广州中医药大学第一附属医院袁浩股骨头坏死专题课件

中西医结合治疗股骨头坏死 临床研究 2000年获国家科技进步二等奖 广州中医药大学第一附属医院 全国中医髋关节疾病医疗中心 股骨头坏死 世界骨科领域三大难题之一 临床常见，发病率呈上升趋势 好发于20-50岁的中青年 早期诊断与治疗十分困难 股 骨 头 坏 死 创伤、激素、酒精中毒为主要原因 非创伤性发病机制十分复杂，尚未完 全清楚 血管内凝血、脂肪栓塞、骨内高压、细 胞毒性、骨质疏松等多种途径-股骨头血 循环障碍-坏死发生 股骨头坏死的危害 致残率高，严重影响 生活质量 患者丧失劳动能力 给家庭和社会带来严 重经济和精神负担 股骨头坏死发展过程 正常 缺血坏死 塌陷 骨性关节炎 缺血与塌陷是治疗的难点与关键 发病后相当时间缺少症状 早期疼痛可远离髋关节 原有疾病干扰 X线片难以显示早期坏死 早期诊断困难的原因 长期服用激素者应定期作MRI或ECT检 查，直至停药后至少一年以上 一侧股骨头坏死者，另一侧应高度怀疑 ，并作相应检查 早期诊断方法 对成年男性发生髋、膝疼痛，如 有酗酒史，必须排除股骨头坏死， 及时作X线及MRI或ECT检查 早期诊断方法 对股骨颈骨折愈合后患者，有下列表现者，应 警惕发生股骨头坏死 恢复正常行走后再次疼痛 X线片显示股骨头密度持续增高 内固定术后3月ECT检查股骨头呈现“冷”区 早期诊断方法 病史（创伤、激素、酒精等） 临床症状：髋或膝痛 体征：腹股沟附近压痛 髋活动受限（旋转、外展） 肌肉萎缩 跛行或行走困难 临床诊断 最常用、最简单、最直观、最廉价 的诊断手段 能大致反映坏死范围、部位；塌陷 范围、程度；推测软骨状态；判断 增生程度、头臼关系 X线诊断 动态X线片能反映坏死转归趋势 鉴别诊断不可缺少 确定手术方案主要依据、评价疗 效的重要手段 摄片要求：清晰、双髋正、蛙位 缺点：早期坏死敏感性差 X线诊断 Ficat 分期 A B 袁氏 分期 A B 袁氏分期与Ficat分期 Ficat分期 袁氏 分期 A B C 袁氏分期与Ficat分期 Ficat分期 袁氏 分期 A B C 袁氏分期与Ficat分期 股骨头坏死范围 局部坏死1/3 大部坏死2/3 全头坏死2/3 股骨头坏死部位 内侧部坏死 顶中部坏死 外侧部坏死 中央部坏死 股骨头坏死的病理分型 邹某，女，双侧激素性ANFH，郁阻型 徐某，男，左侧酒精性ANFH，大块缺血型 梁某，男，双侧ANFH，混合型(左侧) 张某，男性，左侧增生硬化型，酒精性ANFH 是Ficat四期分法的改进 比较全面真实地反映了股骨头坏死 病理演变的过程 更切合保留股骨头治疗方法的选择 袁氏分期分型优点 股 骨 头 坏 死 诊 断 病史、症状、体征、X片 X片阴性，而临床怀疑或一侧确诊为非创 伤性坏死，另一侧阴性时，作MRI检查， 有金属物存在时，作 ECT检查 鉴 别 诊 断 股骨头坏死误诊为 腰椎间盘突出症 风湿病 肿瘤 膝关节疾病 鉴 别 诊 断 色素沉着绒毛结节性滑膜炎 强直性脊柱炎 髋关节结核 髋关节骨性关节炎 类风湿性关节炎 肿瘤 髋臼发育不良 误诊为股骨头坏死 1、中青年好发，病情发展 较快，可能塌陷 骨性 关节炎 1、老年好发，病情发展 缓慢，极少塌陷 2、塌陷发生前关节间隙正常 3、致残率高 2、早期可出现关节间隙变窄 3、多无严重致残 鉴 别 诊 断 股骨头 坏死 男 30岁 双股骨头坏死 