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文档简介

1 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 【目的】 掌握DNA琼脂糖凝胶电泳检测的原理，熟悉其 方法 。 2 琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型 凝胶。凝胶。 D-D-半乳糖半乳糖 3,6-3,6-脱水脱水-L-L-半半 乳糖乳糖 【原理】 3 4 PCR产物混合荧光染料（SYBR Green I)以及指示剂（溴酚蓝）后，以琼脂糖 凝胶为支持介质，在电泳冲液中电泳， 根据DNA片段的大小、构型分离成不同区 带，在紫外光下观察。 【原理】 5 q SYBR Green 能结合到双链DNA的小沟部位 q SYBR Green只有和双链DNA结合后才发荧光 q 琼脂糖凝胶不吸收紫外光 q 紫外灯下，结合有SYBR Green的PCR产生发出 荧光 SYBR Green 6 SG SG SGSGSG SGSG 53 53 Emission Excitation q SYBR Green结合的数量与DNA含量成正比 定量 7 q DNA的片段大小与相对迁移率相关 分子量 8 【试剂与器材】 1.PCR产物、荧光染料（SYBR Green) 2.样品缓冲液（含溴酚蓝） 2.微量加样器 3.电泳仪、电泳槽 4.琼脂糖 5.TBE电泳缓冲液（pH8.0） 9 【操作】 制胶 适量琼 脂糖 适量电 泳缓冲 液 琼脂糖 胶溶液 10 1 2 34 40mL 点样孔 朝负极 + 去封口 胶布 11 制样 制胶 点样 3 倒上电泳 缓冲液， 使其没过 点样孔。 12 内容体积（L） PCR产物8 SYBR Green染料1 溴酚蓝样品缓冲液1 取0.2mL离心管，按下表制备电泳样品 轻轻混匀。 13 制样 制胶 点样 样品（样品（1010L L） 3 倒上缓冲 液，使其 没过点样 孔。 小心！ 点样孔不要 戳破 14 制样 制胶 点样 电泳 80100V， 40min, 负极向正极。 结束后，取出琼脂糖凝胶，置于 紫外观察箱中观察。 绘制电泳结果，进行分析和讨论。 15 (1) 制胶时，要注意梳子的低部要距制胶板1mm以上。 (2) 凝胶冷却时要水平放置，完全凝固后才能使用。 (3) 点样时要小心，不要戳穿点样孔。 (4) 点加样品时，
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