实验二培养基的制备.ppt

实验二实验二 培养基的制备培养基的制备 一、目的要求一、目的要求 1. 1. 掌握培养基制备的原则；掌握培养基制备的原则； 2. 2. 掌握培养基的制备方法。掌握培养基的制备方法。 二、实验原理二、实验原理 1 1、培养基的概念？、培养基的概念？ 培养基是指由人工方法配合而成的营养基质，专培养基是指由人工方法配合而成的营养基质，专 供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的 混合营养物制品。混合营养物制品。 2 2、必须具备五个条件、必须具备五个条件: : 含有细菌生长所需的物质含有细菌生长所需的物质： 如：水分、养分（氮源、碳源、矿物质）等如：水分、养分（氮源、碳源、矿物质）等 适宜的酸碱性：适宜的酸碱性： 多数为多数为pH7.2-7.6pH7.2-7.6，有的为，有的为pH5.6-6.8 pH5.6-6.8 。 不含抑制细菌生长的物质；不含抑制细菌生长的物质； 均质透明均质透明： 便于观察细菌生长性状和引起培养基的变化，便于观察细菌生长性状和引起培养基的变化， 严格灭菌，保证无菌。严格灭菌，保证无菌。 配好立即高压灭菌 ，并保证新鲜。 3 3、培养基的分类、培养基的分类 根据对培养基组成物质的根据对培养基组成物质的化学成分化学成分是否完全了解来区分：是否完全了解来区分： 天然培养基天然培养基 合成培养基合成培养基 半合成培养基。半合成培养基。 根据培养基的根据培养基的物理状态物理状态来区分：来区分： 固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基 半固体培养基半固体培养基 根据培养基的根据培养基的用途用途来区分：来区分： 增菌培养基增菌培养基 选择培养基选择培养基 鉴别培养基鉴别培养基 中国农业出版社 陈天寿主编 一些物质在培养基中的应用原理 1.细菌生长的基础营养物质： N源：蛋白胨（peptone）、酵母浸出物 牛肉浸膏 C源 无机盐类 水 一些物质在培养基中的应用原理 2.具有抑菌作用的物质 抑制G-菌的：葡萄糖、亚硫酸铋和煌绿 抑制G+菌的：结晶紫、胆盐 抑制肠道非致病菌的：胆盐 一些物质在培养基中的应用原理 3.具有生化反应作用的 硫羟代乙酸钠（硫乙醇酸钠）、半胱氨酸 、葡萄糖、肝块、肉渣、还原铁等还原剂 生化反应 一些物质在培养基中的应用原理 4.具有缓冲作用的 磷酸盐 碳酸盐 一些物质在培养基中的应用原理 5.具有PH指示作用的 中性红指示液 变色范围 pH6.88.0（红黄） 孔雀绿指示液 变色范围 pH0.02.0（黄绿）；11.013.5( 绿无色) 石蕊指示液 变色范围 pH4.58.0（红蓝） 甲基红指示液 变色范围 pH4.26.3（红黄） 刚果红指示液 变色范围 pH3.05.0（蓝红） 亮绿指示液 变色范围 pH0.02.6（黄绿） 结晶紫指示液 pH值0.15（黄）0.32（绿），pH值1.0（绿）1.5（蓝 ），pH值2.0（蓝）3.0（紫）。 溴甲酚紫指示液变色范围 pH5.26.8（黄紫） 溴麝香草酚蓝指示液 变色范围 pH6.07.6（黄蓝） 一些物质在培养基中的应用原理 6.其它 硫酸亚铁 色氨酸 脲酶 培养特性 （一）体外培养的要求 营养、温度、PH、气体、培养时间 （二）培养性状 1.液体培养基 需氧菌：菌膜 兼性厌氧菌：均匀浑浊 厌氧菌：沉淀 2.固体培养基 菌落特点:大小、颜色、边缘、湿润程度 3.色素 脂溶性：菌体有颜色（如金黄色葡萄球菌） 水溶性：菌体和培养基都有颜色（如绿脓杆菌） 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 同一种培养基的配方在不同同一种培养基的配方在不同 文献中常存在某些差别。文献中常存在某些差别。 因此应尽量收集有关资料，因此应尽量收集有关资料， 加以比较核对，再依据自己的加以比较核对，再依据自己的 使用目的，加以选用，记录其使用目的，加以选用，记录其 来源。来源。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 每次制备培养基均应有记录每次制备培养基均应有记录: : 包括名称、配方及其来源、包括名称、配方及其来源、pHpH 值、消毒的温度和时间、制备值、消毒的温度和时间、制备 的日期和制备者等，以防发生的日期和制备者等，以防发生 混乱。混乱。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 必须精确称取，并注意防止必须精确称取，并注意防止 错乱。