女 67岁 双髋原发性 骨性关节炎 股 骨 头 坏 死 治 疗 保留自身股骨头是治疗发展趋势 绝大多数患者应避免首选人工关节置换 理由： n多数为中青年患者，目前的人工关节寿命 不能满足患者的要求 n非创伤性坏死较其它髋关节病效果差 5年的失败率10%50%(美 .Mont) 中青年患者面临多次更换手术(日.Saito) 价格昂贵 中晚期西医治疗方法 人工关节置换术 股 骨 头 坏 死 治 疗 对所有患者一律采用保守治疗，使许多 患 者失去获得更好疗效的机会 把疼痛暂时缓解，功能改善作为疗效主 要依据 对中晚期患者，轻率采用人工关节置换 术 存在的误区 何某 男 51岁 保守治疗前 治疗23月后 治疗54月治疗40月 中 医 中 药 治 疗 股 骨 头 坏 死 亚临床期 坏死发生在非负重区或为中央型 患者有严重内科疾病，不具备手术条件者 手术后配合应用 前景广阔，难度很大，目前的适应症 股 骨 头 坏 死 清除负重区死骨；重建股骨头血运；防止 或纠正塌陷 对晚期患者清除骨赘、改善功能；修补破 裂软骨，头臼成形减轻骨性关节炎 手术治疗目的 中医中药 保留股骨头的手术 我们的治疗方法 中西医结合保留自身股骨头 血脉瘀滞，不通则痛 疼痛 瘀阻枢节 关节功能障碍 筋骨失养 跛行 股骨头坏死 主要病机血瘀气滞 袁氏活骨系列中药 主要功用 活血化瘀 消肿止痛 补肾健骨 药理研究表明：具有促进血管生长，促进 成骨；另有提高机体免疫力和轻度的抗菌 作用。 该方已通过国家保密品种审批，专家一致 认为其对股骨头坏死有“独特疗效” 保留股骨头的手术 多条血管束分离 骨瓣移植 同时解决缺血与塌陷两个关键问题 提供丰富血运 防止或纠正塌陷 多条血管束植入示意图 血管束植入股骨头后的生 长情况 切下的股骨头 植入的血管束在股 血管束周围 骨头内的生长情况 的软骨成骨 中医中药 治疗大法活血化瘀 早期患者 避免手术治疗 中晚期患者 提高手术疗效 早期（、） 或不具备手术 中药 条件的中、晚期 中、晚期（-） 手术 + 中药 中西医结合治疗方法 疗效评价标准 按照作者参与制订的全国骨坏 死学组标准 临床症状 60分 X 线 40分 病例治疗情况 袁氏活骨系列治疗效果 (总有效率91.6%, 总优良率61.6%) 分期 例数 随访例数 有效率 优良率 1852 1246 93.6% 63.2% 1356 912 90.4% 60.8% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 袁氏活骨系列配合手术治疗效果 (近期随访 1-5年) 分期 例数 随访例数 有效率 优良率 0 0 0 0 0 0 0 0 1556 1033 94.8% 86.7% 984 661 98.7% 89.1% 409 227 96.1% 85.9% 223 186 98.9% 87.5% 中西医结合方法 人工关节 优 良 率 年数 韩素云 女 33岁 双侧股骨头坏死（激素性 左B、右A） 94年1月28日行左侧中药+手术治疗（ 多条血管束植入术加缝匠肌骨瓣），右侧单 纯中药治疗 典 型 病 例 一侧手术+服药，一侧单纯服药 治疗前 左侧全头坏死，严重塌陷，负重区可见 大块死骨；右侧大部坏死，轻度塌陷。 治疗后1年 左侧股骨头明显修复，塌陷基本纠正 ；右侧坏死区缩小，股骨头保持球形，无塌陷。 