毕业论文陈新让血清蛋白质标记物在肾母细胞瘤中的临床应用研究课件

1 43例正常人群NK细胞上FcRIIIa 基因多态性分析 屈钰华 黎阳 吴燕峰 方建培 郭海霞 周敦华 黄科 中山大学孙逸仙纪念医院儿科中山大学孙逸仙纪念医院儿科 内容 背景 目的 方法 结果 讨论 结论 背景 肿瘤是严重危害人类生命健康的一类疾病 ，攻克肿瘤一直是我们迫切希望解决的问 题。 肿瘤特异性单克隆抗体出现给肿瘤治疗带 来了新的希望 背景 抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (antibody- dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC) 被证明是单克隆抗体临床治疗肿瘤的重要 机制和手段。 IgG型抗体首先通过抗原结合部位与靶细胞 （肿瘤细胞）结合，再由效应细胞上的 FcR识别其Fc段，介导ADCC作用 背景 FcR分为三类：FcRI (CD64) 、 FcRII(CD32) 以及FcRIII (CD16) 。 FcRIII又分为两类： FcRa是一种跨膜糖 蛋白，表达于单核细胞、吞噬细胞、NK细 胞及选择性T细胞上； FcRb是一种糖肌 醇磷脂蛋白(GPI-锚蛋白)，只表达于中性粒 细胞和IFN诱导的嗜酸性粒细胞上 背景 Ravetch等最先报道在FcRIIIa近膜Ig样区核 苷酸位点559处存在多态性位点。 在核苷酸位点559处核苷酸发生鸟嘌呤(G)一 胸腺嘧啶(T)点突变后，由其转录合成的受 体蛋白内第158位缬氨酸(valine，V)被苯丙 氨酸(phenylalanine，F)所取代。 这导致FcRIIIa有三种基因型：FcRIIIla- 158F/F，FcRIIIa-158V/V及FcRIIIa-158V/F 背景 诸多文献报道FcRIIIa基因多态性与肿瘤病 人预后相关。 于单克隆抗体治疗的肿瘤病人中，FcRIIIa- 158V/V的病人预后较V/F及F/F基因型病人 好。 这可能与其跟治疗性单克隆抗体的Fc段结 合相关，由不同的亲和力导致 治疗性单克 隆抗体介导的ADCC强度不同。 目的 确定FcRIIIa的基因多态性在正常及肿瘤人 群中的分布，以了解人群对肿瘤特异性单 抗可能疗效反应的分布规律。 方法 标本来源 正常健康人群外周血：用含肝素抗凝管 收集健康志愿者外周血，标本量为23ml ，共43份。 方法 技术路线 方法 1.按说明书提取外周血基因组DNA。 2. nest-PCR外侧反应经35个PCR循环(95 45S,64 45S,72 30S)，扩增产物长度248 bp； 内侧反应经35个PCR循环(95 45S,65 45S,72 30S)，扩增产物长度94 bp。 3.Nla内切酶酶切 8ul PCR产物于37酶切 过夜。酶切产物经15PAGE电泳分离，银 染显色。 结果 结果 结果 讨论 本研究检测结果显示在健康人群中FcRIIIa 的基因多态性以V/F型最多，而V/V型次之， F/F型最少，这与国内文献报道（47例健康 者中V/F型38例，V/V型7例，F/F型2例）一 致。 本研究中未检测出F/F型，可能与样本量较 少有关。 讨论 但本研究与国外报道的基因型分布（以V/F 型及F/F型较多，而V/V型最少）有差异， 这可能与地域及种族差异，遗传环境等因 素有关。 讨论 FcRIIIa三种基因型的NK细胞与IgG的亲和 力顺序为V/VV/FF/F。 治疗性单克隆抗体介导的不同基因型的NK 细胞的ADCC强度不同，对肿瘤细胞的杀伤 存在差异，从而取得不同的预后。 我国以FcRIIIa-158F/F分布最少，可推测出 大部分人对单抗治疗的预后较好。