染色体r显带和fish技术对慢性淋巴细胞白血病诊断的价值课件

染色体R显带和FISH技术 对慢性淋巴细胞白血病诊断的价值 吴蔚 顾健 汪中强 江苏省苏北人民医院 扬州市血液学研究所 前言 l慢性淋巴细胞白血病（CLL）的白血病细胞有丝 分裂活性低下，骨髓细胞培养大多显示正常核 型，因此常规细胞遗传学（CC）R显带分析方 法不能完全准确地反映核型状况。 l本文探讨常规R显带和组合荧光原位杂交（ FISH）技术联合诊断CLL染色体异常的意义。 对象和方法 病例 l10例CLL均为2008年6月至2009年12月在苏北 人民医院血液科就诊的门诊及住院患者，符合 张之南主编的血液病诊断及疗效标准。 l男6例，女4例，年龄5474岁，平均为61岁。 l对照组为5名无恶性肿瘤病史的患者。 方法 l R显带技术核型分析 l 组合FISH （北京金菩嘉医疗科技有限公司） 位点特异性探针：GLP D13S25/GLPATM/ GLPRB1/GLP P53 着丝粒特异性探针：CSP 12 染色体 R显带技术核型分析 在培养基中加入刺激T淋巴细胞生长的 有丝分裂刺激剂PHA培养72h，按常规制 备染色体分析核型。 每例至少分析20个中期分裂相。核型异 常按人类细胞遗传学国际命名体制ISCN （2005） 加以描述。 对照组FISH 分析 l观察200个间期细胞，12号染色体发现3个杂交信号的 间期细胞为+12假阳性细胞;1个或无杂交信号的间期细 胞为del(13q14.3) /del(17p13.1)、 del(11q22.3)/del(13q14) 假阳性细胞。 l以阳性细胞数 平均数+ 3x标准差作为标准。 ldel(13q14.3)、del(17p13.1)、del(11q22.3)、 del(13q14)和+12的阳性标准分别为5%、5.2%、4.2% 、8.2%和3.0%。 结 果 病 例 性 别别年龄龄 （岁岁） 染色体核型 组组合 FISH检测检测 的阳性细细胞（%） D13S25P53ATMRB1+12 1 女 60 46,XX,3p-,17p-3/46,XX,N17 1.0 45.01.21.50 2 女 5846,XX,N201.06.45.72.01.0 3 男 6846,XY,N2063.51.61.01.30.3 4女 6546,XX,N201.61.31.31.60 5 男 5446,XY,N2002.51.32.00 6 女 6648,XX,+3,+183/46,XX,N1733.002.05.60 7 男 5946,XY,N201.072.43.392.21.0 8 男 5546,XY,N2014.110.31.75.42.0 9 男 7446,XY,N2056.01.74.053.31.0 10 男 5546,XY,N201.02.31.31.719.6 10例CLL患者常规R显带分析和组合FISH检测结果 图1 ：45,X,-x,3p-,17p- 图2:可见1个绿色荧光信号, P53基因缺失 病例1患者的染色体核型图及FISH图 本文发现: l异常染色体的总检出率R显带分析为20%(2例)，而组合 FISH为80%(8例)。 l例1 R显带核型分析为3P-和17P-，同时FISH发现P53 基因缺失，与R显带17号染色体短臂完全缺失相吻合。 l8例R显带分析为正常核型中，FISH则检测出有6例异常 ，其中D13S25缺失3例，P53缺失3例，ATM缺失1例 ，RB1缺失2例，12号染色体三体1例。 结论 FISH技术，应用荧光染料标记探针变性后与 靶DNA杂交，在荧光显微镜下观察杂交信号并 记录结果。因不受中期分裂相的限制，极大提 高了染色体异常检出的敏感性、准确性和可靠 性。 FISH技术应用的优点 扩大可检测的细胞群体，能对非分裂细胞和终末细胞 进行分析，应用位点特异性探针，采用原位杂交技术， 定位至小片段基因，可以检测出R显带不能辨别的较小 片段的异常，尤其CLL患者白血病细胞分裂指数低，应 用FISH可大大提高染色体异常的检出;同时对染色体小 基因片段的异常更敏感、可靠，异常检出率更高。 FISH技术应用的不足 l检出染色体异常取决于能否获得相应的探 针，且一种探针只能检测出一种异常。 l例6中，FISH因未有3P-、+3和+18染色体 异常的相应探针，故未能检测出其异常。 本次研究 l我们同时应用常规R显带和FISH技术进行 分析，以期提高CLL染色体异常的检出率 。 l我们应用组合荧光原位杂交 (组合探针)技 术同时检测多种异常基因，提高了其检出 率，