治疗后3年：左侧股骨头进一步修复，密度趋向均 匀，头形态良好；右侧坏死区范围进一步缩小。 治疗后4年 双侧股骨头基本修复，外形良 好，关节间隙基本正常。 右侧服药前 CT显示股骨头内大块囊 区存在 服药4个月 囊区内出现新骨 服药1年 囊区内成骨现象明显 服药31个月 囊区已基本被新生骨代替 术前功能 术后功能 治疗后得到江泽民总书记的亲切接见 谭某某 女 52岁 右侧股骨颈骨折后股骨头坏死（B ） 1988年5月24日行多条血管束植入术 ， 术后配合中药治疗 治疗前 右侧股骨头大部坏死，明 显呈锥形塌陷 。 治疗后7.5年 右侧股骨头修复，密度 均匀，外形良好，关节间隙基本正常 治疗后9.5年 右侧髋关节基本正常 治疗后功能恢复正常 ，每天爬12层楼 ，一天三次 李佩君 女 36岁 因过敏性皮炎，应用激素治疗致双侧股骨 头坏死，左侧IIIB，右侧IIIB，均为全头坏死。 1991年10月左侧行多条血管束植入术+服药。 右侧单纯服药6月，死 骨吸收，新骨形成， 头趋园。 左侧术后6月，头增园， 密度增高，死骨吸收， 顶部软骨成骨明显。 治疗14个月恢复工作，22个月参加大型 舞会获得一等奖。 李惠玲 女 44岁 双侧股骨头坏死，右侧在某医院做人工股 骨头置换，术后仍疼痛，丧失工作能力，用轮椅行走。 治疗后2年恢复工作，服 药5.5年完全恢复正常。 91年10月右侧作血管束植 入+中药，服药12月。 李惠玲治疗5.5年 功能完全恢复正 常。 彭某，男，31岁， 因 小脑炎用激素治疗引 发双侧股骨头坏死。 左侧手术前 91年10月左侧行多条血管束植 入+中药治疗10.5个月。头园， 骨密度增高，提示血运丰富。 右侧IIIB，单纯服药治疗10.5月 ，骨密度增高，坏死区明显缩小 ，头园，关节间隙清晰 右侧服药24月 ，头园，密度 进一步增高， 达到临床基本 治愈。 左侧术后+服药 24月，显示头 顶部尚有部分 软骨成骨。 左侧术后+中 药5年达到完 全治愈。由 于血管束提 供了丰富的 血运，促进 了股骨头的 恢复，所以 塑形较右侧 为快。 右侧服药5年 ，头塑形， 骨小梁进一 步增多。 治疗2.5年功能恢复正常。 孙新亮 男 38岁 因酒精致双侧股骨头坏死，右侧IIIA ，全头坏死（大块缺血型），左侧IIB，大部坏死。 右侧行血管束植入+中药治疗1.5年。头园 ，死骨吸收，软骨成骨。左侧单纯中药治 疗，死骨吸收，新骨形成，恢复工作。 治疗后3年，右侧头新骨形成，头呈饱满 ，尚有部分软骨成骨。左侧死骨吸收，成 骨明显，达到基本治愈。 治疗后5年头进一步塑形，达到临床治愈。 单纯服药治疗 洪凤仙 男 58岁 双侧IIA 服药4月后自觉症状明显好转，疼痛减轻，双髋 自感轻松。X线显示骨密度增加，死骨吸收。 服药7月进一步好转。 服药22月头密度增高，骨小梁增多，关 节间隙清晰，无明显疼痛，行动自如。 服药34月自觉行动进一步改善，骨小梁增多， 密度增高，头进一步饱满，关节间隙清晰。 洪凤仙功能相 马惠珍 女 34岁 患SLE用激素治疗 致左侧股骨头坏死IIIB。 服药2月死骨吸收，裂解，透明带 增加，部分骨密度增高，头趋园。 服药5月密度增高，趋均匀，头顶部软骨成 骨，头园。疼痛明显减轻，功能改善。 服药16月骨小梁形成，骨密度增高，趋均匀。 服药2.5年，成骨明显。 服药5年10个月，达到临床治愈。 张琴 女 36岁 因SLE激素致双侧坏死，IIIA。服药治疗 。 