盐酸氟西汀分散片和胶囊的生物等效性研究 译文

盐酸氟西汀分散片和胶囊的生物等效性研究 邵庆翔 1 ,李 川 2 ,张美云 1 ,季周华 3 刘 平 韦 阳 4，徐方 健 彬 ( 1 浙江省医 学科学院 ,杭州 310013 ; 2 中国科学院上海药物研究所 ,上海 200031 ; 3 礼来 ( 亚洲) 公 司 ,上海 200001) 摘要摘要 目的 : 研究盐酸氟西汀分散片和胶囊的生物等效性 。方法 :22 例健康男性 志愿者 , 随机分成 2 个序 列 。交叉单剂量口服 20mg 盐酸氟西汀分散片或胶囊 ,定时 取血样 ,以液相 2 质谱联用法测定血浆样本中氟西汀及 其代谢产物去甲氟西汀的浓度 ,并 对 2 种制剂进行生物等效性评价 。结果 : 口服盐酸氟西汀分散片或胶囊后 ,氟西 汀的 Cmax 分别为 ( 16. 96 40) 和 ( 17. 02 73) ng? - 1 ; T max 分别为 ( 6. 8 7 ) 和 ( 6. 1 2 ) h ;AUC0 分别 5. 4. mL 1. 1. 为 ( 971. 08 541. 48) 和 ( 1 018. 72 583. 46) ng? ? - 1 ; t 1/ 2 分别为 ( 59. 6 9 ) 和 ( 61. 3 0 ) h 。口服 2 种制剂 h L 18. 20. 后去甲氟西汀的 Cmax 分别为 ( 20. 05 33) 和 ( 19. 55 10) ng? - 1 ; T max 分别为 ( 74. 6 1) 和 ( 80. 0 4) 10. 8. mL 53. 56. h ;AUC0 分别 ( 6 171. 86 320. 18) 和 ( 6 312. 87 3 025. 06 ) ng ? ? - 1 ; t 1/ 2 分别为 ( 155. 6 40. 7 ) 和 ( 165. 7 3 h L 65. 7) h 。结论 :20mg 盐酸氟西汀分 散片和 20mg 盐酸氟西汀胶囊为生物等效 。 关键词关键词 盐酸氟西汀 ; 分散片 ; 胶囊 ; 液相 2 质谱联用 ; 生物等效性 中图分类号中图分类号 R971. 43 文献标识码文献标识码 A 文章编号文章编号 1003 - 3734 ( 2003) 04 - 0277 - 盐酸氟西汀 , 即 ( 2 N 2 甲基 232 苯基 232 ( 2 ,2 , 22 三氟 2P2 甲苯基) 2 氧代 丙 胺盐酸盐 ,为选择性 52 羟 色胺再摄取抑制剂 ( SSR I) ,通过提高突触间隙中 52 羟色胺的 浓度达到振奋情绪 、 改善抑郁的作用 1 , 是全球使用最广泛的抗抑郁药 。本品没有三 环类抗 抑郁剂常见的抗胆碱 、 心血管 、 镇静和体重增加等不良反应 ,健康人对其能良 好耐受 。口服后本品通过 肝脏细胞色素 P450 ( C YP) 2C 和 2D6 同工酶的首过效应 ,转 化为去甲氟西汀 ,后者是氟西汀的主要活性 代谢产物 , 具有与母体相似的药理学作用。本 研究采用标准双交叉方法 , 评价单次口服 20mg 盐 酸氟西汀分散片和胶囊后母体化合物 氟西汀及其活 性代谢产物去甲氟西汀的生物等效性 。 1.材料与方法 .药品与试剂 盐酸氟西汀分散片 (礼来公司 ,规格 : 每片 20mg , 批号 :5333) 盐酸氟西汀胶囊 ( 礼来苏州制药有限公 司分装 ,规格 :每粒 20mg ,批号 :107131) 。盐酸氟西汀标准品 ( 批号 :001PD5 ,纯度 99. 8 %) 及盐酸去甲氟西汀标准品 ( 批号 : U096F K20 , 纯度 98. 4 %) 均由美国礼来公司提供。氘化氟西汀 ( 纯度 99 %) 由中国 科学院上海药物研究所提供。 乙腈 、 乙酸乙酯为美国 Tedia 公司产 HPL C 纯 溶剂 ; 甲酸铵 ( 纯度 99. 995 %) 为美国 Aldrich 公司 产品 ; 磷酸氢二钠 ( 分析纯 ,纯度 99. 0 %) 由中国医 药 ( 集团 ) 上海化学试剂公司提供 ; 氢氧化钠 ( 分析 纯 ,纯度 96. 0 %) 由上海松凯实业有限公司生产 。 