玻璃酸钠微生物限度检查的探讨

玻璃酸钠微生物限度检查的探讨 江腊梅 吴鹰 郭风仙 玻璃酸钠（sodium hyaluronate，NaHA ）在临床应用的研究正在深入开展 1。 同时，NaHA 作为化妆品的一种重要成分，应用日渐广泛。本品具有酸性黏多糖 的共有特性，为白色无定形固体，无臭无味，具强吸湿性。NaHA 疏松的、溶胀 的分子使它在水溶液中占据较大的空间，能够结合大量的水 2，使溶液具有高黏 度。这使得其在微生物限度检查中带来一些困难。 1 存在的问题 1.1 按中国药典2000 年版二部附录收载的方法检查，规定供试品的检验量， 对贵重的或微量包装的药品可酌减。即取 NaHA 3g，加于生理盐水 100ml 中， 同时加入一定量的玻璃酸酶（hyaluronidase）进行处理。但经处理后的供试品溶 液还是相当黏稠，将此溶液加于平皿中，往往与培养基不能混匀，呈现供试品 在下层，培养基在上层的现象。按常规方法处理需要 68h 方能混匀 3。 1.2 在细菌计数时，常出现蔓延的片状菌落生长。其主要原因是当培养基内部的 相对水分高时，平板表面水分过多，给细菌提供游动的条件，使形成蔓延菌落 的机会增多。 2 解决的办法 为了解决上述问题，我们采取了以下方法，可得到理想的供试液，并便于 细菌计数。 2.1 取 NaHA 3g，加于生理盐水 140ml 中，同时加入玻璃酸酶 4500 单位，置 40振荡器中 1.01.5h，供试品即可呈溶液状态 3，取该溶液 10ml 加于 4550 的细菌和霉菌培养基各 90ml 中，充分摇匀，各分别注入 6 个平皿中。待冷凝后， 将上述平板倒置于 3035、2528 培养箱中，分别培养 48 和 72h（2h） 。 取 6 个平皿生长的细菌和霉菌总数，除以 2，乘以 10，即为每 1g 供试品所 存在的菌数。 关于培养基的配制，原规定细菌培养基为取营养琼脂 34g，加水至 1000ml，现改为取 34g 加水 900ml，或在每 1000ml 培养基中多加琼脂 2g。 2.2 在细菌计数时，如出现片状菌落，可采取以下措施。 2.2.1 在每 1000ml 营养琼脂培养基中，用前加入 1%TTC（2，3，5 一氯化三苯 四氮唑）1ml，混匀，使其最终浓度为 0.001%。TTC 具有抑制细菌作用，可使 细菌氧化而其还原显红色。所以，在添加 TTC 的培养基中多数菌落呈红色，并 可减少菌落蔓延的现象，便于计数 4。 2.2.2 细菌培养时间为 48h，可在每 1014h 之间查看，随时用玻璃笔在平皿底部 点出细菌数，直至 48h，如有片状菌覆盖，按点计数计算。 2.2.3 在培养基中适当增加琼脂量，如每 1000ml 培养基中多加琼脂 2g，可使培 养基硬度略有增加，而其中水分不会过大。这样则不利于细菌蔓延。 2.2.4 在供试品稀释过程中，应使充分混匀。否则可形成连续性的菌落，呈现蔓 延状态。 2.2.5 如果平板上有片状菌落或花斑样菌落蔓延生长，该平板不应作为计数的依 据 4，更不应将其蔓延的菌落认为“不可计” ，而将细菌计数落到 10-2 平皿上。 2.2.6 在整个操作过程中，注意无菌操作。无菌室的无菌程度应经常检测。常用 的检测方法为：取普通肉汤琼脂平板和玫瑰红钠琼脂培养基各 3 个，置无菌室 内各工作位置上，开盖暴露 30min，分别在 3035培养 48h，2528培养 3d 后计算菌落数。细菌和霉菌总数分别不超过 10 个为宜，否则不能使用。 参考文献 1 凌沛学，贺艳丽，郭学平，等透明质酸.北京：中国轻工业出版社，2000, 248254，123125 2 王凤山，凌沛学，张天民，等生化药物研究北京：人民卫生出版社， 1997，266272 3 季永成，江腊梅中国药学杂志，1992，27（11）：665 4