服药9月，坏死区缩小，骨密度增高。 张琴功能相 赵玉慧 女 19岁 脑炎用激素治疗致双侧 股骨头坏死，左侧IIIB，右侧IIIA。 服药3月，右侧骨密度明显增高， 均匀，左侧死骨吸收明显。 服药19月，骨密度明显增高。 赵玉慧功能相 何谓鸿 男 51岁 双侧激素性股骨头全头坏死， 左侧IIIB，右侧IIB。 服5个月，死骨明显吸收，裂解。 服10个月，死骨吸收，新骨形成。 服1 年11个月，进一步成骨明显。 服40个月，死骨完全吸收，成骨明显， 部分软骨成骨，达到临床基本治愈。 王强 男 40岁，酒精致双侧股骨头全头 坏死，左侧IIIB，右侧IIIA。 王强服药2个月，死骨吸收，成骨明显。 服5个月，成骨非常明显，头园，关节间隙正常。 服9个月，进一步新骨形成和塑形。 吕固然之妻 女 70岁 右侧股骨头坏死VI期，合 并骨性关节炎，关节间隙消失，疼痛剧烈。 服药3个月，死骨吸收，新骨形成，关节间 隙出现，疼痛减轻明显。 来信告知：未服药之前，除行走明显跛行外，严重的是不分日夜 酸、刺痛难忍，借助于炎痛喜康。自服该药一瓶后，人感舒服，5 瓶后感到轻微的疼痛，8瓶后患腿膝盖下疼痛消除，停用炎痛喜康 。 服药3个月，患者来信： 黄碧玉 女 52岁 肾移植后，用激素抗排斥致双 侧股骨头坏死，左侧在印尼做全髋置换仍不能 减轻疼痛，右侧IIIA。来髋病中心求医。 由于体质太差，无法做血管束植入，改用服药治 疗，3个月后，疼痛明显消失，离开轮椅，双拐行 走。死骨吸收。 服7个月，死骨明显吸收，骨密度增高，头顶部 软骨成骨，活动行走轻便。 服药16个月，成骨明显，头顶部软骨钙化，死骨完 全吸收，行动方便，赴美旅游。 服药3年，股骨头进一步成骨，塑形，头顶部软 骨继续钙化。 黄碧玉功能相 朱殷雷 男 20岁 因脑炎激素治疗致双侧 全头坏死，IIIA。 服药4个月，坏死区明显缩小，死骨吸收，成骨 明显，疼痛消失。 服药7个月，死骨继续吸收，软骨成骨明显。 服13个月，死骨完全吸收，进一步成骨塑形， 头呈园，密度趋均匀。 服32个月，头继续成骨和塑形，右顶部尚有小 量软骨成骨，19个月恢复工作。 朱殷雷功能相 丁传友 男 71岁，右侧股骨颈骨折2年， 全头出现坏死，疼痛难忍。 蛙位片 服药3个月，疼痛消失，X片显示死骨吸收，成 骨明显，骨密度增高，头呈园形。 服药6个月，继续成骨和塑形，骨密度 进一步增高。 服药10个月，骨密度进一步增高和塑 形，出现骨小梁，从颈部上升。 服药16个月，死骨完全吸收，成骨明显 ，骨小梁形成，基本达到临床治愈。 服药2年4个月，进一步成骨和塑形， 去拐行走。 丁传友服药3年功能相 王炉中 男 42岁，酒精致双侧股骨头全头坏 死，左侧IIIA，右侧IIIB。 服药3个月，右侧死骨吸收，新骨形成明显， 坏死范围缩小，左侧死骨吸收，成骨明显， 显示膜内成骨。 服药6个月，双侧股骨头成骨明显，头趋园 形，均匀。 服药9个月，骨密度进一步增高，均 匀，头塑形。 服药11个月，双头进一步成骨，骨密度明显增 高，头塑形，增园，左侧达到临床基本治愈， 去拐行走。 服药22个月，右侧坏死区缩小，形成中央 坏死型，周缘密度增高，股骨头支撑力增 强，达到临床基本治愈。 治疗中应注意的问题 1. 疼痛：发生、发展过程，对策 2. 预防头塌陷，及防止二次塌陷 3. 预防术后半脱位： 纠正骨盆的倾斜 髋臼唇不要全部切除 收紧关节囊，缝合密实 髋臼加盖 包容不佳；外侧壁低 ；年龄大，臀中肌力量弱者 外展牵引 4.