超纯水由上海药物研究所生产的去离子水经双重蒸 馏制备而成 。 2 仪器 液相质谱联用 ( L C/ MS/ MS) 分析系统 : 美国 Agilent 公司 1100 系列四 元泵 、 在线脱气机 、 自动进 样器 ; 美国 AB 公司 API23000 三级四极杆质谱检测 器 ; 系统工作软件为 Analyst 。 HPLC/ UV 系统 : 美国 Agilent 公司 1100 系列组 合 , 包括 :四元泵、 在线脱气机、 柱温箱、 控温自动进样 器和多波长紫外检测器 ; Zorbax SB - C18 ( 50mm 2. 1mm) 柱 ;系统工作软件为 ChemStation 。 Techne 氮气吹干装置 ( 美国) ; SpeedVac 离心真 空蒸发仪 ( 美国) ; Sorvall Biof uge pico 高速台式离心 机 ( 德国) ;Vibrax VXR 小型摇床 ( 德国 ) ; QL - 901 涡旋混合器 ( 江苏 ) ; 9222 定时恒温磁力搅拌 器 ( 上 海) ;U SC302 超声波清洗器 ( 上海 ) ; SHB23 循环水 278 氟西汀 、 去甲 氟西汀及氘化氟西汀 3 种化合物 的二级质谱图见图 1 多用真空泵 ( 河南) 。 3.受试对象 22 例健康男性志愿者 , 平均年龄 ( 21. 0 1. 6 ) 岁 ,平 均 体 重 ( 65. 5 10. 1 ) kg ; 平 均 体 重 指 数 ( 22. 0 4) kg/ 。 4.试验方案:采用随机 ,开放 双周期交叉对照设计 。所有受 试对象根据随机分组表先后服 药 2 次 ,2 次服药的 间隔期为 5 周 。 受试对象在上午 7 时左右以 250mL 温开水送 服盐酸氟西分散 1 片或胶囊 1 粒 。在服药前及 服药后 2 ,4 ,5 ,6 ,7 ,8 ,9 ,10 ,12 ,24 ,48 ,96 ,144 ,192 , 336 ,480 ,672h 分别前臂静脉取血 8 mL 置于肝素抗 凝试管内并立即插入冰浴 中 ,30min 内于 4 离心 , ( 约 3 4mL ) , 分装在 2 个 5mL 聚丙烯管 分离血浆 中 ,于 - 45 冷冻保存 。 在服药前 ( 1h 内 ) 和服药后 2 ,4 ,8 ,24h 每次取 血样时记录生命 体征 ( 坐位心率 、 血压 , 测血压前需 静坐 5min) ,并进行血常规 、 血液生化测定和尿 常规 分析 ,评价其安全性 。整个研究过程中对各种不良 事件作观测和记录 。 5 分析方法 3 由于氟西汀在人体内经生物转化可产生活性代 谢物去甲氟西汀 , 因 此同时测定各时间点血浆中原 药氟西汀及其代谢物去甲氟西汀的含量 。 5. 1 LC/ MS/ MS 分析条件 ) 5. 1. 1 液相色谱 柱温:室温 ( 22 ; 流动相 : 乙腈 2 (274 ,含 0. 02 % 的甲酸铵) ;等梯度洗脱 ; 流速 : 水 226 0. 2 mL ? - 1 ;进样量 :15 L ;分析时间 :5 min 。 min 5. 1. 2 优化后的质谱 喷雾气 :8 ; 气帘气 :10 ; 碰撞 气 : 5500. 00 ; 离 子 源 电 压 : 3 kV ; 干 燥 气 温 度 : 400 ; 检测方法 : MRM 扫描 ; 检 测 通 道 : 310/ 44 , 296/ 134 ,312/ 46 。 氟西汀,去甲氟西汀及氘化氟西汀的二级质谱图 在以上条件下氟西汀和去甲氟西汀的色谱 保留 时间 ( t R) 分别为 3. 2 和 2. 8 min ,氘化氟西汀作为内 标物 ( I. S. ) ,其 t R 为 8. 7 min 。氟西汀 、 去甲氟西汀 及氘化氟西汀未在服药前的血样中检出 。3 种化合 物标 准品溶液的 MS/ MS 色谱图 、 空白血浆样品 、 标 准血浆样品及服药后血浆样品的 L C/ MS/ MS 谱图 见图 2 ,血浆中其他组分对测定无明显干扰 。 配制氟西汀浓度分别为 25. 0 ,8. 33 ,2. 78 ,0. 93 和 0. 309ng? - 1 ,以及浓度分别为 21. 9 ,7. 30 ,2. mL 43 ,0. 