嗜碱性点彩红细胞

嗜碱性点彩红细胞 瑞氏染色后，胞质内出现形态不一的蓝色颗粒（RNA） ，属于未完全成熟红细胞，颗粒大小 不一、多少不等，原因为重金属损伤细胞膜，使嗜碱性物质凝集，或嗜碱性物质变性，或 血红蛋白合成中阻断原卟啉与铁结合。见于铅中毒。正常人血涂片中很少见到嗜碱性点彩 红细胞（约占 1/10000） 。其他各类贫血见到点彩红细胞表明骨髓造血旺盛或有紊乱现象。 脱落细胞学检测 染色是利用细胞中各种结构的生化组成不同，对染料的亲和力不同，而显示不同的颜色， 使细胞的形态和结构易于辨认。常用的染色有 HE、巴氏及瑞姬氏染色，其特点如下。 1.HE 染色：此法染色效果也好，只是胞质色彩不丰富，不能用于观察阴道涂片对雌激素水 平测定。优点是操作简易，试剂易配制。 2.巴氏染色：此法染色特点是细胞具有多色性，色彩丰富鲜艳，胞内结构清晰，染色效果 好，是细胞病理学检查常用的方法，尤其是观察女性雌激素水平对阴道上皮细胞的影响。 此法的缺点是操作程序复杂。 3.瑞一姬氏染色：此法适用于血片、淋巴穿刺液和胸腹水涂片。 血氨测定 血氨测定：有两类血氨测定方法。 一类为两步法，先从全血中分离出氨，再进行测定，如扩散法（已淘汰）和离子交换树脂 法；另一类为一步法，不需从全血中分离出氨直接测定，如酶法和离子选择电极法。 （1）直接显色测定法：在床旁取静脉血 2ml，以钨酸沉淀蛋白后，用酚-次氯酸盐显 色，参照标准计算氨含量。如严格掌握实验条件，本法分析结果能满足临床要求。 （2）谷氨酸脱氢酶速率法：血浆中的氨在足量的 -酮戊二酸和 NADPH 存在时，经谷氨酸 脱氢酶作用生成谷氨酸，并消耗 NADPH，NADPH 的下降速率与血浆氨浓度成正比。 （3）离子交换法：去蛋白血浆标本中的氨先被阳离子交换树脂吸附，再被分离出来，用酚 次氯酸盐显色反应求出氨含量。本法特异性好，精密度和准确度均较高，已被作为血 氨测定的参考方法。 （4）氨电极法：氨气敏电极选择性较高，故这类方法特异性好、准确度较高，但是耐用性 差，而且电极稳定性受温度、渗透压、中介液等多种因素影响。 结核分枝杆菌培养特点 培养特点为专性需氧、营养要求高、生长缓慢，常用罗氏固体培养基，在固体培养基上培 养 24 周后，形成菜花样 R 型菌落，液体培养基上呈表面生长，形成菌膜。 总蛋白定量测定 1、原理 磺基水杨酸为生物碱试剂，能沉淀蛋白质，但对白蛋白的沉淀能力比球蛋白强，加适量硫 酸钠后，沉淀白、球蛋白的能力趋于一致，与标准蛋白浊度对比进行定量测定。 2、试剂 磺基水杨酸硫酸钠试剂（SSS） 磺基水杨酸 3.0g 无水硫酸钠 7.0g 蒸馏水加至 100ml 过滤后，储存于棕色瓶中，如显色或混浊则不能用。 3、方法 （1）制备标准曲线含蛋白 200、400、800、1200、1600mg/L 的稀释混合人血清标准系列各 0.5ml，加 SSS 试剂 4.5ml，充分混匀，715 分钟后，用 420nm 波长比浊，以吸光度为 纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。 （2）样品检测取待测脑脊液标本各 0.5ml 于两只试管中，其中一只试 管加 SSS 试剂 4.5ml，另一试管加 154mmol/L 的 NaCl 溶液 4.5ml 作为标本空白管。在与 标准曲线相同的条件下比浊，所得得吸光度可从标准曲线上求得蛋白质浓度。 4、注意事项 （1）脑脊液如有多量细胞或混浊，应先离心以除去。如蛋白质浓度过高，应先行用生理盐 水稀释后重新测定。 （2）加入 SSS 试剂的操作手法和速度、室温及比浊前的放置时间都会影响实验结果。故 操作时应注意控制加入试剂的方式和比浊时间与标准管一致。应随气温改变，勤作标准曲 线。 5、正常参考值 腰穿 CSF 蛋白含量：0.20.4g/L 池穿 CSF 蛋白含量：0.10.25g/L 侧脑室穿刺 CSF 蛋白含量：0.050.15g/L 脑脊液蛋白质含量与年龄成正比，儿童含量较低，成人稍高，老年人又比成年人高。 6、临床意义 脑脊液蛋白质含量增高，为血脑屏障被破坏的标志。颇受临床工作者的重视。 蛋白质含量增高常见于下列情况： （1）中枢神经系统炎症。脑部感染时，脑膜和脉络丛毛细血管通透性增加，蛋白质分子容 易透过，首先是白蛋白增高，随后是球蛋白和纤维蛋白增高。 （2）神经根病变。如急性感染性多发性神经炎（GuillainBarre 综合征） ，多数病例有 蛋白质增高，而细胞数正常或接近正常，即蛋白细胞分离现象。 （3）椎管内梗阻。脑与蛛网膜下腔互不相通，血浆蛋白由脊髓中的静脉渗出，CSF 蛋白质 含量显著增高，有时高达 3050g/L，这时 CSF 变黄，可自行凝固。如脊髓肿瘤、转移癌、 粘连性蛛网膜炎等。此外，早产儿 CSF 蛋白含量可达 2g/L，新生儿为 0.81.0g/L，出生 两个月后逐渐降至正常水平。 含血的 CSF 蛋白质含量增高。