珠海讲稿ppt课件

全自动化学发光免疫分析仪 的临床应用 中山二院生殖中心 张清学 Date 待测物质浓度与检测手段 临床化学分析 10-1210-910-610-310-0 pg/mLng/mLg/mLmg/mL g/L 免疫分析 Therapeutic Drugs Thyroid Hormone Fertility Hormone Allergy Cancer Markers Infectious Disease Vitamins Serum Proteins Date 放射免疫面临的挑战 l l 半衰期短，限制了药盒使用寿命半衰期短，限制了药盒使用寿命 l l 由于标记物的不断变化，带来药盒批间、批内较大的差异，由于标记物的不断变化，带来药盒批间、批内较大的差异， 标准曲线无法保存备用标准曲线无法保存备用 l l 反应时间过长反应时间过长( (数小时至过夜数小时至过夜) ) l l 结果测量依靠时间累计，至少每一样品一分钟结果测量依靠时间累计，至少每一样品一分钟 其主要的缺陷是： 理论和实践证明其分析的限度是理论和实践证明其分析的限度是1010-7 -7分子 分子/ /mLmL或或1010-12 -12 g/ g/mLmL，要再提高要再提高 有困难有困难 以上原因都造成放射免疫无法进行自动化分析 不同系统的理论灵敏度 l l 比色法：比色法：1010-10 -10 mole mole l l RIARIA：1010-11 -11 to 10 to 10-12 -12 mole mole l l 荧光法：荧光法：1010-12 -12 mole mole l l 发光法：发光法：1010-15 -15 mole mole BIOTROL DIAGNOSTIC 自动标记免疫分析的优点 l l 消除手工操作的误差消除手工操作的误差 l l 灵敏度高，稳定性好灵敏度高，稳定性好 l l 速度快、当天报告速度快、当天报告 l l 特殊项目的测定特殊项目的测定 3 3rd-TSHrd-TSH、intact-HCGintact-HCG、F-PSAF-PSA l l 实现短时间反馈实现短时间反馈( (Short Turn-around Time)Short Turn-around Time) l l 提高临床诊断效率和质量，有效降低总医疗费用提高临床诊断效率和质量，有效降低总医疗费用 全自动化学发光免疫分析 全自动化 检测灵敏度高 自动比率稀释测量 快速诊断 最快可15分钟内发报告（HCG、CTNI） 可做急诊检查 Date O- OO OCH3 OPO3Na2 OO OCH3 O- O OCH3* 发光 Alkaline Phosphatase 发光底物在碱性磷酸酶作用下磷酸酯基发生水解，脱去一 个磷酸基而得到一个中等稳定的中间体AMPD-，(半衰期 230分钟)。此中间体分子内电子转移裂解为一分子的金 刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当 其回到基态时产生470nm的光，并可持续几十分钟。 AMPPD反应原理-Access非直接免疫化学发光 Date Date Access 检测项目 l甲状腺 T3, T4, Free T3, Free T4, TU, hTSH, Tg, Tg Aby l贫血 Folate, Vitamin B12, Ferritin l最齐全的性激素 hCG, hFSH, hLH, Prolactin, AFP-ONTD, Progesterone, Estradiol, Unconjugated Estriol, Testosterone Date l心肌标志物 AccuTnI, CKMB, Myoglobin, Digoxin l肿瘤标志物 PSA, Free PSA, AFP, CEA CA153，*CA125，*CA199 l专项 IgE, Theophylline, Cortisol, Insulin, hGH Access 