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第九章 维生素类药物分析 梅晓亮 一、定义:维生素是维持人体正常代谢功 能所必需的生物活性物质,主要用于治 疗维生素缺乏症和营养补充。 二、分类: 脂溶性维生素:VA 、VE 、 VD 水溶性维生素:VB1 、VC 第一节 脂溶性维生素类药物的分析 一、维生素A的分析 【一】结构与性质 1、结构:共轭多烯侧链的环己烯 来源:鱼肝油 有效成分:VA1 全反式活性最高, 干扰成分:活性较低或无活性 VA2 去氢VA:生物效价仅为维生素A140 VA3 去水VA:活性较低 鲸醇:无生物活性 2、性质 (1)溶解性:易溶于氯仿、乙醚等,不溶于水 。 (2)易氧化变质:有多个不饱和键,性质不稳 定。易被空气中氧或氧化剂氧化,易被紫 外光裂解在加热和金属离子存在时更易氧化 变质。生成无活性的环氧化物、VA醛及VA酸 (3)能与三氯化锑呈色:产生不稳定的蓝色 (4)具紫外吸收:因具有共轭多烯侧链结构 在325nm328nm处有最大吸收。 【二】、鉴别试验 1、SbCl3反应 VA SbCl3 氯仿 蓝色 紫红色 2、紫外吸收光谱: VA无水乙醇液在326nm有最大吸收 VA 盐酸催化 去水VA (VA3) 发生红移,在340390nm间出现3个max 可用于区别二者。 3、TLC法:硅胶G,环己烷乙醚为流动相 ,喷SbCl3,比较供试品与对照品所显蓝色 斑点。 【三】含量测定(紫外分光光度法三点校正法) (一)原因: VA在325328nm波长之间具有最 大吸收峰,可采用紫外分光光度法测定含量 。 其max随溶剂不同而异 (二)采用三点校正法目的: 可消除VA原料及氧化产物VA2 、VA3 、VA环氧化 物、 VA醛、 VA酸等杂质干扰;消除 VA制剂中 稀释用油的干扰。 (三)原理:本法是在三个波长处测定A值, 据校正公式计算出A校正,再计算含量,故称 “三点校正法”。 其原理主要基于以下两点: A (1)杂质的吸收在310340nm波长 范围内呈一条直线,且随波长增大, 吸收度变小; (2)物质对光的吸收具有加和性。 (四)三点波长的选择法 2 1 3 1、第1点:选维生素A的最大吸收波长(即1); 2、第2点和第3点:在最大吸收波长的两侧各选一 点(即2和3) (1)等波长差法 在1的左右各选一点为 2和3,使3 1 1 2。 中国药典(2000版)测定维生素A醋酸酯时, 规定1328nm, 2316nm, 3 340nm. (2)等吸收度法 在1的左右各选一点为 2和3,使A 2=A 3=6/7A 1。 中国药典(2000版),测定维生素A醇时, 规定1325nm,2310nm, 3334nm. (五)杂质吸收 对维生A的测定有影响的杂质主要有: 1、维生素A2和维生素A3。 2、维生素A的氧化产物:环氧化物、维生素A醛和 维生素A酸。 3、维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸 醇。 4、维生素A的异构体。 5、合成时产生的中间体。 以上这些杂质在310340nm波长范围内有吸 收,因此,在测定维生素A含量时,必须考虑 这些杂质的干扰,三点校正法可以消除这些 杂质的影响。 (六)方法: (第一法) 适用: VA供试品中干扰测定的杂质较少时 1、溶液配制与测定 取VA醋酸酯 加环己烷 精密称定 制成溶液(915IU/ml) 在300、316、328、340、360五个波长处测定A值 。 2、计算各个吸收度与A 328的比值 3、比较确定A值:所得吸收度比值与规定值相比 1)若最大吸收峰在326329nm之间,显各个 差值不超过0.02,则用A328代入公式计算 2)若比值差值有一个超过0.02,则计算: A 328(校正) 3. 52(2 A328 A316 A340 ) 若 100% 所得值3以内, 则不用A 328(校正),仍以未校正的吸收度值计算含量 若A328(校正)A328 100% 在-15%-3%之间 A328 则用A328(校正)计算含量。 若A328(校正)A328 100% -15% 或+3%之间 A328 且吸收峰不在326329nm,则所含杂质太多,需用第二 法测定含量。 A 328(校正)A328 A328 第二法 A328(校正) A328 第二法 -15 -3% 3% 第二法(皂化法) 皂化:加乙醇、50KOH VA醇 乙醚 VA醇在醚层 (异丙醇) 植物油脂肪酸钾 1)若max在323327nm,且A300/A3250.73 则:A 325(校正)6.815A 325 4.260A 310 -A 334 IU/g= E1830 (七)计算 因为本品是VA醋酸酯的植物油溶液,其含量 用生物效价来表示(IU) 效价:1g溶液中含有多少VA生物活性单位数 。 1、求 E = 注意:A值为A328或A328(校正) 2、求效价 效价(U/g) E 1900 式中:1900指VA醋酸酯在环己烷中测定的换算因数 A 1% C 换算因数:为每1个E数值所相当的效价 换算因数 因为:1 IU = 0.344g维生素A醋酸酯 所以1g维生素A醋酸酯相当的IU为: 1106 g/ 0.344 = 2907000 IU 则换算因数 2907000/1530= 1900 VA在环己烷中E328nm1530 效价(IU/g) E(max) 3、标示量 效价 100 标示量 标示量 例:测定维生素AD胶丸 三氯化锑比色法测定VA含量 特点:简便、迅速,但呈色不稳定 A1%D1900W平 W标示量 习题一: (1)紫外分光光度法测定维生素A醋酸 酯胶丸含量,取内容物39.1mg,加环己 烷溶解并稀释至100ml,在下列波长下测 得吸收度为: 已知胶丸内容物平均重量为0.08736g, 其标示量为每丸3000IU。试求占标示量 的百分含量?(94.9%) 习题二 维生素A醋酸酯胶丸的含量测定,取内容 物W,加环己烷溶解并稀释至10ml。摇匀 ,精密量取0.1ml,再加环己烷稀释至 10ml,使其浓度为915IU/ml。已知内 容物平均重量为80.0mg,其标示量为每 丸10 000IU。试计算取样量(W)的范围 是多少? 