352 名健康人群作为对照 组，采用基因芯片方法进行 ApoE 基因 型检测，比较两组 ApoE 基因型及表型 的构成差异，及 ApoE 不同表型患者血 脂水平。 结果 病例组和对照组 ApoE 基因型均以 3/3 频率最高，等位基因频 率以 3 最高；病例组 2/3 和 3/3 基因 型均低于对照组，差异有统计学意义 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 （P 中国论文网 /6/view-12954686.htm 关键词 载脂蛋白 E；脑梗死； 基因多态性；血脂 中图分类号 R743.33 文献标识 码 A 文章编号 1673-7210（2017） 12（a）-0110-04 Abstract Objective To investigate the correlation between the gene polymorphism of apolipoprotein E （ApoE ） and the development of cerebral infarction. Methods The case group of 348 patients with cerebral infarction in Neurology Department of the First Peoples Hospital of Foshan （”our hospital” for short） from January 2015 to March 2017， and control group of 352 healthy people at the same time in our hospital were selected. Both groups were used the gene chip approach for the ApoE genotype tested. ApoE genotype and phenotype between the two groups， and the serum lipid levels of patients with -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 different ApoE gene phenotypes were compared. Results The highest genotype frequency of ApoE was 3/3 and the highest allele frequency was 3 in the two groups. The 2/3 and 3/3 genotypes in the case group were significantly lower than the control group， the differences were statistically significant （P 0.05） ，具 有可比性。本研究我院医学伦理委员 会批准，所有研究对象均签署知情同意 书。 1.2 方法 1.2.1 采血处理 病例组研究对象 于入院后未服用任何降脂药物前采血， 对照组在体检时空腹采血。ApoE 基因 分型检测采用 EDTA-K2 抗凝管，分离 血浆用于检测；血清脂蛋白水平检测采 用促凝胶真空采血管，分离血清用于检 测。 1.2.2 血脂检测 血脂检测项目包 括总胆固醇（TC） 、三酰甘油（TG） 、 高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C） 、低密 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和小而密低 密度脂蛋白（sdLDL） ，采用西门子公 司 ADVIA Workcell 自动化系统自动检 验流水线及配套试剂。 1.2.3 ApoE 基因分型检测 采用 PCR 技术扩增特定的基因片段，并与芯 片上特异性核酸探针杂交，通过检测 ApoE 基因 112 和 158 位点的 6 个型别 （2/2、2/3、2/4、3/3、3/4 和 4/4）进行分型。ApoE 基因型检测试剂 盒（基因芯片法）购自珠海赛乐奇生物 科技有限公司，采用 Roche 公司 COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 48 进行检测。DNA 最低检出限为 5.0103 copies/mL， 5.0103 copies/mL 判定为 该位点阳性。 1.3 统计学方法 采用 SPSS 19.0 统计学软件进行 数据分析，等位基因频率用基因频率计 数法计算，Hardy-Weinberg（H-W）平 衡采用拟合优度 2 检验；计量资料数 据用均数标准差（xs ）表示，两组间 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 比较采用 t 检验，多组间比较采用单因 素方差分析，组间两两比较采用 q 检验； 计数资料用率表示，组间比较采用 2 检验。以 P 0.05） 。见表 4。 