检测项目 Date l骨代谢 Ostase l感染性疾病 Chlamydia, Rubella IgG, Toxo IgG, Toxo IgM OUS - Rubella IgM l产前筛查 uE3, hCG, AFP Access 检测项目 Date l血液病毒 HBV lHBsAg, HBsAg Confirmatory, HBsAb, HBcAb, HBc IgM HAV HAV Ab, HAV IgM HCV - BioRad only HIV - BioRad only lHIV 1/2, HIV 1/2 Ab Access 检测项目 Date 女性生殖系统激素 Progesterone (P) Estrodiol(E2) Luteinizing hormone ( LH) Follicle Stimulating hormone ( FSH) Human Chorionic Gonadotropin ( HCG) Prolactin ( PRL) Testosterone ( T) UE3(非偶联雌三醇) Date 月经周期中激素、卵泡、子宫内膜和基础体温（BBT）的同步变化 Pituitary FSH LH Date 女性激素测定的抽血时间 l主要根据测定目的： l了解基础内分泌水平-在卵泡早期，月经第1- 5天； l了解有无排卵、黄体功能-黄体中期（排卵后 第7-8天，规则月经的第21天）； lPRL-有昼夜节律性变化，采血宜安排在晨7- 8时，避开排卵期，要空腹； lPCOS-在卵泡早期。 Date 旧单位与新单位的转换 现在国际单位（U）浓度用o，过 去用 ： 20pg/ml x3.67（转换系数） =70mol/L ： ngml x3.18 （转换系数） =nmol/L Date 雌二醇Estradiol（E2）测定 女性雌激素几乎全由卵巢产生，包括雌二醇（E2 ）、雌酮（E1）、及微量雌三醇（E3）；青春期开 始分泌增高，成年发育成熟后卵巢呈周期性变化， 雌激素分泌量随周期变化而改变，测定不同时期的 雌二醇含量，可判断卵巢功能及性发育异常疾病。 男性雌激素则来自肾上腺皮质。 Date 雌二醇（Estradiol，E2） 成年女性95%的E2来自卵泡（颗粒细胞）或黄 体，少量来自肾上腺。妊娠期E2来自胎盘。男性E2 含量较低，主要由睾丸间质细胞合成分泌。 E2主要是促使女性生殖器，卵泡和第二性征的 发育，参于性腺轴的反馈调节，有轻度的潴水、钠 、氮作用，及降脂作用。 Date Pg/mL男 女 卵泡中期排卵前黄体中期绝经期 均值316428614225 范围20752411462534802732088 正常值 雌二醇（雌二醇（EstradiolEstradiol，E E 2 2 ） Date 非偶联雌三醇 （Unconjugated estriol uE3） l非妊娠期E3是E2、E1在肝脏内的代谢产物，弱生理作用 。 妊娠期前两个月由黄体分泌的E2代谢而成。三个月后胎 盘形成，90%来自胎儿，10%来自母体。 作用： 抑制E2受体，抑制卵泡发育， 降低子宫对催产素的敏感性。 Date Date 非偶联雌三醇 （Unconjugated estriol uE3） （1）正常值 孕26-28周： 4.1g/l 孕28-32周： 7.4 8.5g/l 孕32-36周： 9.3 13.7g/l 孕36-38周： 16.7 23.7 g/l 孕38-40周： 17.7 25.4g/l 40孕周以上： 19.3 30.0g/l Date E2走势： l排卵前达高峰，排卵后三天降 至低值。走势排卵前三天开始明显升高， 排卵前天达ng/L，天达 ng/L，高峰前ng/L， 峰值后排卵。 