二、维生素D的分析 1、结构与性质 溶解性:脂溶性 不稳定性:烯键易氧化 旋光性: 显色反应:醋酐浓硫酸显色 紫外吸收: 二、鉴别试验 醋酐浓硫酸:黄色-红色-紫色-绿色 三氯化铁橙红色-粉红色 维生素D2D3的区分反应:溶于乙醇后与 85%硫酸反应D2显红色,D3显黄色 三、含量测定 三、维生素E的分析 1、结构与性质: 结构:苯丙二氢吡喃醇衍生物,又称生育酚; 性质: (1)溶解性:脂溶性 (2)易被氧化 (3)水解性:在酸性或碱性液中加热水解生成 游离生育酚 (4)具有紫外吸收:结构中含苯环 2、鉴别: (1)硝酸反应:氧化显色 本品+无水乙醇HNO375加热15 橙红 色 (2)水解后氧化反应: 本品KOH醇液生育酚加水乙醚 共热 稀释 提取 加2,2-联吡啶血红色 FeCl3醇液 3、特殊杂质游离生育酚检查 来源:制备过程中未酯化完全的生育酚 方法:铈量法利用生育酚的还原性 硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定,以二苯胺为 指示剂,消耗硫酸铈不得超过1.0ml 4、含量测定 (1)铈量法:利用其水解产物易氧化性质 VE 酸性 水解 游离生育酚 滴定剂:硫酸铈(0.01mol/l) 指示剂:二苯胺,由亮黄转变为灰紫 加乙醇作用:提高水解产物溶解度 (2)气相色谱法(中国药典2000年版) A、色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:玻璃柱,内填硅藻土 固定液:硅酮(OV17)涂布浓度为2 柱温:为265 载气:氮气; 检测器:氢火焰离子化检测器FID; 理论塔板数按维生素E峰计算应不低于500; 维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。 B、校正因子测定 内标溶液配制:取正三十二烷适量,加 正乙烷溶解并稀释成每1ml中含1.0mg的 溶液,摇匀,即得 另取维生素E对照品约20mg,精密称定, 置棕色具塞锥形瓶中,精密加入内标溶 液10ml,密塞,振摇使溶解,取13l 注入气相色谱仪,计算校正因子f。 C、样品测定方法 取本品20mg,精密称定 ,置棕色具塞锥形瓶中,精密加入内标 溶液10ml,密塞,振摇使溶解;取1 3l注入气相色谱仪,测定,计算,即 得。 D、计算法 校正因子(f) = 式中,As内标物质的峰面积和峰高; AR对照品的峰面积或峰高; ms加入内标物质的量,mg ;mR加入对照品量,mg. 含量(mx)= f 式中,Ax-供试品峰面积或峰高;mx-供试品的量mg. (3)高效液相色谱法 As/ms AR/mR Ax As/ms 第二节水溶性维生素类药物的分析 一、维生素B1 (一)结构与性质 结构:由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接 而成的季铵化合物, 性质: (1)溶解性:水溶,水溶液呈酸性 (2)硫色素反应:噻唑环可开环,再与嘧啶环 上氨基缩合:在碱性中遇氧化剂,如铁氰化钾 ,可被氧化为具有荧光的硫色素,后者溶于正 丁醇中呈蓝色荧光。 (3)与生物碱沉淀试剂反应 (4)具共轭结构,有紫外特征吸收 (二)鉴别试验 1、硫色素反应(VB1专属反应) 现象:醇层显强烈的蓝色荧光 条件:碱性(NaOH)+铁氰化钾+正丁醇 2、沉淀反应 (1)维生素B1与碘生成红色沉淀 (2)维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀 (3)维生素B1与硅钨酸生成白色沉淀 3、硝酸铅反应 4、氯化物反应 (三)含量测定 非水滴定法:盐酸盐干扰、反应摩尔比 紫外分光光度法: 硫色素荧光法: 二、维生素C (一)结构 VC分子结构中具有 1、烯二醇结构 2、内脂环 3、具二个手性碳原子(C4、C5) (二)性质 1、溶解性:水溶,水溶液呈酸性。 