3 讨论 ApoE 主要在肝脏合成和代谢， 作为结构蛋白参与多种血浆脂蛋白的运 输和代谢，与血浆脂蛋白水平密切相关。 ApoE 基因也被认为与血脂水平密切相 关，其基因多态性是发生动脉粥样硬化 的主要影响因素，在心脑血管疾病的发 生发展中起一定的作用5-6。人类血浆 中 ApoE 主要由 3 种等位基因 2、3、 和 4 编码，根据不同的组合方式形成 6 种基因型，分别为 2/2、2/3 、2/4、3/3 、3/4 和 4/4， 组成 E2、E3 和 E4 3 种不同表型。表型 为 E2，也称为长寿型，对应的基因型 为 2/2、2/3，占人类的 7%；表型为 E3，也即常见野生型，对应的基因型为 2/4、3/3 ，占人类的 78%；表型 E4 为 高危型，对应的基因型为 3/4、4/4， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 占人类的 15%。本研究结果显示：表型 E4 的人群的 LDL-C 水平比表型 E2 的 人群高，提示高 LDL-C 血症可能与 ApoE 表型有关。在不同的人群中， ApoE 等位基因的分布频率不同，因此 决定了表型的频率差异。本研究对佛山 地区脑梗死患者及同期健康体检者的 ApoE 基因型进行统计分析，结果显示， 在两组人群中均以 3/3 基因型频率最高， 等位基因频率也以 3 最高，远远高于 欧美人群，而 4 频率低于欧美人群， 与文献报道一致7-8，提示 ApoE 基因 频率受地域和种族的影响较大。有文献 指出，ApoE 的 4 基因可能是高脂血症 的重要病因学因素9，中国人群 4 频 率较欧美人群低，可能与欧美国家心脑 血管疾病发病率高于中国有关。 ApoE 与脑梗死发生的相关性仍 存在一定的争议。有研究认为 ApoE 基 因的 4 等位基因是脑梗死的遗传标志 10-11，也有研究认为 ApoE 基因型与 脑梗死的发生发展不存在任何相关关系 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 12。本研究显示，从脑梗死患者与健 康对照者 ApoE 基因型频率及等位基因 频率分布情况比较来看，病例组 2/3 和 3/3 基因型显著低于对照组，3/4 则 显著高于对照组，表明 ApoE 基因型在 疾病人群及健康人群中分布确实存在差 异，3/4 基因型与脑梗死的发生存在一 定的相关性。等位基因频率比较结果显 示，病例组 2 等位基因频率显著低于 对照组，而 4 基因频率显著高于对照 组，提示 2 等位基因可能对于脑梗死 具有一定的保护作用，而 4 等位基因 则是脑梗死的遗传隐患因子之一，其机 制可能为 4 等位基因编码的 E4 异构体 能快速转运外源性脂蛋白，降低肝脏 LDL-C 代谢水平，从而导致血浆胆固醇 清除率下降，血脂水平升高，进一步促 进脑梗死的发生。结果显示，病例组 TC、TG、LDL-C 和 sdLDL 均显著升高， 而 HDL-C 显著降低，与对照组比较， 差异有统计学意义（P 0.05） ，提示血 脂水平可能与不同等位基因频率有关。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 脂代谢异常一直被认为是脑梗死发生的 危险因素，而 ApoE 具有调节脂代谢和 维持胆固醇平衡的作用。际上， ApoE 基因多态性可能对心脑血管疾病 的发生具有促进或延缓作用，主要通过 影响血脂代谢的方式。ApoE 是 LDL-C 的受体，也是肝细胞乳糜微粒（CM） 残粒的配体，具有调节 CM 及极低密度 脂蛋白（VLDL ）残粒分解代谢的功能， 同时也参与胆固醇的逆向转运13-15， 因此 ApoE 与血脂代谢尤其是胆固醇代 谢有密切关系。大多研究认为，2 等位 基因具有降低血浆 TC 的作用，而 4 基 因则具有升高 TC 作用，为了明确 ApoE 基因多态性在脑梗死中可能起的 作用，本研究对不同 ApoE 表型人群的 血脂水平进行比较，结果发现，在 E2 型的脑梗死患者中，TC 及 LDL-C 水平 均显著降低，而 E3 型较 E2 型患者升高， E4 型患者则显著升高，差异有统计学 意义（P 0.05） 。与之前大多数研究结 果一致16-18 。脑梗死的发生常与颈内 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 动脉狭窄有关，而颈动脉内膜中层厚度 （CIMT）则是反映颈动脉狭窄程度的 直接指标。研究发现，ApoE 的 E2、E3、E4 基因表型人群 CIMT 依次 增加，与 ApoE 基因多态性所对应的血 脂变化趋势基本一致，提示 ApoE 基因 多态性可能通过影响颈内动脉狭窄程度， 促进或延缓脑梗死的发生19。本研究 结果对不同 ApoE 基因型的脑梗死患者 及对照者血脂水平进行比较，进一步证 实了 ApoE 基因型可通过对血脂的调控 作用，而 4 等位基因所编码的 E4 异构 体可升高血浆中 TC 及 LDL-C 水平，对 脑梗死的发生发展可能具有一定促进作 用。 目前 ApoE 调节血浆脂蛋白代谢 的机制尚未完全明确，一般认为与各个 异构体的受体结合活性以及