81 和 0. 270ng ? - 1 的去甲氟西汀系列标准 mL 血浆溶液 。迅速混摇 2 min , 加 p H 12. 5 的 KCl2 NaOH 缓冲溶液 ( 40 L ) 和内标物溶液 ( 10 L ) , 混和 均匀后 ,按血浆处理方法 处理测定 。以被测化合物 氟西汀或去甲氟西汀与内标物氘化氟西汀的峰面积 之比对被测 化合物的血药浓度进行线性回归 , 并以 浓度的倒数 ( 1/ X ) 为加权系数 , 得到测定效应 与浓 度回归方程 。 6 数据处理 取可检测到药物的最后 4 个时间点浓度 C 的自 然对数值 lnC 对相 应时间 t 进行线性回归 ,分别求得 氟西汀和去甲氟西汀在人体内的末端相消除速率常 数 () ; 用梯形法求算 AUC0t 值 ; 计算 AUC0 = AUC0t + t n , Cmax 和 T max 均 为观测值。 / 为评价 2 种制剂的生物等效性 , 主要分析参数 为经自然对数转换 AUC 和 Cmax , 采用适用于标准 2 交叉试验的方差分析方法 。根据方差分析得 2 出的均方 差 ,参照 t2 分布计算均值比率的 90 %可信 区间 。AUC 和 Cmax 按 Schuirmann 标准双 单侧检验 软件为 SAS 8. 1 。 程序 4 进行评价 , T max 采用非参数检验评价 , 统计 结 果 1 血药浓度测定方法的评价 在选定的条件下 , 氟西汀和去甲氟西汀的 定量 图 2 血浆中氟西汀及去甲氟西汀的 LC/ MS/ MS 色谱图 本研究所建立的方法对氟 西汀和去甲氟西汀的 最低检测限为 0. 28 和 0. 27ng/ mL 5. 2 血浆样本的前处理方法 于 200 L 解冻后的人体血浆样品中加入 10 L - 1 内标物溶液 ( 氘化氟西汀 ,40ng ? mL ) 及 40 L 缓 - 1 - 1 冲液 1 mol? L KCl21 mol ? NaOH ( 25 4 ) , L 20. p H = 12. 5 , 混匀 。用 850 L 乙酸乙酯提取血样中 氟西汀及去甲氟西汀 : 于 1 800r /min 振摇 10 min min 后 ,于 13 000 r /min- 1 下 离 心 5 min , 取 上 清 液 min 700 L 。再用 700 L 乙酸乙酯第 2 次提取血样 , 提 取方法同第 1 次) ,离心后取出上清液 700 L 。合并 2 次上清液 , 于 40 用氮气吹除溶剂 ( 25 min ) 。将 吹干后的提取残留物溶于 50 L 乙腈 2 水 ( 186 , 314 含 0. 02 %甲酸铵 ,离心后 ,取 15 L 上清液用于 L C/ MS/ MS 分 析 。 5. 3 标准曲线的制作 线性范围分别为 0. 31 25. 0 和 0. 27 21. 9 ng ? mL - 1 。氟西汀的工作曲线为 Y = 0 . 473 X - 0 . 088 ( r = 0 . 9995 ) , 去甲氟西汀的工作曲 线为 Y = 0 . 188 X - 0 . 022 ( r = 0 . 9998 ) 。在线性范围内 ,测定不 同浓度氟西汀和去甲氟 西汀的绝对回收率和变异系 数 ,见表 1 。化合物 氟西汀 ( n = 5) 表 1 血浆样本的提取 回收率 血药浓度/ ng /ml 0. 28 2. 48 22. 3 0. 27 2. 43 21. 9 2. 00 回收率/ % 58. 9 8 6. 56. 6 0 3. 61. 6 0 2. 47. 6 0 8. 39. 8 9 1. 40. 3 4 2. 58. 7 8 2. CV / % 11. 6 5. 2 3. 2 16. 8 4. 8 6. 0 4. 8 去甲氟西汀 ( n = 5) 氘化氟西汀 ( n = 15) 5 种不同浓度的氟西汀和去甲氟西汀 分别进 以 行血样中化合物浓度测定的日内和日间精密度试 验 。分别在正式血样分析的 开始 、 中间及结束时先后进行了 5 次日间精密度试验 , 每次每个浓度进行 3 个平行样 分析 。不同浓度的日内和日间试验的变 异系数均在 11. 