骨性关节炎的预防：凡是头已塌陷者 均可能出现，故术后应维持牵引，加大 关节间隙，扶双拐行走时间宜尽量长， 后期维持皮牵引，并服用袁氏系列中药 进行有效的预防和治疗。 功能康复：为安全渡过术后的疤痕期和 挛缩期，应注意术后康复。术后3个月 、6个月复查，若功能不满意，宜进行 手法推拿或麻醉下推拿 治愈后不要过度使用患侧，增强自我保 护意识，劳逸结合 小 结（1） 股骨头坏死是常见的危害严重的髋关节 疑难病 早期准确诊断是治疗关键，袁氏分期分 型方法进一步揭示了股骨头坏死的病理 演变规律，提高了该病的诊断水平 保留自身股骨头是治疗发展方向 中医药治疗前景广阔，有必要深入研究 首先应用中医传统的“去瘀生新”理论，指 导股骨头坏死的治疗，显示了中医对于疑难 病整体治疗的优势 以重建股骨头血运为核心的手术，能使多数 中青年中晚期患者避免或推迟人工关节置换 小 结 (2) 小 结（3） 手术治疗能否成功，与下列因素有关 ： 诊断是否精确 手术方法选择是否符合原则 手术技术是否能达到手术目的 术后康复是否有针对性 病人能否很好合作 将中医药的整体治疗与针对性的局部 手术治疗有机结合，采用中西医结合 治疗股骨头坏死的方法，使绝大多数 股骨头坏死患者都能恢复自身健康髋 关节，从事正常工作与生活 小 结（4） 2000年6月，应美国Virginia大学邀请 进行学术交流，得到王国照教授和崔建军 教授的热烈欢迎，相互交流了股骨头坏死 的治疗经验，“中西结合治疗股骨头坏死” 受到王国照教授的高度评价。 国 外 交 流 访问王国照教授 参观崔建军教授的实验研究室 参观美国Hopkins大学医学院关节中心 左：Moint教授。 右：Hungford教授 2001年5月7日王国照教授来我校进行学术交流 （左起第四：王国照教授） 王国照教授受聘仪式 （左起第二：王国照教授） John Paul Jones,Jr.,M.D.致袁浩教授的 信件节译 Jones教授是ARCO(国际骨微循环学会)的前任主席 尊敬的袁浩教授： 希望您已收到我先前写给您的信。仅在5天 前我才收到您寄来的令人感兴趣的CD光盘 ，不管如何，您在骨坏死方面进行了 大量卓有成效的研究工作，这给我留下了 深深的印象。 多年来，我一直在寻找具有预防或/和治 疗早期骨坏死的药物，但至今尚未找到 也许您现在已经发现了这种药物。若是，祝贺 您!该袁氏中草药极可能是一个重大的科学贡献， 特别是对于激素性和酒精性股骨头坏死的非手术 治疗(和预防)， 且可能对激素和酒精诱导的骨质疏松，以及因老 龄和肥胖引起的原发性骨性关节炎也有效。 目前，显然我们尚不知道该草药的活性成份。但 是，基于五例激素性股骨头坏死的临床与放射学 改变，以及您的实验研究，我推测该中药至少具 有如下2个或更多的治疗效应。 其一，该药可能防止高脂血症、骨内脂肪栓塞、 骨内脂质通过骨小管进入骨陷窝引起的脂肪聚集 ，和进而导致的骨细胞坏死。 John Paul Jones,Jr.,M.D. 其二，基于你们的研究，显示该药能改 善骨内微循环，可能通过促进血管生成 来起作用(在骨形成之前)。该药还能刺激 成骨细胞活性，放射学上显示能增加新 骨形成。 中西医结合治疗股骨头坏死系列研究荣获 2000年度国家科技进步二等奖。