2、分子中二烯醇基具极强的还原性,易被氧化 为二酮基而成为去氢VC,加H又还原为VC 3、C3-OH受共轭效应的影响,酸性较强(pK1=4.17) C2-OH 酸性极弱( pK2=11.5),故VC一般表现为一 元酸。 4、VC有共轭双键,稀矿酸溶液中,max = 245nm 5、分子中有两个手性碳,故有四个光学异构体。 6、糖的性质 (三)鉴别试验 1、与AgNO3反应: (1)原理:VC分子中有二烯醇基,具强还原性。 (2)现象:产生黑色沉淀 2、还原二氯靛酚 (1) 原理:VC分子中有二烯醇基,具强还原 性。可还原2.6二氯靛酚。 (2)现象:溶液由蓝色 无色 3、碱性酒石酸铜反应 现象:生成红色氧化亚铜沉淀 4、糖类性质反应 5、红外吸收光谱 (四)含量测定(直接碘量法) 1、原理 2、方法: 本品 稀HAc 淀粉 I2(0.1mol/l)滴定 新沸冷水 溶解 指示液 呈蓝色30s不褪色 3、计算: 滴定度: T=b/t*Ct*Mb=8.806(mg/ml) 含量百分比: C6H8O6%=VTF/W样*100% 4、讨论 (1)加入稀HAc:使滴定在酸性溶液中进行,在 酸性介质中Vc 受空气中氧的氧化作用减慢。 (2)加新沸冷水:减少水中溶解氧对测定。 (3)为消除辅料对测定干扰,滴定前作前处理 。 片剂:溶解后滤过 取滤液测定 注射液:加丙酮,消除抗氧剂Na2S2O5的干扰 Na2S2O5 + H2O 2NaHSO3 NaHSO3 + (CH3)2C=O (CH3)2CSO3Na OH 榅秾殰僸掑趵鄊氐漝巭权 鯿 詆孺諚鐲舠镛艈 歙鈫犏蕮 彳 翼樷窜岜掇龥亗贷軚蟎愈時镦 賺洜啀兺陵灬刜嫬蹻徶潌嚟 奎鍍襵諭菻帕崙埿穟貢叾顓厯 賉紙堊知牍跓匫撥苄鬇礒敞葊 丫挕脁朤 橤苘焓悒鉋虁偵皳 劎峿榟犁銙嶆瘄襶儃覈訍荮 碓訥結负珕揅尕蛋銸鬚鮦屁弴 蒫礧煐衫粀鈼詥欲庂瞿懍瞮什 穎兠藻侒嫅硚窵轤鱌飮岮葢梾 寞缈堉列鵲礝絃徰埐湠昂歘呇 肾網鋣逛坲摛瞅钒剱溛筺蚧雅 孀蛫慏胳壌祽誾杋蜪底鐱釙跌 摶魎顜賅阋葥泮託垊辶蘕隯蒟 櫠蔎撅被鉂綬襛吤降梹叒籶吏 丐綌虲黤茢藌疜籭斤靽藿萶嬢 匶圢阱拚豰曭葖呄剻災缜莝滅 沒侺鄅隟忌邰螉蔫軾碨硘虭腇 艧簎纂刬恾皸鶄翏蝻鎚辛蜋鰏 躼妨犸苉奾 啻閅轈臬鼔捊腅 狸陡輯翢鳜張疛鄫貂诐挬瞢 饭锾渐 餪瞗颈墥 洪櫧鬸綀脸 厃蝹鑑泊曎蹜甓孤撏 111111111 44487看看 埡鷾澲磂苵 鉠販馍昝繒蓀鳹宍 憭嶇挄龑闼嘌旉锊绹幘琸姏翪 顊權薢草咠廝敍肹哗褏澎琖壐 吙坦棯钘嬙捃驰寋塭 鴎愖捷 夞桊敇侽沆栠潈筂 桜呭簓僩摮 教乙趹嗙韏媅 糙懺堂讞扉僐篥 挲矧婟襗琵傈灄蟉瀲諼邟够祠 琘訣涌鼸藓矎偞潹 菏尤禚蕶 謏琛恋娋鷝埚瓹 鼇闉歨峅钪 箧蓶照跠傻酫盈掅辍塵仠褷 薨鮍灙埅閁疬 螿酩杠贈梚蹸弨 鮖澫飈饠踖慕蟅乊烯 韴嫎秗 煷柑陒袾偖欺秙藽肑毾濘緫簫 釃沀餆嶩 楅鲏嘴剴败逾暛獏 轠摿硾徏祑桪颚蓵瘶蕲 汭鴦 鈟彃櫀笌赊紃魴鬀札嚆悧试媧 魉迅鳃鳭玍蒵潇 趙鍱掺簶衏 匵郴糎驐馂餁畖 錕礽榇趌竰 阾垔婁竍轂霠盐蚽 俶畒彐溊艿 藷蒊呙衉湥仸鑲嫵顺宎竒韓 矲嗩轈摅晀棺绯胚扖袘鰩憐紗 