为了鉴别原来有无蛋白质增高，可用每升红细胞 700106 个 约相当增加蛋白质量 0.01g/L 来推算，用含血 CSF 的蛋白质含量减去含红细胞数折算成的 蛋白质含量，即为原来 CSF 的蛋白质含量。 珠蛋白肽链分析 珠蛋白肽链分析原理：尿素或对氯汞苯甲酸能破坏血红蛋白的空间结构，血红蛋白的珠蛋 白可被裂解成肽链亚单位，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出各肽链区带。 参考值：珠蛋白肽链（HbA）裂解后有四条带，可泳出四条带，分别为 、HbA、HbA2、 带。 临床意义： 若有异常血红蛋白，则出现异常 Hb 和异常肽链。 肽链合成速率检测对地中海贫血诊断有参考价值。 聚合酶链反应（PCR）扩增结合等位特异寡核苷酸（ASO）探针杂交诊断法（PCR-AS0 法） 是目前采用的最常用的诊断 -珠蛋白生成障碍性贫血或 -珠蛋白生成障碍性贫血的方法。 蛋白质定性检查 1、潘氏球蛋白定性试验原理 脑脊液中蛋白质主要是球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色混浊或 沉淀。 2、试剂 5%苯酚溶液：取纯苯酚 25ml，加蒸馏水至 500ml，用力振摇，放置 37温箱内 12 天， 待完全溶解后，置棕色瓶内保存。 饱和苯溶液：取苯酚 10ml，加蒸馏水至 100ml，充分混匀，置入 37温箱中数小时，见底 层有酚析出，上层即为饱和酚溶液。避光保存，一般置棕色瓶内保存。 3、操作 取试剂 23ml，置于小试管中，用毛细滴管滴入脑脊液 12 滴，在黑色背景下立即观察 结果。 4、结果判断 阴性（）：无混浊，清晰透明，不显雾状。 极弱阳性（）：微呈白雾状，对光不易看到，在黑色背景下才能看到。 弱阳性（+）：呈灰白色白雾状。 阳性（+）：呈白色薄云雾状混浊。 强阳性（+）：呈白色絮状沉淀或白色浓云块状。 最强阳性（+）：立即形成白色凝块。 5、方法学评价 潘氏（Pandy）试验所需标本量少，操作简单，结果观察较为明确，临床试验室常用此法。 但该方法过于敏感，有一部分正常人也可出现极弱阳性（）结果。 6、注意事项 （1）红细胞过多时，须先离心使细胞沉淀，吸取上清液进行试验。 （2）试验中所用试管应十分洁净，否则易出现假阳性结果。 （3）所用试剂苯酚如不纯，亦可引起假阳性反应；室温低于 10，酚饱和度低，亦可引 起假阳性结果。 7、正常参考值 正常脑脊液中蛋白质含量仅是血浆蛋白的 1/200，即 0.20.4g/L，其成分以白蛋白为主， 医学教|育网|收集整理故蛋白定性试验结果为阴性或极弱阳性（） 。 8、临床意义 有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应，如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经 系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入 脑脊液中，亦可呈阳性反应。 HIV-抗体确认实验 免疫印迹试验（WB） 、条带免疫试验（LIATEKHIV） 、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧 光试验（IFA） 。国内常用的确认试验方法是 WB. 免疫印迹试验（WB） 、条带免疫试验（LIATEKHIV） 、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧 光试验（IFA） 。国内常用的确认试验方法是 WB. （一）免疫印迹实验（WB） 免疫印迹实验是广泛用于许多传染病诊断的实验方法，就 HIV 的病原学诊断而言，它 是首选的用以确认 HIV 抗体的确认实验方法，WB 的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法 优劣的“金标准” 。 确认试验流程： 有 HIV-1/2 混合型和单一的 HIV-1 或 HIV-2 型。先用 HIV-1/2 混合型试剂进行检测， 如果呈阴性反应，则报告 HIV 抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告 HIV-1 抗体阳性；如果 不满足阳性标准，则判为 HIV 抗体检测结果不确定。如果出现 HIV-2 型的特异性指示条带， 需用 HIV-2 型免疫印迹试剂再做 HIV-2 的抗体确认试验，呈阴性反应，报告 HIV-2 抗体阴 性；呈阳性反应则报告 HIV-2 抗体血清学阳性，并将样品送国家参比实验室进行核酸序列 分析， WB 的敏感性一般不低于初筛实验，但它的特异性很高，这主要是基于 HIV 不同抗 原组分的分离以及浓缩和纯化，能够检测针对不同抗原成分的抗体，因而能够用 WB 方法鉴 别初筛实验