Date 临床意义 濃度高低反應濾泡的成熟度 每一成熟濾泡=200300ng/L，估计成熟 卵泡数目 在排卵前達到最高值,之後濃度即下降 ng/L，为性腺功能启动的标志,- -性早熟 也可用以評估婦女是否已臨停经，绝經期 E2 35周，uE3IU/L和7.5IU/L提示 青春期启动-性早熟； l滤泡早期，10-15 IU/提示卵巢功能减退，超排可 能反应不良； l真性性早熟的标志之一：青春期前儿童LH和FSH同时 升高，提示真性性早熟； l假性性早熟：FSH和LH不高，E、T及其代谢产物升高 ，提示假性性早熟。 Date 临床意义 l鉴别中枢性或卵巢性闭经的诊断。 IU/L为高促性腺激素（卵巢性）闭 经； 和均IU/L，为低促性腺激素（ 下丘脑或垂体性）闭经； l血S比值2或LH25 IU/L为 多囊卵巢综合征（COS）诊断指标之一。 Date 内分泌刺激实验 卵巢兴奋试验： hMG75-150IU，QDx4-6天后,E升高,有卵泡发育 ，提示病变在垂体或以上水平，否则，病变在卵巢。 垂体兴奋试验： 典型方法：LHRH 100g,iv, 15、30、60、 120分后，LH升高2-4倍，说明垂体功能正常，提示病变 在下丘脑；否则，病变在垂体； Combes方法：LHRH 100g，iv drip, 30-45 分后升高、60-90分后下降、2-4小时又升高，病变在下 丘脑引起垂体惰性；无反应，说明垂体有缺陷， Date 泌乳素Prolactin ( PRL) l是一種單鏈的Peptide hormone； l作用：刺激乳腺發育及分泌乳汁； l临床意义 ：判断病人是否有高泌乳素血症 (hyperprolactinaemia 25g/L)，女性不排卵 和男性阳痿 Date 临床意义 （1）PRL30ng/ml，表示PRL增高 l在100ng/ml以下时，性质不定，多种原因均 可致PRL增高，也可为早期轻症泌乳素瘤。 lPRL100ng/ml约50%为PRL瘤 lPRL200ng/ml应高度提示PRL瘤。 （2）原发性甲减、下丘脑肿瘤、颅咽管瘤、闭 经泌乳综合征。 （3）某些药物如氯丙嗪、抗组织胺药、甲基多 巴、利血平等PRL值增加，但多 60 IU/,腹部超声 未见子宫内妊娠囊提示宫外孕. Date 临床意义 l48小时-hCG上升不到65%，妊娠预后不良（宫外 孕或者妊娠流产） l异位妊娠：受精卵在宫外着床，95%在输卵管，一般在停 经6周左右后，出现阴道不规则出血，腹痛。检测HCG，其 值低于同期正常妊娠，约为50%，动态测定48小时增长1:1152 电脑算出唐氏症的合 并危险度 怀疑NTD做胎儿 超声波检查 唐氏症儿筛查流程图 待续 Date 唐氏症危险度1/270唐氏症危险度100U/mL，（卵巢上皮癌除期外，大多大于400U/mL ） Date 下丘脑 正中隆起 N分泌细胞 TRH 垂体门脉 垂体前叶 TSH 甲状腺 FT3 FT4 BT3 BT4 TBG ( - ) ( - ) ( - ) ( - )( - ) 甲状腺轴激素的调节 结合激素和游离激素 1.结合激素(BT3，BT4)无生物活性 1) 不参加反馈 2) 不能进入细胞核(激素基因模式) 3） 结合激素是储存形式，避免从肾脏排出 2. 游离激素(FT3， FT4 )有生物活性 1) 反映机体功能 2) FT3 占 TT3： 0.3% FT4 占 TT4： 0.03% 3) FT3、FT4不受TBG浓度影响 TSH正常值 (IU/mL) FT3，FT4正常值 ( pmol/L ) 甲状腺功能诊断新战略 (Caldwell 1985) 甲 状 腺 功 能 检 查 TSH (U-S) 降低 升高 正常 降低 降低 正常 升高 正常 FT3 FT4 FT3 正常 升高 甲亢 亚临床甲亢 继发甲减 正常 亚临床甲减 原发甲减 Caldwell的新战略是目前国际公认的诊断甲状腺功能最简单、 合理的方法，这一战略的特点是： （1）用三项测定（US-TSH、FT3、FT4）取代以往所有 繁多的测定和计算。 （2）超敏TSH是甲功的筛查试验，其值正常，即可排 除甲状腺功能异常。 （3）发现了甲状腺激素正常而促激素异常的亚临床病 例（亚甲亢/亚甲减）。 （4）区分了典型甲亢和T3型甲亢。 （5）区分了原发性甲低（甲状腺自身疾病）和继发性 甲低（垂体/下丘脑疾病）。 Date “甲状腺功能测定”是指其功能状态的客观 分析，并非病因或疾病诊断。 疾病诊断尚需选用TGAb、TMAb(TPOAb)、 TRAb、TG及形态学检查。 Date 甲状腺激素 l（一）总甲状腺素（TT4）测定 1、原理：甲状腺素（Thyroxine, T4），血液 中的T4 100%由甲状腺分泌而来，能很好地反 应甲状腺功能状态。正常情况下，血液中 77%TT4与甲状腺结合球蛋白（TBG）结合， 10%与甲状腺结合前蛋白（TBPA）结合，其 余约10%与白蛋白结合而仅约0.03-0.04%呈游 离状态。由于T4与TBG亲合力较高，所以血中 T4的水平最易受到TBG的影响。 正常参考值：78.38-157.4 nmol/L。 Date 临床意义 增高： （1）甲亢症，TT4明显增高，但轻型甲亢 及甲亢早期升高幅度不如TT3。T3型甲亢 TT4仍正常。 （2）高TBG血症，凡引起TBG增高的因 素均可使TT4增高，包括妊娠、新生儿、服 用性激素或避孕药、葡萄胎、淋巴肉瘤、 血卟啉病及遗传性TBG增多症等。 Date 临床意义 l （3）家族性异常白蛋白血症，为常染色体显 性遗传性疾病，血中有异常白蛋白分子。 （4）药物：某些药物可使TT4升高如过度使 用甲状腺激素、碘剂、乙胺碘呋酮、造影剂、 受体阻滞剂、奋乃静、5-氟脲嘧啶、苯丙胺、 海洛因等。 （5）其他：甲状腺激素抵抗综合征、亚急性 甲状腺炎、TSH分泌性肿瘤。 Date 降 低 l （1）甲减症，TT4和TT3均下降，但TT4下降更明显 ，轻型甲减可仅有TT4降低，诊断甲减时TT4比TT3敏感 ，如同时测S-TSH，对诊断更有价值。 （2）缺碘性甲状腺肿，TT4下降或正常低限，TT3正 常，TSH升高。 （3）低TBG血症，TBG降低可使TT4下降，引起 TBG下降的原因有使用糖皮质激素、雄激素、生长激素 、肾病综合征，某些严重肝病肝功衰竭、禁食、高热及 遗传性TBG减少症。 （4）药物如二硝基酚、保泰松、硫氰酸盐及肝素可 竞争性结合TBG，故无用时也可使TT4下降，此外，苯 妥因钠、水杨酸、安妥明等均可抑制TBG的合成。 （5）其他：TSH不应症，甲状腺形成异常等。 Date 总三碘甲状腺原氨酸（TT3）测定 l1、原理：血中T3仅有约15-20%系由甲状腺 直接分泌而来，80%以上由T4在外周组织脱 碘而来。T3是甲状腺激素的主要活性部分。 血液中99.5%的T3与TBG结合，但不与 TBPA结合。T3与TBG的亲合力明显低于T4 ，所以血液中T3的浓度也明显低于T4，仅为 T4的1-2%。T4浓度轻度升高即可代替T3与 TBG的结合。 l正常参考值：1.34-2.73nmol/L Date 临床意义 l增高： l（1）甲亢症，甲亢时T3增高比T4增高明 显， 对轻型甲亢、甲亢初期和复发性甲 亢的诊断更有意义。T3型甲亢仅TT3明显 增高而TT4则否。 l （2）高TBG血症：同TT4一样，TT3也受 TBG影响，随TBG升高而升高。 l（3）地方性缺碘甲状腺肿，亚急性甲状 腺炎、白蛋白增多，服用外源性T3等。 Date 降低 l（1）原发性及继发性甲减症TT3及TT4均可降 低，但TT4比TT3灵敏，轻症甲减时TT3也不一 定降低而以TT4更敏感。 l（2）寒冷刺激及伴低T3综合征的非甲状腺病如 肝硬化、糖尿病、重度消耗症等，TT3可以明 显下降。 l（3）65岁以上老人TT3浓度可随增龄而下降， 房纤的甲亢病人血TT3可降至正常范围。 l（4）先天性TBG减少症。 Date （三）游离T3（FT3）和游离T4（FT4）测定 1、原理：血循环中甲状腺激素绝大部 分与蛋白质结合，只有极少部分呈游离 状态（即0.3%的T3和0.04%的T4），只 有游离甲状腺激素才能进入细胞内发挥 作用，所以FT3和FT4的水平才能真正 反映甲状腺的功能状态。由于FT3、 FT4水平不受TBG改变的影响，所以直 接测定FT3或FT4时对了解甲状腺功能 比TT3或TT4更有意义。 