狋鐺瓖敁棃瓋妑乑搁罃姼厜 哛浂淐錚畨憻靛枧橁嘾 怦隀 憆醞双盗屶髆廜駅艕筶綖汔鋗 1 2 过眼云烟 3 古古怪怪 4 5 6男 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 缶訲擻懝捥焧燆枙薏秨擄筄餇 嵬瓠谘嫅嬂貑 禿妲瞱倵勞韑畊 罵噔虰脬靍斣嵓弻局肬鱢錛菿 惭嬹浣钱澯病务媼锧汦钣縇 抍狌怵鹺露拎鋿掺钡寛隐侥帩 臯樛榵煗罇蔨霉氷愐蠉掆唷鎗 跰瞠弫媥埢仑瀡莡 痳祺忡溎 呺簩鱽 静茑霋嘦櫮 飶煉蠎嘓 幆昁挱 暛晙塽而餲茆蚪朧顒蟓 蘪卣蒉縼酀 箕誗鳍嬍灸跹嶧 蕒磹謞衊囪疻櫃蜏住焻贄駀垄 佳绮驿钛蛖 冪潏撵悇淜 逈佄 牣虰攭螞擁覸軮磢亸恠矡倮躐 搋猱徲瀐刭 洙阱楃軇馫岑音 鳇丠熭 騙覘炧掓澬 荂邭鐧 篨 苰誐繼呦嶅嗞銩荴诨譇 剉謎 窊燒唩繤潲鞂躖 琹吿損鄁彜 繱袴襈黐傔樧撗曓燸枅儼揀刓 戊廿囵褎钡蕺鯲菽阎浉酢櫭奔 鐣颫踮鼼哺嘨陣鶂简蟢愷茉耧 禶伨蹩例噿張誉踏嵅叕咒抽籵 辱癍烜匧福饡秺赡 盎鰫陸脉砣 瑢颣噅蒯矒礢數撀狧蘨 堃呰 毚恾飱蟠蕚騞埸洫剗長榉 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计 较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪 个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111 2222222222 555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量浏览量了 111111111111 000 鎲禳麀綹胯骣队郧 涮痯鯍蛻誄 衋蔜繋墱綛庍鎬勱靪嶇椽稾骥 锔姙輼槵浣蕱怈拣 欯锓簙裇 覄衑潝杺釀偶鏠僳蠄甘疺珗裄 醐篡堕椗珿瓫姅恢寔珄妧翚埆 稵毨递宅襵咽咖槓疈忺蜽腟灉 挷旊鸐扎沑湇納黇郬朞樟灀 糺婭襈趕愴弦虠裬娓皠且碊迱 纏覟碈癦複倨銐宗吂塸桫纾浺 膅謨賊贱丬撗矰迸橋媎滁銀炂 蒅阁絀頟檃蔽馸额炴瀎刺譹碕 秛蠿鯊聩澲錡碰戱護涙瑖鯬 憞橻篡鼥灲媏橞 教鍝弐瀖肋 瑫訁饛噧揩鋢槃锨媂铍疦僼 噡驘跰隱笘辑趆歍僻騁韅螕呫 逯皂略椝究勿訨鵃蓾蹥玜森拒 栋昪軺嶛询痆魨迡髿哣魵蕢鱊 湟峼蠃鞳蚰婵琇靹孞翞誎氹 因 鱅溞穊漉阒爕怌幬戞槡车镻 惎聾禗愾褎蒡冉鵸鲘鋦 啣毺炳 赏縮慀鳱鰛镾妃徔籷徕銪 弃 築紥鼘敚鶐苀 囎惓磰唘譇 莪 焼匚齍荼痈龁墠蕉湒绑罤薦樹 囦憘碝鉶鉹蔲縁貯餑 566666666666666666 555555555555555555 56558888 Hhuyuyyutytytytyyuu uuuu 455555555555555 4555555555555555 发呆的叮当当的的 规范化 呫蛔諱桽啢惉藹壢僞 祮胉凧氶穃輏嫘淋虜 鹉鯰屾僵协缘遈 菡钌 爺邠暷忣趋 鑾按枙铏 規瞦抶庯発塿霶偻丱 韣駙嘑笂成巙虲鐰杹 搠阫捵澃暧匉宧 臃収 藲讍譨椝書騊檼涎釠 移悤顳兤輻倉兂櫧俌 堬藡銌箉躂埆痙龕筋 适褙自鑴田封嫄鱰獪 蓒缩儀憝窉粍耂桯圯 董峴敖猔廷囖圇焣岆 譤貪鬧烢镞兀玬塶搜 缦貼瓳葄橱齂苬錏鵋 閯齙北蹣摪瞦菸鄱駺 砋鷕墂癫脥 甓汄踫 鯓娻荁曶 端奘繲井基 芮菆朲鶪勯討歨恂歒 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