该课题先 后还获得国家中医药管理局科技进步二等 奖（1999年）、广东省中医药科技进步一 等奖（1999年）、广州中医药大学科技进 步一等奖（1998年）、广东省科技进步二 等奖（1990年）、广东省高校卫生系统重 大科技成果一等奖（1990年）等奖励。 获 奖 情 况 2000年度国家科技进步奖励大会在人民大会 堂举行，授奖者获得国家领导人的亲切接见 。图为胡锦涛副主席与袁浩教授的亲切握手 图为朱鎔基总理与袁浩教授亲切握手 生脉成骨胶囊治疗 激素性股骨头坏死的机理研究 股骨头坏死的治疗目的 改善或重建股骨头内血液循环 促进骨再生、加速骨修复，恢复股骨头 的组织结构 防止或纠正股骨头塌陷、以及继发性骨 性关节炎 生脉成骨胶囊的开发研究简况 60年代，用于治疗开放骨折感染创面发现消炎生肌，促 进骨生长作用 80年代早期，配合术后应用于股骨头坏死。目前应用 3000余例，疗效满意 80年代后期，单独用于股骨头坏死。目前治疗3000余例 ，总有效率达91.2%,优良率61.6% 今年1月进入期临床，更名为“通络壮骨胶囊” 生脉成骨胶囊的作用 气滞血瘀病机关键、贯穿始终 活血化瘀基本治则 生脉成骨胶囊 功效：活血化瘀、补肾健骨、 消肿止痛、扶正固本 研究目的 生脉成骨 胶囊 促进血管再生 改善血液循环 促进骨再生 加速骨修复 通络 壮骨 治疗股骨头坏死 动物：成年新西兰兔56只，省卫生厅提供 药物：内毒素、甲基强的松龙 生脉成骨胶囊 造模：每只兔注射内毒素50g/kg共2次 、 注射甲基强的松龙20mg/kg共3次， 2周后处死2只兔确认模型成立 实验方法 分组：正常组、模型组、生脉成骨胶囊 组（中药组），每组18只 观察：中药组以5ml /kg/日药液（含生 药0.42g/ml）灌胃，另两组用生 理盐水灌胃，三组动物分别于用 药后4 周、8周、12周各处死6只 行相关检查 检 测 指 标 光镜：空骨陷窝率、成骨细胞计数、软 骨下血窦计数、TBV、MTW 电镜：成骨细胞 、骨细胞、胶原纤维 原位杂交：型胶原mRNA，VEGF mRNA 骨组织生化代谢：第8周软骨下骨胶原、 钙、磷 血清放免检测：BGP、IL-6、 一、光镜观察结果 空骨陷窝率（%）比较 组别 4周 8周 12周 正常组 123 133 133 模型组 405* 5212* 589* 中药组 235* 194 154 注：各组与正常组相比，* P0.05；* P0.01；与模 型组相比， P0.05； P0.01(以下同) 模型组各时相点的空骨陷窝率较正常组升高。中药 组各时相点的则较模型组降低（P0.01），但第4周 时空骨陷窝率高于正常组（P0.01） 成骨细胞计数（个）比较 组别 4w 8w 12w 正常组 272 282 283 模型组 193* 182* 163* 中药组 254 313 365 骨小梁相对体积(TBV,%)比较 组别 4周 8周 12周 正常组 503 513 536 模型组 464 412* 426* 中药组 494 524 545 骨小梁平均宽度（MTW，m）比较 组别 4周 8周 12周 正常组 163.3314.75 161.5013.77 162.5013.77 模型组 150.677.47 144.838.54* 143.339.90* 中药组 160.8313.17 165.1714.05 179.8318.08 软骨下血窦计数(个)比较 组别 4w 8w 12w 正常组 93 102 103 模型组 