高效液相色谱光化学在线衍生技术在11种磺胺药物残留检测中的应用

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 高效液相色谱光化学在线衍生技术 在 11 种磺胺药物残留检测中的应用 摘要：建立了磺胺药物残留的高 效液相色谱光化学在线衍生荧光检测方 法，并应用于猪肉的检测。样品经过乙 腈提取，色谱柱分离后，通过在线光化 学衍生后，用荧光检测器进行直接检测。 优化后的色谱条件：Eclipse Plus C18 柱 （250 mm 4.6 mm， 5.0 m） ，流动相 为均含 0.2%甲酸的乙腈、甲醇和水梯 度洗脱，检测激发波长为 248 nm，发射 波长为 350 和 412 nm。各种磺胺在各 自浓度范围内线性相关系数 R20.999， 回收率在 85.7%101.1%之间，RSD 为 1.9%6.6%（n=6） ，各磺胺的检出 限（S/N=3 ）为 0.23.0 g/kg，定量限 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 （S/N=10）为 0.510.0 g/kg。 中国论文网 /8/view-12767090.htm 关键词：光化学在线衍生；高效 液相色谱荧光检测法；磺胺 1 引言 磺胺（Sulfonamides， SAs）是 一类广谱抗菌药物，广泛应用于水产养 殖业和畜牧业，是预防和治疗细菌感染 性疾病的化学药物。磺胺类药物还用于 马、牛的传染性脑膜炎，羊下痢、猪下 痢和弓形体病，并且对于禽类球虫病具 有较好疗效1。由于养殖业中磺胺类药 物的使用导致了动物源性食物中残留， 从而危害人体健康2，3 。我国和欧盟 均规定了磺胺在动物组织中的最高残留 限量4 ，5 。动物组织中磺胺的检测方 法主要有液相色谱串联质谱法68， 液相色谱紫外检测法911，液相色谱 荧光检测法12，13 。磺胺类药物自身 不具有荧光活性，采用荧光检测法时通 常需要进行柱前或柱后化学试剂衍生才 能进行检测。研究发现，磺酰胺基是光 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 化学活性基团，在紫外光照射下会发生 光化学反应，产物具有荧光性质，通过 荧光光度法可以对其进行检测1417。 最近研制出一种光化学在线衍生器，应 用于高效液相色谱后，可以进行在线光 化学衍生使分子产生荧光活性，利用荧 光检测器可以有效地检测18，19。相 比于柱前或柱后化学试剂衍生法，光化 学衍生不需要额外的衍生化试剂，也不 需要柱后衍生反应的试剂泵，减少了人 工操作，同时也避免衍生化过程中人为 操作因素带来的误差。光化学衍生不引 入其他杂质，减少了人体与有毒试剂的 接触和曝露，更加绿色、环保、简便、 快捷。到目前为止，关于光化学柱后衍 生高效液相色谱荧光法在磺胺类药物检 测上的应用尚未见报道。本实验系统研 究了光化学衍生的实验条件，建立了简 便，可靠，灵敏度高的动物组织中磺胺 药物残留的检测方法。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 Agilent1260 高效液相色谱仪配荧 光检测器（美国 Agilent 公司） ；光化学 衍生器（由紫外灯（11 W） 、聚四氟乙 烯反应管（25 m0.25 mm）组成，北京 华安麦科公司） ；高速匀浆机（德国 IKA 公司） ；高速离心机（美国 Thermo 公司产品） ；旋转蒸发仪（德国 IKA 公 司） ；氮气吹干仪（天津市恒奥科技有 限公司） ；涡旋混合器（太仓市华利达 实验设备有限公司） 。 甲醇、乙腈（色谱级， 德国 Merck 公司） ；甲酸、正己烷（色谱级， 美国 TEDIA 公司） ；实验用水为 MilliQ 超纯水。 标准物质：磺胺嘧啶（纯度99.5%） ， 磺胺噻唑（纯度99.5%） ，磺胺甲基嘧 啶（纯度99.2%） ，磺胺吡啶（纯度 99.0%） ，磺胺二甲基嘧啶（纯度99.0%） ， 磺胺对甲氧嘧啶（纯度98.0%） ，磺胺 氯哒嗪（纯度99.0%） ，磺胺甲氧哒嗪 （纯度99.2%） ，磺胺二甲异f 唑（纯 度98.0%） ，磺胺苯甲酰（纯度99.0%） ， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 磺胺喹f 啉（纯度98.0%） 。标准物质 均购于德国 Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司。 3.2 高效液相色谱条件的优化 参考磺胺检测的相关文献911， 使用甲醇、乙腈、乙酸溶液三相作为流 动相，对比了甲醇、乙腈为有机相与含 不同浓度的乙酸溶液组成的流动相对磺 胺药物分离的影响。实验发现，不含酸 的流动相，磺胺的药物的色谱峰形出现 拖尾，部分组分重叠。加入乙酸后，色 谱峰形对称，分离效果好。考察了不同 浓度乙酸对色谱峰形的影响，发现 0.2% 乙酸既能保证较好的分离效果，同时也 不影响色谱柱的使用寿命。由于乙腈的 洗脱能力较强，磺胺药物在色谱柱上的 保留时间短，部分磺胺分离度较差，甲 醇的洗脱能力较弱，分离度好，但是磺 胺药物的保留时间较长，且峰型较扁平。 采用合适的甲醇、乙腈、乙酸可得到较 好的分离度和较快的分离效率。优化后 的色谱分离条件见 2.2 节，11 种磺胺的 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 标准色谱图见图 1。 3.3 前处理方法的建立 比较了甲醇、乙腈、乙酸乙酯的 提取效果。