EB病毒PCR定量检测ppt课件

1 EB病毒 PCR定量检测 2 内容 一、 EB病毒 二、 EB病毒相关疾病 三、 EB病毒与鼻咽癌 四、血浆 EB病毒 DNA水平与肿瘤负荷 五、上市产品情况 六、问题与方案 七、项目计划 3 一、 EB病毒 n 1964年 Epstein、 Barr在 Burkitt淋巴瘤细胞系发现 的第一个人类肿瘤病毒，又名人类疱疹病毒 4型（ HHV-4） ，是双连 DNA病毒。 n 世界上 90%以上的成人都曾感染过 EBV，大多终 身在体内以无症状、潜伏感染形势存在 n 二十世纪末被国际抗癌联盟列为 类致癌物 4 二、 EB病毒相关疾病 肿瘤性疾病 n Burkitts lymphoma 伯基特淋巴瘤 （地方性， 100%） n Hodgkins lymphoma 霍奇金淋巴瘤（ 40%） n Nasopharyngeal carcinoma鼻咽癌（地方性， 100%） n Gastric carcinoma胃癌（ 10%） 非肿瘤性疾病 n Infectious mononucleosis传染性单核细胞增多 症（ 100%） 5 三、 EB病毒与鼻咽癌 n 鼻咽癌（ NPC）属于地方性肿瘤，约 80%的患者 分布于中国华南地区及东南亚地区，发病率约为 20-30/100 000人 ,广东省的发病率最高 ,又称 “广东 瘤 ” n 鼻咽癌病因 n 1、遗传 n 2、 EB病毒 n 3、环境 6 N Engl J Med. 2004 Jun 10;350(24):2461-70. 四、血浆 EB病毒 DNA水平与肿瘤负荷 -分期 7 Cancer Res. 2000 May 1;60(9):2351-5. 四、血浆 EB病毒 DNA水平与肿瘤负荷 -放疗过程中监控 8 四、血浆 EB病毒 DNA水平与肿瘤负荷 -术后监控 Clin Cancer Res. 2003 Aug 15;9(9):3254-9. 9 复发监控 N Engl J Med. 2004 Jun 10;350(24):2461-70. 四、血浆 EB病毒 DNA水平与肿瘤负荷 -复发监控 10 OS vs Plasma EBV DNA Head Neck. 2012 Aug;34(8):1064-70 11 五、上市产品情况 公司公司 类型类型 灵敏度灵敏度 线性范围线性范围 样品类型样品类型 样本用量样本用量 之江生物之江生物 定性定性 全血全血 艾康生物艾康生物 定量定量 全血全血 普瑞康生物普瑞康生物 定量定量 100IU/ml 血清或血浆血清或血浆 圣湘生物圣湘生物 定量定量 400拷贝拷贝 /毫升毫升 4.0 1024.010 9 全血、血浆和咽全血、血浆和咽拭子拭子 血浆血浆 100ul,全血全血 200ul,咽拭子咽拭子 500ul 达安基因达安基因 定量定量 500拷贝拷贝 /毫升毫升 血血 鑫诺美迪基鑫诺美迪基 因因 定量定量 血清或血浆血清或血浆 12 六、问题与方案 n 问题： 灵敏度 n 解决方案： n 1、设计靶基因检测片段小于 100bp n 2、公司已有的血浆抽提方法 n 3、甘油保存校准品 13 七、计划 项目内容项目内容 项目指标项目指标 预期完成时间预期完成时间 查阅文献，查阅文献， EBV靶序列的选择靶序列的选择 EBV保守区域序列人工合成保守区域序列人工合成 9月月 30 引物及探针设计引物及探针设计 检测用引物、检测用引物、 MGB探针设计合成探针设计合成 9月月 30 构建校准品质粒克隆构建校准品质粒克隆 测序验证成功构建克隆菌测序验证成功构建克隆菌 10月月 17 质粒抽提质粒抽提 质粒抽提、线性化质粒抽提、线性化 10月月 24 制备校准品制备校准品 制备制备 EBV校准品及内参校准品校准品及内参校准品 10月月 31 引物及探针筛选引