离心机的原理和使用.ppt

离心机的原理和使用 n实验目的：了解离心机的原理和使用方法 n实验原理：借助离心机旋转所产生的离心 力，使不同大小和不同密度的物质分离 n用途：细胞的收集、细胞碎片和沉淀的分 离等常用离心分离 n超速离心技术已成为分离、纯化、鉴别和 各种生物大分子的重要手段之一 Date1 Date2 一 离心机的种类与用途 n速度： n常速（低速） 30000r/min n转子： n固定角转子（Eixed-Angle-Rotor） n主要用于分离沉降速度有明显差异的颗粒样品 n甩平转子（Siwing-Bucket-Rotor） n主要用于样品作密度梯度离心 Date3 常速离心机 n1 常速离心机 n8000r/min, R.C.F1*104g n用途：分离细胞、细胞碎片、培养基残 渣及粗结晶等较大颗粒 Date4 高速离心机 n2高速离心机 n1*104g2.5*104 r/min ，R.C.F 1*104g 105g n用途：分离各种沉淀物、细胞碎片及较 大的细胞器等 n高速冷冻离心机 Date5 超速离心机 n2.5*104g8*104 r/min ，R.C.F 5*105g或更高 n结构：离心管帽、冷冻装置和温控系统、真空 系统、安全保护系统、制动系统、指示仪表等 。 n按用途分： n制备用超速离心机：分离纯化生物大分子、细 胞器和病毒等 n分析用超速离心机：测定样品纯度（根据紫外 吸收率或折光率等判断）、沉降系数、相对分 子量 Date6 n沉降系数S：单位离心力作用下粒子的 沉降速度，以Svedberg表示，简称S。 1S=1*10-13s Date7 n沉降系数S与分子量M有对应关系， 测出离心机转速、离心时间和粒子移动 距离，可求出S，再得到M Date8 二 离心方法的选择 n对于常速和高速离心机，由于所分离的 颗粒大小和密度相差较大，只要选择好 离心速度和时间，就能达到分离效果。 n超速离心的离心方法：差速离心、密度 梯度离心和等密度梯度离心 Date9 n1 差速离心 n采用不同的离心速度和离心时间，使沉 降速度不同的颗粒分批分离的方法。主 要用于分离大小和密度差异较大的颗粒 。 Date10 2 密度梯度离心 n样品在密度梯度介质中进行离心，使沉 降系数比较接近的物质得以分离的一种 区带分离方法。 n密度梯度系统：梯度介质有足够大的溶 解度，不与分离组分反应，不会引起分 离组分的凝集、变性或失活。 n常用介质：蔗糖、甘油等。 n样品铺在密度梯度溶液表面，离心后形 成若干条界面清楚的不连续区带。 Date11 Date12 3 等密度离心 n当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心 介质的密度梯度范围内时，不同浮力密 度的物质颗粒在离心力作用下一直移动 到与各自浮力密度相等的位置（等密度 点），形成区带。 n等密度离心常用的介质：铯盐，如CsCl ，Cs2SO4，CsBr Date13 三 离心条件的确定 n离心力（转速） n离心时间 n温度 npH值 n真空 Date14 思考题 n1 名词解释 离心分离 相对离心力 沉降系数 n2 按离心机转速分，离心机有哪些种