survivin mrna在肾透明细胞癌组织和外周血中表达的研究(1)

SurvivinSurvivin mRNAmRNA 在肾透明细胞癌组织和在肾透明细胞癌组织和 外周血中表达的研究外周血中表达的研究(1)(1) 这篇SurvivinmRNA 在肾透明细胞癌组织和外周血中表达 的研究论文是程序自动抓取于互联网上，查看更多请点 击：论文频道：lwxz/ 【摘要】 目的探讨 SurvivinmRNA 在肾透明细胞癌患者组织和外周血中的表达 及其意义。方法采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法检 测 46 例 RCCC 患者肿瘤组织和 15 例健康志愿者外周血细胞 中 SurvivinmRNA 表达情况。结果 46 例 RCCC 患者中有 21 例外周血细胞 SurvivinmRNA 阳性表达，表达率为。对照 组 15 例中有 2 例 SurvivinmRNA 阳性表达，阳性率为 ，RCCC 组 SurvivinmRNA 阳性率明显高于对照组（P） 。46 例 RCCC 患者同时收集到肿瘤组织和外周血，SurvivinmRNA 阳性表达分别为%和%，两者具有相关性（P） 。结论 SurvivinmRNA 在 RCCC 肿瘤组织中有显著的阳性表达，应用 RTPCR 法检测外周血细胞 SurvivinmRNA 的表达，诊断 RCCC 敏感性、特异性高，且创伤性小，因此 SurvivinmRNA 有可能成为 RCCC 诊断的一个新的敏感指标，是目前进行肿 瘤早诊的理想检测方法之一。 【关键词】 肾透明细胞癌 Survivin 逆转录聚合酶链反应 外周血 【Abstract】 Objective Tostudytheexpressionandsig nificanceofSurvivinmRNAintumoraltissuesandbloodcell sofpatientswithrenalclearcellcarcinoma（RCCC）. Methods SurvivinmRNAintumoraltissuesof46patientswit hRCCC,15normalrenaltissues,bloodcellsof46patientswi thRCCC,and15healthyvolunteersweredetected.Survivina ndactinwereamplifiedbyusingRT 21casesshowedpo sitiveSurvivinmRNAsignalsinbloodinpatientswithRCCC. Only2patiemtsincontrolgroupshowedpositiveSurvivinmR NAsignalsinblood.TheexpressionofSurvivinmRNAdiffere ncebetweenexperimentalgroupandcontrolgroupwassignif icant.ThepositiveratesofSurvivinmRNAintumortissuean dbloodwere%and%,respectively.Conclusion Carcinomati ssuesofthepatientswithRCCCshowedsignificantlypositi veexpressionofSurvivinmRNA.Highsensitivityandthespe cificityofexpressionofbloodSurvivinmRNAtoprovideasi mple,microinvasivediagnostictesttoidentifypatientsw ithRCCC.RTPCR wasaneffectivemethodfordetectionofS urvivinmRNAinthebloodofpatientswithRCCC. 【Keywords】 renalclearcellcarcinoma,Survivin,RT PCR,peripheralblood 肾细胞癌（renalcellcarcinoma，RCC）是泌尿生殖系统 常见的恶性肿瘤，占泌尿外科肿瘤的第二位，其患病率占 全身恶性肿瘤的 3%1 。根据病理分类，肾细胞癌又分为 透明细胞癌、乳头状癌、颗粒细胞癌及未分化癌等几种类 型，其中大多数为透明细胞癌，约占总数的%1 。目 前对于肾癌尚无特殊有效的治疗方法，传统临床治疗中远 期效果均不理想，因此早期诊断对 RCC 的预后至关重要， 发现敏感性和特异性均理想的肿瘤标记物对此有着极为重 要的意义。目前关于 Survivin 在 RCC 中表达的报道甚少， 其与肾癌临床病理特征的关系尚无公认的结论，且 Survivin 在 RCC 患者外周血中的表达情况能否成为一种潜 在的瘤标，尚未见报道。本研究采用逆转录聚合酶链反应 法分别检测 RCCC 患者组织和外周血中 SurvivinmRNA 的表 达情况，评价其临床意义，以期找到更为有效的诊断、治 疗和判断 RCCC 预后的指标。 1 资料与方法 临床资料 实验组：收集 XX 年 1 月XX 年 12 月我院诊治 RCCC 患者 46 例，年龄 4278 岁，平均岁；男 27 例，女 19 例；左侧 25 例，右侧 21 例；均经临床及病理证实。病 理分级按 WHO 标准，G111 例，G221 例，G314 例。同时留取 该 46 例 RCCC 患者的外周血，患者采血前未经任何治疗。 对照组：15 例健康人外周血做为对照组。 实验方法 实验材料的处理和保存：所有 RCCC 组织标本取下后立即 以液氮速冻，并转移至80保存待用。所有外周血取 3ml，EDAT 抗凝，3000r/min，离心 20min，弃血浆转入 mlEP 管，-80保存备用。 RNA 的提取：采取 Trizol 法制备样品总 RNA。 RNA 的测定：用紫外分光光度计对 RNA 在 260nm 和 280nm 下的吸光度 A260 和 A280 进行定量，计算 OD260/OD280。RNA 完整性的测定：秤琼脂糖 1g，加入 1TAE 到总体积为 50ml，配成 2%的凝胶，经微波炉加热 100s 左右，冷却到微烫手时加入 lEB 充分混匀后灌胶。 取 RNA 溶液 3l，加 2l1TAE，1l6LoadingBuffer，混匀后上样。在 1TAE 的电泳液中，以 5V/cm 的电压电泳 20min，在紫外 灯下观察 RNA 的电泳带，比较核糖体 RNA（rRNA）28s 和 18s 两条带，如果在 EB 作用下显色强度为 21，说明本实 验提取的 RNA 比较完整。 逆转录合成：10l 反应体系，按照设计盒说明配制。反 应条件：3010min，4530min，995min，55min。产 物20保存待用。 PCR 扩增：50l 反应体系配置：在上述 10l 逆转录产 物中依次加入：反应条件：942min 灭活逆转录酶；94 变性 45s,54退火 30s,72延伸 60s,35 个循环；72延 伸 10min。反应完成后将产物20保存待用。 琼脂糖凝胶电泳：制备 2%琼脂糖凝胶，于 100V 稳压条件 下电泳 45min，在 VILBERLOURMAT 凝胶成像仪上观察并拍照。 电泳结果判断：出现 270bp 电泳带为 HPSEmRNA 阳性，标本 均选 actin 为 PCR 反应内参标准。 ELlSA 反应：按照 RTPCR 试剂盒操作说明书进行。 统计学方法 应用统计软件进行分析，统计学分析方法采 用非参数统计中 2 检验、Spearman 等级相关进行统计分 析，P为有统计学意义。 2 结果 SurvivinmRNA 在正常肾脏组织和肿瘤组织中的表达 46 例 RCCC 患者肿