腰速安关于cd68巨噬细胞在腰椎间盘突出组织中的分布及其意义报告

腰速安关于腰速安关于 CD68 巨噬细胞在腰椎间盘突出组织中的分布及其意义巨噬细胞在腰椎间盘突出组织中的分布及其意义 报告报告 【摘要摘要】 目的：研究 CD68巨噬细胞在不同类型腰椎间盘突出组织中的分布及其意义。 方法：应用免疫组织化学方法检测40 例(男27 例，女13 例)退变腰椎间盘和8 例(男3 例， 女5 例)特发性脊柱侧凸腰椎间盘髓核组织中 CD68的表达。将获得的数据进行统计学分析。 结果：腰椎间盘突出破裂型组和未破裂型组 CD68表达阳性分别为18 例，13 例。8 例特 发性脊柱侧凸腰椎间盘组织中 CD68阳性表达1 例。结论：CD68巨噬细胞参与了腰椎间盘 突出症的发病，但与突出严重程度无关。 【关键词关键词】 CD68 腰椎间盘 免疫组织化学 The distribution and significance of the positive expressing macrophage of CD68 in the herniated lumbar disc CHANG Qiang1，MA Xun1，NIU Jianpeng2，WANG Yongbo1 (1.The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China；2.The Center Hospital of Taiyuan，Taiyuan 030009，China) Abstract Objective：To study the distribution and significance of the positive expressing macrophage of CD68 in tissues of different type of herniated lumbar disc.Methods：The expression of CD68 in experimental group(40 fresh pulpy nucleus of patients with lumbar disc herniation，27 males and 13 females)and control group(8 flesh pulpy nucleus of patients with idiopathic scolicsis，3 males and 5 femalcs)were detected with immunohistochemical techniques.Then perform statistical analysis.Results：Positively expressing cells of CD68 in rupture group and unrupture group of LDH were 18 and 13 speciments.In the control group，positively expressing cells of CD68 was presented only 1 speciment.Conclusion：the positive expressing macrophage of CD68 involved in degeneration and herniation of lumbar disc.But there is no correlation between the level of the herniated disc. Key words CD68；lumbar intervertebral disc；immunohistochemistry 椎间盘退变是一复杂的病理生理过程，确切发生机制尚未明确1 。Gronblad 等 2的研究表明，在突出的腰椎间盘组织中存在免疫炎症反应，并有以巨噬细胞为主的 炎性细胞浸润。本研究旨在探讨 CD68巨噬细胞在椎间盘退变中的分布及其意义，报告如 下。 1 资料与方法资料与方法 1.1 一般资料 实验组：退变的腰椎间盘髓核组织取自2007年3月2007年9月在山西医科大学笫二 医院骨科住院手术的腰椎间盘突出症患者的髓核标本，共40 例，男27 例，女13 例，年 龄2763 岁。纳入标准：有典型临床症状和体征，并经 CT 和 MRI 检查确诊的腰椎间盘 突出症，MRI 显示 TW2髓核信号变低。对照组：特发性脊柱侧凸患者的腰椎间盘髓核组织 取自同期在山西医科大学第二医院骨科住院手术的特发性脊柱侧凸患者的腰段髓核标本， 共8 例，男3 例，女5 例，年龄1022 岁。纳入标准：术前无腰腿疼痛病史，MRI 检查 确诊椎间盘无明显退变，TW2髓核信号无改变。所有标本均制作石蜡切片，用于免疫组织 化学染色。 1.2 主要试剂 一抗：即用型鼠抗人 CD68单克隆抗体2 mL；二抗：即用型二步法检测试剂盒。均由 北京中杉金桥生物技术有限公司生产。 1.3 免疫组织化学检测 CD68蛋白表达 二步法的操作步骤：60烤箱3 h 烤片；二甲苯、梯度乙醇脱蜡水化；抗原修复：微 波抗原修复10 min；滴加内源性过氧化物酶阻断剂3H2O2 5 min；滴加一抗工作液，4 冰箱过夜；滴加试剂1(polymer helper)37孵育20 min；滴加试剂2(二抗)30孵育30 min；DAB 显色；苏木素复染；乙醇脱水，二甲苯透明；封片，镜下观察。 1.4 结果判定 免疫组织化学方法染色的 CD68蛋白检测中，阳性细胞均为细胞质，呈黄色。对阳性 细胞进行计数。阳性细胞数/总细胞数50为“”。 1.5 统计学方法 每一切片选取5个高倍镜视野，用计算机图像分析系统测定阳性细胞占总细胞比率。 从而得出 CD68表达阳性率。用 SPSS11.5统计软件包进行统计学处理。阳性率比较使用 2检验。 2 结结 果果 2.1 CD68在退变腰椎间盘中表达明显增加 在特发性脊柱侧凸标本主要为阴性表达，在退变组标本主要表现为阳性表达(见表1)。 2.2 CD68在腰椎间盘突出破裂组和未破裂组之间的阳性比较(见表2)表1 对照组与 实验组患者免疫组织化学染色结果比较表2 破裂组与未破裂组患者免疫组织化学染色结 果比较 3 讨讨 论论 椎间盘突出组织压迫和刺激了神经根引起坐骨神经痛，这个观点被广泛接受，但是压 迫本身并不能引起疼痛。至今，引起坐骨神经痛的确切机制仍不清楚，压迫引起什么而导 致坐骨神经痛也不知道。前列腺素 E2是一种致痛物质。前列腺素 E2的生成可被 IL1和 TNF 刺激产生。而 IL1和 TNF 均被巨噬细胞所分泌。并且，IL1本身也是一种致 痛物质。Yanagisawa 等3研究表明，前列腺素 E2只需10-6摩尔就可以引起疼痛。 Takahashi 等4在体外实验证明，TNF 可以增加前列腺素 E2的合成。TNF 可增 加鼠巨噬细胞合成前列腺素 E2。我们采用免疫组化方法检测了 IL1和 TNF 的重要来 源之一的巨噬细胞在突出椎间盘组织中的分布，以阐明坐骨神经痛机制。实验结果显示， 在突出椎间盘有大量巨噬细胞出现，而在未退变椎间盘鲜有巨噬细胞，说明 CD68巨噬细 胞与退变相关联。 CD68是分布于细胞表面的跨膜糖蛋白，相对分子质量为110kDa。单核细胞表面的 CD68较少，旦向巨噬细胞转化，细胞表面就表达 CD68，且这一变化与细胞内溶酶体的 功能增强有关5 。它们定向趋化到突出间盘组织的周围，对溶解吸收突出组织5 ，促 进突出间盘组织内细胞外基质(ECM)的降解起到了重要作用。李新友等6报道，突出间 盘的肉芽组织可以产生 NO，NO 可抑制蛋白聚糖的合成。IL1等由巨噬细胞分泌的细胞 因子可以上调 MMP3、ADAMTS4，5等蛋白聚糖降解酶水平7 。 此实验也发现破裂组和未破裂组 CD68阳性细胞数比