金黄色葡萄球菌分子流行病学研究课件

金黄色葡萄球菌 分子流行病学研究 研究背景 耐药菌的传播是不分国界的！ 分子流行病学研究方法 l以电泳为基础的方法：随机扩增DNA多态性 （RAPD），重复序列PCR（rep-PCR）， 脉冲场凝胶电泳 （PFGE），限制性酶谱（ REA），扩增片段长度多态性(AFLP) l方法简单方便，成本较低 l但一般仅适用于对同一批标本的检测结果进 行比较，不能与其他实验室的结果进行比较 ，不能了解不同地区流行的菌株之间是否有 亲缘关系 分子流行病学研究方法 l以测序为基础的方法：多位点序列分型（MLST） ，选择7个管家基因分别用PCR扩增，然后进行测 序,比较多态位点的不同，得到不同的等位基因谱 ，再由专业软件进行分析和分型。 l由于每一个管家基因都有很多等位基因，由7个管 家基因排列的等位基因谱可达到21010个，所以 不同菌株间具有相同的等位基因谱的可能性极小 ，也就是说具有相同等位基因谱的细菌被认为是 来源于同一个祖先的细菌。 MLST分型 lMLST分型的主要优势是监测结果精确 ，分辨力强，并且已经建立了国际数 据库网站，各实 验室的研究资料可以在网上进行比对 ，使不同时间、不同实验室的检测结 果间有可比性，适用于大规模和长期 的流行病学监测。 MLST与SA遗传背景分析 MLST与SCCmec分型 lEnright等将MLST分型与SCCmec分型结合 对MRSA的遗传学特征和耐药基因盒特征进 行综合描述，用该方法对来自20个国家的 359株MRSA进行研究,发现主要有5个基因 型流行。 SCCmec 分型与结构 我们的研究内容 lICU病区MRSA病原学监测 l分子流行病学研究 随机引物扩增DNA（RAPD）：比较分离菌之间的 同源性关系 多位点序列分型（MLST）：比较本地流行株与 国际流行株之间的关系 研究结果 ICU病区MRSA监测结果 标标本来源 及数量 阳性 数 阳性率 （） 阳性个 体数 个体带带菌 率(%) *人群 （28例，79份 ） 2430.381657.14 *环环境（52）713.46/ 空气（15）00.00/ ICU病区分离的MRSA 菌株RAPD- PCR扩增电泳图谱 结果分析 79份医、患人员标本中，有24份分离出MRSA， 检出率为30.4%。 52份环境标本中有7份检出MRSA（13.5%） 15份空气标本中未检出MRSA。 lICU病区MRSA监测结果表明：MRSA在人群中 的定植远远高于环境；人是MRSA的主要储 菌库。 结果分析 RAPD分型结果显示，MRSA主要分为3个型别 第一型：20株细菌，来自10名医护人员，2名 患者和3份环境标本 第二型：4株细菌，1株来自医师， 3株来自源 于同一患者 第三型：7株细菌，3株来自患者， 3株来源于 环境 结果分析 l研究表明：MRSA存在医、患和物品之间相 互传播的现象；也可通过手鼻途径自身 接种、并定植，使MRSA长期存在，难以清 除 l接触传播是主要传播途径，其重要性远远 大于空气传播。 预防MRSA传播手卫生 英国预防MRSA传播的新措施 SCCmec分型多重PCR扩增 产物电泳图谱 lM为DL100DNAmarker，I，II，III，IV，V分别为NCTC10042（SCCmecI型）、N315 （SCCmecII型）、85/2080（SCCmecIII型）、JCSC4744（SCCmecIV型）、HS663 （SCCmec型），1为SCCmecIII型，2为SCCmecIV型。 141株MRSA SCCmec分型 与抗生素耐药性比较 结果分析 l 141株MRSA SCCmec分型结果显示，型 102株（占72.3），型34株（24.1%） ，型5株（2.8）；细菌耐药率分析显 示 型 型 型。 MRSA多重耐药表型 与SCCmec基因盒的结构相关 。 门诊患者MSSA菌株MLST分型 菌株ST型CC株数 构成比 (%) MSSA- OP （10株） 121121660.00 8888330.00 2215 110.00 住院患者MSSA菌株MLST分型 菌株ST型CC株数构成比(%) MSSA-IP （10株） 8888 2 20.00 77 2 20.00 5959 1 10.00 1881 1 10.00 398398 1 10.00 66 1 10.00 2020 1 10.00 3030 1 10.00 住院患者MRSA菌株MLST分型 菌株ST型SCCmecCC株数构成比(%) MRSA-IP （62株） 239827 43.55 5II519 30.65 1IV12 3.22 88II882 3.22 398II3982 3.22 307*2 3.22 3991212 3.22 6II61 1.61 15II151 1.61 25IV251 1.61 182I1821 1.61 1226IV251 1.61 1296I81 1.61 住院患者h-VRSA菌株MLST分型 菌株ST型SCCmecCC株数构成比(%) h-VRSA （13株） 2398753.85 8888215.38 2418215.38 5II517.69 12112117.69 结果分析 l门诊患者感染的MSSA主要基因型为ST121 （60）；而住院患者感染的MSSA基因 型复杂多样，没有优势基因型流行，说明 在医院环境中MSSA不能长期存活，不易造 成传播和流行，多表现为散发感染。 讨论与小结 l住院患者感染的MRSA，以ST239型（属国 际流行株 Brazilian/ Hungarian株）和ST5 型（属国际流行株NewYork/Japan株） 两个 国际流行株为主，分别占43.5%和30.6%。 l说明住院患者感染的MRSA不是由于MSSA 在治疗过程中产生的耐药，而是由于MRSA 流行株的克隆传播，是由医院感染所引起的 结果分析 l13株h-VRSA菌株，有7株属于ST239型（ 53.8%）。与MRSA流行株基因型相同，表 明两者有共同的来源。 h-VRSA可能是 MRSA在万古霉素选择性压力下产生的。 结果分析 l本研究在国内最早使用