烟草组织培养综合实验

烟草组织培养实验论文烟草组织培养实验论文 Experimental study on tissue culture of tobacco 报告题目报告题目烟草组织培养烟草组织培养 作者姓名作者姓名肖贝肖贝 班级学号班级学号1203 班班 2012114010304 指导教师指导教师王友如王友如 完成时间完成时间2015.9.20 生物学实验教学 2 烟草组织培养的研究 肖贝（指导老师：王友如） （湖北师范学院生命科学学院 生物 1203 班 湖北 黄石 435002） 摘 要：烟草组织培养作为植物组织培养的常用植物，该实验通过对消毒的烟草种子 先进性初代培养，接着取其外植体进行继代培养的研究，来改进现有的组织 培养技术，为组织培养的应用打下好的基础。 关键词：烟草，组织培养，继代培养 综合实验： 烟草组织培养 目目 录录 引言引言.1 1 材料与方法材料与方法.1 1.1 材料.1 1.1.1 实验材料 .1 1.1.2 仪器设备 .1 1.1.3 试剂及溶液 .2 1.2 方法.3 1.2.1 烟草无菌苗的培养 .3 1.2.2 反分化培养 .3 1.2.3 继代培养 .4 1.2.4 生根培养 .4 1.2.5 组培苗的移栽驯化 .4 2 结果与分析结果与分析.4 2.1 烟草无菌苗的培养.4 2.2 反分化培养.4 2.3 继代培养.5 2.4 生根培养.5 3 讨论讨论.5 参考文献参考文献.5 致谢致谢.6 湖北师范学院 2011 届生命科学学院本科毕业论文 1 烟草组织培养的研究 肖贝（指导老师：王友如） （湖北师范学院生命科学学院 湖北 黄石 435002） 引言 组织培养是最基础的生物技术，它不仅是一种植物快速繁殖的手段,同 时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。它的全面应用已 使农业的生产走向集约化和工业化1。烟草是植物组织培养的常用植物，有 关烟草组织和细胞培养已有不少报道近年来在抗性研究、基因转化和次生 物质生产等方面也取得一些进展。 植物组织培养也就是所谓的植物克隆，简单的说就是提取植物的根茎 叶芽或一个细胞，通过生物技术手段，在很短的时间内诱导分化出与母体 完全相同的植物。植物的组织培养是一种无性繁殖，具有用材经济，生产 周期短，繁殖系统大，培育无病毒苗，可获得新的突变体，降低成本提高 工作效率的特点，还能保持亲本的优良性状，它是植物基因工程的重要组 成部分，是植物基因工程研究的一项重要技术手段2。 1 1 材料与方法材料与方法 1.11.1 材料材料 1.1.11.1.1 实验材料实验材料 烟草种子 1.1.21.1.2 仪器设备仪器设备 一、常用仪器 1.蒸馏水器 2 2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅 3.分析天平 （AB204-N 型，梅特勒-托利多仪器上海有限公司） 4.超净工作台 5.电热干燥箱烘箱 （WMK-02 型，武汉电控仪器厂） 6.恒温光照培养箱 7.电冰箱 8.显微镜和解剖镜 9.旋转培养机 10. 离心机 11. 酸度测定仪： 精密 PH47 试纸； 笔型袖珍酸度计。 二、必要的器皿 （一） 玻璃器皿 1. 培养器皿 试管 三角烧瓶（锥形瓶） 培养皿 2. 盛装器皿 试剂瓶 烧杯 3. 计量器皿 量筒 容量瓶 吸管 4. 其它器皿 滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。 （二）金属器械 1.镊子 2.解剖刀 3.剪刀类 4.接种针 1.1.31.1.3 试剂及溶液试剂及溶液 一、试剂 湖北师范学院 2011 届生命科学学院本科毕业论文 3 （一）用 95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。 （二）洗涤剂 1. 2HCl 酒精:95%酒精 100ml 加入 2mlHCl 2. 硫酸重铬酸钾洗液 称取 10g 重铬酸钾加入蒸馏水 90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入 浓硫酸 175ml，放入棕色玻璃瓶备用， （注意：切记不可将盛过洒精， 甲醛等还原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重铬酸钾是一种强 的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，失去洗涤作用） 。这些器皿必 须用自来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。 （三）1 摩尔浓度(mg/L )NaOH 和 1 摩尔浓度（mg/L）HCl 二、培养基 1. MS 培养基母液配制（单位：毫克 mg） 2. 分化培养基（BA 培养基） 3. 生根培养基 (简称 NAA 培养基) MS0+6-BA(1mg/ml)+NAA(0.1mg/ml)+3%蔗糖+0.6%琼脂(PH5.86.0) 1.21.2 方法方法 1.2.11.2.1 烟草无菌苗的培养烟草无菌苗的培养 烟草种子用 70%酒精浸泡 60s，然后用 1-5%次氯酸钠表面消毒 15- 20min（晃荡)，无菌水洗 3 遍后接种在大量元素减半的 MS 基本培养基上。 1.2.21.2.2 反分化培养反分化培养 烟草培养 23 个月后，从无菌苗上取叶片，然后用锋利的手术刀片将 叶片切成 0.5 cm 见方的小块，置于反分化培养基（BA 培养基）中。 4 1.2.31.2.3 继代培养继代培养 每隔 14 天左右将烟草叶片置于继代培养基(BA 培养基)中继续培养。观 察愈伤组织生长情况。 1.2.41.2.4 生根培养生根培养 待愈伤组织生长烟草长出茎、叶后，将茎叶部分切下，置于生根培养 基中(NAA 培养基)，直至其长出根部。 1.2.51.2.5 组培苗的移栽驯化组培苗的移栽驯化 将生根的烟草组培苗从培养室取出，放在自然条件下 12 天，然后打 开瓶口，再放置 12 天后移栽至室外。 2 2 结果与分析结果与分析 2.12.1 烟草无菌苗的培养烟草无菌苗的培养 经过二个月的培养，烟草种子长成一颗烟草，烟草没有被污染且长势 很好。说明用烟草种子培育烟草无菌苗成功。 2.22.2 反分化培养反分化培养 将叶片切段接种到培养基中培养，5 天后外植体开始膨胀，再继续培养 5 天，切块膨胀成圆拱型，继续培养，切片周围开始有浅绿色半透明的愈伤 组织形成。 图 1 愈 伤组织 湖北师范学院 2011 届生命科学学院本科毕业论文 5 2.32.3 继代培养继代培养 愈伤组织经继代培养后，慢慢分化出茎、叶。 图 2 愈伤组织的生长 2.42.4 生根培养生根培养 由于培养基配制错误，烟草叶片的生根培养失败，实验失败。 3 3 讨论讨论 本次实验由于操作不当，生根培养基配制错误，导致实验失败。但是， 组员已理解实验原理，并在实验过程中，了解了实验室的纪律，掌握了基 本的实验操作方法，有不小的收获。 参考文献参考文献 1 康实. 烟草组织培养的研究进展及运用前景. 楚雄师范学