甲醇的提取效率较低，也不 易沉淀蛋白。乙酸乙酯提取有利于下一 步的处理，但是提取物的脂肪含量较高， 除脂过程很容易损失目标物。乙腈的提 取效率较高，而且提取液的脂肪含量较 少，处理也相对方便。乙腈提取液带入 的少量脂肪可以用正己烷去除，尽量减 少基质的干扰，图 2 为净化后空白样品 和加标样品的色谱图。 3.5 回收率和精密度 对阴性猪肉样品进行回收率实验， 添加水平分别为定量限的 3 倍和 5 倍， 采用优化后的前处理方法对样品进行处 理，每个添加水平重复 6 次，各磺胺的 平均回收率在 85.7%101.1%之间， RSD 为 1.9%6.6%，详见表 2。 3.6 实际样品测定 利用本方法测定了购于农贸市场 的 10 个猪肉样品中的磺胺类药物残留 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 量。在 10 个样品中，仅有 1 例样品检 出磺胺二甲嘧啶，测得量为 24.5 g/kg （n=3） 。结果表明，本方法相比于常规 化学试剂衍生检测法具有绿色、环保、 灵敏度高、稳定性好的优点，适用于肌 肉组织中磺胺药物残留的检测。 References 1BotsoglouN A， Fletouris D J. Drug Residues in Foods： Pharmacology， Food Safety and Analysis， Marcel Dekker， New York， 2001： 27-35 2Sigel C W， Woolley J L， Nichol C A. J. Pharm. Sci.， 1975， 64（6）： 973- 976 3UnruhJ， Piotrowski E， Schwartz D P， Barford R. J. Chromatogr.， 1990， 519（1）： 179-187 4Ministry of Agriculture of the Peoples Republic of China， 235th Bulletin， 2002 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 5Council Regulation （EEC） no. 2377/90 of 26 June 1990， Off. J. Eur. Commun. L224 （1990）14 6Lopes R P， Augusti D V， Souza L F， Santos F A， Lima J A， Vargas E A， Augusti R. Anal. Methods， 2011， 3： 606-613 7PANG GuoFang， CAO YanZhong， ZHANG JinJie， JIA GuangQun， FAN ChunLin， LI XueMin， LIU YongMing， SHI YuQiu. Chinese J. Anal. Chem.， 2009， 37（8）： 1102-1106 8ZHANG HaiQi， SONG LiLi， XU XiaoLin， HE ZhongYang， ZHANG ChenHui， HOU JingDe. Chinese J. Anal. Chem.， 2007， 35（2）： 268-272 9WANG ChongYang， WANG YuanPeng， WANG Ning， JIANG ChunZhu， YU Xi， SONG DaQian， SUN Ying. Chinese J. Anal. Chem.， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 2013， 41（1）： 83-87 10Sun H W， Ai L F， Wang F C. Chromatographia， 2007， 66： 333-337 11FANG BingHu， HE QiXia， Zou WeiLi， CHEN JianXin，DENG GuoDong， XIAO TianAn， WU QiuHao， LIN HaiDan. Journal of Instrumental Analysis， 2007， 26（4）： 519-522 12Wang L L， Wu J， Wang Q， He C H， Zhou L， Wang J， Pu Q S. J. Agric. Food Chem.， 2012， 60（7）： 1613-1618 13Zotou A， Vasiliadou C. J. Sep. Sci.， 2010， 33（1）： 11-22 14XUN LiPing， XU JinGou. Chinese J. Anal. Chem.， 1992， 20（5）： 499-503 15Snchez Pea M， Muoz de la Pea A， Salinas F， Mahedero M C， Aaron J J. Analyst， 1994， 119： -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 1177-1181 16LI ManXiu， ZHANG HongLi. Chinese Journal of Analysis Laboratory， 2010， 29（5）： 79-81 17Flores J L， Fernndez de Crdova M L， Daz A M. Anal. Chim. Acta， 2007， 600（12）： 164-17