0 %以内 。 2 药代动力学参数 ( 480 和 672h) 的氟西汀血浆浓度低于定量检测限 , 故根据 0 336h 的氟西汀血浓度 2 时间数据计算氟 西汀的药代动力学参数 。22 例受试者的血药浓 度 2 时间曲线见图 3 ,其他药代动力学参数见表 2 。 由于多数受试者在设计取样的最后 2 个时间点 图 3 单次口服 20mg 盐酸氟西汀分散片和胶囊后的药时曲线 表 2 单次 口服盐酸氟西汀分散片或胶囊后的药代动力学参数参 数 Cmax/ ng? - 1 mL T max/ h 氟西汀 分散片 16. 96 40 5. 6. 8 7 1. 919. 79 491. 33 971. 08 541. 48 0. 0132 0035 0. 59. 6 9 18. 胶囊 17. 02 73 4. 6. 1 2 1. 964. 17 524. 14 1 018. 72 583. 46 0. 0123 0034 0. 61. 3 0 20. 分散片 20. 05 33 10. 74. 6 1 53. 5 722. 63 987. 64 2 6 171. 86 320. 18 3 0. 0047 0012 0. 155. 6 7 40. 去甲氟西汀 胶囊 19. 55 10 8. 80. 0 4 56. 5 784. 37 671. 92 2 6 312. 87 025. 06 3 0. 0046 0012 0. 165. 7 7 65. AUC0t / ng? h L 1 1 AUC0 ng? / h L h- 1 / t 1/ 2 / h 氟西汀 t = 336 h ,去甲氟西汀 t = 672 h 3 生物等效性分析 单次口服 20 mg 盐酸氟西汀分散片或胶囊后 , 氟西汀和代谢物去甲氟西汀的 AUC0336h ,AUC0 化合物 参 数 AUC0336h/ ng? h L 1 和 Cmax 经双单侧 t 检验 ,结果表明 ,2 种制剂具有生 物等效性 。见表 3 。 n = 22 均方差 (MSE) 0. 0077 0. 0065 0. 0064 0. 0054 0. 0053 0. 0154 90 %可信限 (0. 92 ,1. 01) (0. 92 ,1. 00) (0. 95 ,1. 03) (0. 94 ,1. 02) (0. 93 ,1. 01) (0. 94 ,1. 07) 表 3 生物等效性评价几何均数值 分散片 813. 04 853. 96 16. 17 5 345. 12 5 778. 68 18. 32 氟西汀 AUC0 ng? / h L Cmax/ ng? - 1 mL 1 胶囊 843. 39 886. 64 16. 33 5 242. 11 5 602. 73 18. 44 比 率 0. 96 0. 96 0. 99 0. 98 0. 97 1. 01 双单侧 t 检验 t1 t2 7. 031 7. 632 8. 812 9. 164 8. 746 6. 148 9. 795 10. 721 9. 623 10. 915 11. 559 5. 775 去甲 氟西汀 AUC0672h/ ng? h L AUC0 ng? / h L Cmax/ ng? - 1 mL - 1 1 4 安全性 22 例受试者中无 1 例主诉因试验药物引起的 氟西汀在体内经细 C YP 2C 和 2D6 同工酶代 谢 ,而氟西汀和去甲氟西汀也是 C YP 同工酶的浓度 依赖 性 抑 制 剂 。在 治 疗 剂 量 下 , 氟 西 汀 可 抑 制 C YP2D6 和 C YP2C9/ 10 , 中度抑制 C YP2C19 , 因而 不适 ; 其他安全性测试 , 包括接纳时 、 2 周期试验 第 前和结束后的生 命体征 、 体检和 EC G 以及实验室指 标 ,均未见有临床意义的改变 。 也抑制自身的代 谢 。这即是氟西汀药代动力学呈非 线性和高度个体间变异的原因 2 。 本研究结果表 明 , 中国健康男性单次口服 2 种 氟西汀制剂后的血药浓度 2 时间过程均有很大的个 体 差异 。以盐酸氟西汀分散片为例 , Cmax 的范围为 9