62* 63* 53* 中药组 92 103 115 软 骨 下 血 窦 模型组 正常组 中药组 髓腔内血窦 正常组 模型组第12周 中药组第12周 骨 小 梁 正常组 模型组第4周 中药组第4周 骨 小 梁 正常组 模型组第12周 中药组第12周 骨 细 胞 正常组 模型组第4周 中药组第4周 成 骨 细 胞 正常组 模型组第12周 中药组第12周 二、超微结构观察 正常组接近成熟的骨细胞 模型组：细胞核开始固缩、核/浆 比例大， 呈现退变相 骨 细 胞 骨 细 胞 模型组 模型组 中药组 正常组成骨细胞，粗面 内质网发达，多聚核糖 体丰富，线粒体多。 成 骨 细 胞 模型组成骨细胞，粗面内 质网扩张、脱颗粒，线粒 体肿胀，有呈气球样变， 胞核皱缩。 中药组成骨细胞，粗 面内质网发达，多聚 核糖体丰富，线粒体 多。 胶 原 纤 维 模型组成骨细胞，细胞器结构差 ，胞核有皱缩，核异染色质增多 ；基原质内胶纤维排列紊乱 中药组的成骨细胞边可见周期 性胶原纤维，明 暗相间，排列 有序。 三、原位杂交观察 型胶原探针序列 针对型胶原1链的寡核苷酸探针序列： 5CACAG ATCAC GTCAT CGCAC AACAC CTTGC CGTTG3 5AGCTT CACCG GGACG ACCAG CTTCA CCAGG AGATC3 针对型胶原2链的寡核苷酸探针序列： 5TCACT CCTTC TACAT TATAT TCAAA CTGGC TGCCA3 探针采用地高辛标记，凝胶过滤备用。 血管内皮细胞生长因子(VEGF) 探针序列 (1) 5，CAGCC TGGGA CCACT TGGCA TGGTG GAGGT AGAGC3， (2) 5，CACAT CTGCA AGTAC GTTCG TTTAA CTCAA GCTGC3， (3) 5，ATATT AACAT CACGT CTTTG TCTCT AGAGC AGTTT3， 原位杂交步骤 固定 脱钙 包埋 切片 切片脱蜡 消化 预杂交 杂交 封闭 加抗、抗 DAB显染 封片 观察 型胶原mRNA在股骨头内表达 的结果 阴性对照 阴性对照 软骨细胞未见 阳性表达 正常组 模型组第4周 中药组第4周 成 骨 细 胞 成 骨 细 胞 模型组第12周 中药组第12周 骨 髓 正常组 模型组第12周 中药组第12周 12周时VEGFmRNA在成骨细胞的表达结果 正常组 模型组 中药组 阳性表达 弱阳性表达 阳性表达 12周时VEGFmRNA在血管内皮细胞的表 达结果 正常组 模型组 中药组 中药组 阳性表达 弱阳性表达 阳性表达 阳性表达 四、骨组织生化代谢 第8周时股骨头内生化指标比较(g/mg) 组 别 胶原量 钙总量 磷总量 正常组 206.0616.03 197.3611.20 89.336.63 模型组 168.6815.74* 183.4610.98* 82.185.82* 中药组 208.3216.80 198.3514.81 94.878.07 五、血清放射免疫学检测 TXB2测定结果（单位pg/ml） 组别 4周 8周 12周 正常组 186.4648.21 185.9430.08 182.0636.37 模型组 634.4369.36 * 852.6261.67 * 960.8372.23 * 中药组 467.8636.15 * 318.6943.82 196.4128.14 “瘀去”指标结果 6-K-PGF1测定结果（单位pg/ml） 组别 4周 8周 12周 正常组 58.5613.21 54.9412.18 56.0615.37 模型组 38.439.36 * 24.927.68 * 11.833.23 * 中药组 52.8612.15 56.6910.32 61.219.54 “瘀去”指标结果 T/K比值的变化 组别 4周 8周 12周 正常组 3.181.21 3.380.98 3.250.87 模型组 16.514.36 * 34.219.68 * 81.220.23 * 中药组 8.851.15 * 5.621.32 3.211.54 “瘀去”指标结果 血清骨钙素(ng/ml)比较 组别 4 周 8周 12周 正常组 9.860.85 10.590.85 10.012.25 模型组 9.341.50 7.163.15* 7.142.98* 中药组 10.291.89 9.922.03 11.700.86 血清IL-6(pg/ml)比较 组别 4 周 8周 12周 正常组 82.3318.34 84.3121.77 90.7322.25 模型组 263.3761.13* 219.9453.84* 171.0574.91 中药组 79.8525.12 64.4420.05 92.9468.22 讨 论 动物模型的制备 单纯用激素：脂质代谢紊乱、脂肪栓塞、骨细 胞脂肪变性 激素加马血清：血管炎、血管破坏、骨内和髓 内出血 激素加内毒素：血液高凝、低纤溶，IC “血瘀”：部分脏器有瘀血、出血、血栓形成， T/K失平衡，高粘滞血症等 本模型的特点（一） 内毒素加激素导致了动物“瘀”的情况 v病理：动物股骨头局部发现有纤维蛋白血栓的形成 ，血管破坏，表现为血管内皮结构、平滑肌纤维排 列紊乱。 v原位杂交：血管内皮细胞中的VEGFmRNA的表达 明显降低。 v血液学：TXB2水平增高，6-keto-PGF1水平降低 ，T/K比值增高。 “血瘀”状态下，出现了成骨功能低下的表现 v病理：股骨头髓腔内生血细胞减少，大的脂肪空泡 ，骨小梁结构紊乱，稀疏、碎裂，骨空骨陷窝率增 高，成骨细胞数量较少，呈长梭形。 v原位杂交：成骨细胞型胶原mRNA的表达降低 v血液学：BGP水平逐渐下降 骨吸收、骨丢失增加：骨小梁变细；骨吸收陷窝； 骨有机质(胶原)和无机质(钙、磷)丢失；血清IL-6 水平升高 本模型的特点（二） 骨形成减少 骨丢失增加 骨修复差 加重骨坏死 局部血液高凝 小血管损害 血栓形成血液供应差 生脉成骨胶囊能够改善股骨头坏死的瘀血状态 v病理：髓腔内生血细胞丰富，软骨下血管丰富，小血 管壁清晰正常，无明显血栓形成。 v原位杂交：血管周围、成骨细胞均有持续的高阳性表 达的VEGF， v 血液学：TXB2水平随时间而逐渐下降， v 6-keto-PGF1逐渐增高的趋势，T/K比值降低， 生脉成骨胶囊的作用特点（一） 随着瘀血状态的改善，生脉成骨胶囊应用 组显示出了较强的骨修复能力 v病理：骨小梁结构整齐，排列规则；空骨陷窝率 较低；骨小梁周沿的成骨细胞数量丰富 ，功能活 跃， 细胞器丰富，多呈成骨相 v原位杂交：成骨细胞型胶原mRNA阳性表达数 量较多 v血液学：BGP水平随时间逐渐升高，IL-6水平随 时间逐渐降低 生脉成骨胶囊的作用特点（二） 本研究证实了生脉成骨胶囊能促进 骨修复和血管新生，对于