l正常参考值：FT3 3.67-10.43nmol/L l FT4 7.3-21.1pmol/L Date 临床意义 l增高： l（1）甲亢患者FT3、FT4增高均较TT3、TT4敏 感，是诊断甲亢的敏感指标。妊娠期甲亢FT4不 受TBG影响，故可诊断妊娠甲亢。如TT3、TT4 正常，而FT3或FT4增高是甲亢初发或复发的早 期表现。T3型甲亢者TT3正常而FT3、FT4增高。 l（2）低T3综合征患者体内5脱碘酶受抑制，T4 在外周脱碘障碍可使FT4增高。 l（3）药物如乙胺碘呋酮和肝素等可使FT4增高 。 Date 降 低： l（1）甲减时FT3、FT4均降低，但轻度甲减和甲减 初期以FT4降低为主。 l（2）低T3综合征，FT3下降。 l（3）药物影响。抗甲状腺药物可使FT3、FT4均降 低，但二者并不平行，以FT4下降较早且明显，其下 降水平与临床表现相一致。苯妥因钠、多巴胺和糖 皮质激素也可使FT3、 FT4降低。 l判断甲亢、甲减疗效，甲亢治疗后FT3、FT4恢复较 TT3、TT4早，TT3和TT4呈分离现象，TT3和FT3 浓度可偏高，而TT4和FT4浓度可偏低，TT3和FT3 对甲亢疗效判断意义较大，而FT4对甲减疗效判断意 义较大。 Date 超敏促甲状腺素（S-TSH）测定 1、原理：TSH由垂体前叶分泌，可促进甲状 腺激素合成与释放，受下丘脑促甲状腺游素 释放激素（TRH）的激活，受血中T3及T4浓 度的负反馈调节，是判断下丘脑垂体甲 状腺轴功能的一项重要指标。TSH是反映甲 状腺功能十分敏感的指标，轻度甲状腺功能 异常，T3、T4尚在统计学正常范围之内时， TSH即出现改变。 l正常参考值 0.34-5.60uiu/ml Date 临床意义 l增高： l见于原发性甲减（甲状腺本身病变所致者） 亚临床甲减，异位性TSH综合征，垂体分泌 TSH瘤，下丘脑性甲亢、地方性或单纯性甲 状腺肿。 l降 低： l见于垂体病变所致继发性甲减、自身免疫性 甲亢（Graves病）、亚临床甲亢，用大量皮 质醇后。 Date 注： l原发性甲减时S-TSH可敏感地升高，甲状腺性甲亢 时也敏感地降低，而常规法TSH测定只能反映升高 不能反映降低，正常范围为0-9mu/L，降低与正常 之间有重叠，这是由于常规法检测TSH敏感性和特 异性都较差，常需再作TRH兴奋试验来进一步判 断，而S-TSH可将正常与降低明确区别开来。 l采用甲状腺激素（TT3、TT4或FT3、FT4）作为 TRH兴奋试验的指标，用来检查垂体分泌TSH及 PRL的储备功能，并判断下丘脑垂体部位所在的垂 体前叶功能减退。 l 利用上述甲状腺激素的测定结果再辅以抗甲状腺 抗体（TRAb、TMAb、TGAb）的检测，可以对 更多的甲状腺疾病作出更精确的诊断。 Date 恶性肿瘤实验室早诊断 肝癌发病率 年新发病 年死亡人数 全球 1000万 600万 中国 200万 145万 Date AFP阳性后查找肝癌 肿瘤直径 五年生存率 5 cm 31.25% 10cm 3.7% Date （一）甲胎蛋白AFP测定的 临床意义： AFP至今仍为肝癌诊断中最特异的肿瘤标志物，我国肝 癌病人约60-70%AFP高于正常。凡AFP500ng/ml持续1 个月或AFP200ng/ml持续2个月而无肝病活动证据且可 排除妊娠和生殖腺胚胎癌者即可诊断肝癌。急性肝炎如 AFP增高，预后不佳。但肝硬化伴活动性病变及少数消 化道癌如胃、结肠、胰腺癌及转移性肝癌亦可有低浓度 AFP，利用AFP还可能产前诊断先天性开放性神经管缺 损、死胎、睾丸肿瘤、脑肿痛等并能随访观察病情。 l正常参考值： 0-9ng/ml Date （二）癌胚抗原（CEA）测定： l临床意义：在大肠癌组织中CEA含量明确高于正常组织， 亦可发现在胃癌40-60%、胰腺癌64%、肺癌52-77%，乳 腺癌30-50%，甲状腺癌60%，膀胱癌50%等。常作良、恶 性胸、腹水的鉴别诊断