错乱。 可将配方置于傍侧，每称好可将配方置于傍侧，每称好 一种成分即在配方上做出记号一种成分即在配方上做出记号, , 最后还应进行一次检查。最后还应进行一次检查。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 可先用温水加热并随时可先用温水加热并随时 搅动、以防焦化。待大部搅动、以防焦化。待大部 分固体成分溶化后，再用分固体成分溶化后，再用 较小火力使所有成分完全较小火力使所有成分完全 溶化，直至煮沸。溶化，直至煮沸。 在加热溶化过程中，因在加热溶化过程中，因 蒸发而丢失的水分，最后蒸发而丢失的水分，最后 必须加以补足。必须加以补足。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 经加热煮沸，培养基各成分经加热煮沸，培养基各成分 完全溶解完全溶解, , 待冷却接近室温时待冷却接近室温时, , 应进行应进行pHpH的调正。的调正。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 培养基必须均质透明。培养基必须均质透明。 通常采用过滤以达到此项要通常采用过滤以达到此项要 求。一般液体培养基可用滤纸求。一般液体培养基可用滤纸 过滤法。过滤法。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 应按使用的目的和要求，分应按使用的目的和要求，分 装于适当容器内。装于适当容器内。 分装量一般超过容器装盛量分装量一般超过容器装盛量 的的2/32/3。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 一般采用高压蒸汽灭菌方法一般采用高压蒸汽灭菌方法 （121121，15min15min）。）。 某些畏热成分，如糖类、血某些畏热成分，如糖类、血 清等，一般以过滤方法除菌，清等，一般以过滤方法除菌， 以后再用无菌操作技术、定量以后再用无菌操作技术、定量 加于培养基。加于培养基。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存 培养基的保存 灭菌以后，应仔细检查，如灭菌以后，应仔细检查，如 发现破裂、水分浸入、色泽异发现破裂、水分浸入、色泽异 常等、均应挑出弃去。常等、均应挑出弃去。 将全部培养基放入将全部培养基放入37 37 恒恒 温箱培养过夜，如发现有细菌温箱培养过夜，如发现有细菌 生长，即弃去。生长，即弃去。 用已知菌株接种部分培养基用已知菌株接种部分培养基, , 培养培养2448h2448h。如无菌生长或生。如无菌生长或生 长不良，应追查原因并重复接长不良，应追查原因并重复接 种一次，如结果仍同前，则该种一次，如结果仍同前，则该 批培养基即应弃去。批培养基即应弃去。 4 4、培养基制备的基本方法、培养基制备的基本方法 培养基配方的选定培养基配方的选定 培养基的制备记录培养基的制备记录 培养基成分的称取培养基成分的称取 培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化 培养基培养基pHpH的调正的调正 培养基的过滤培养基的过滤 培养基的分装培养基的分装 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的质量测试培养基的质量测试 培养基的保存培养基的保存 应存放于冷暗处，最好放于应存放于冷暗处，最好放于 普通冰箱内；普通冰箱内； 平板培养基不宜超过平板培养基不宜超过3 3天；天； 必须附有明显标签。必须附有明显标签。 三、实验材料三、实验材料 1. 1. 量杯（量杯（1000mL1000mL和和500mL500mL各各1 1个）、玻璃棒、漏斗、三角个）、玻璃棒、漏斗、三角 瓶、试管、玻璃瓶（瓶、试管、玻璃瓶（500mL500mL）等；）等； 2. 2. pHpH试纸、纱布、脱脂棉、滤纸、包装纸、扎线等；试纸、纱布、脱脂棉、滤纸、包装纸、扎线等； 3. 3. 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂、葡萄糖牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂、葡萄糖 、牛肉渣、蜡块、蒸馏水、牛肉渣、蜡块、蒸馏水、l mo1/L NaOHl mo1/L NaOH溶液和溶液和1 1 mo1/L HClmo1/L HCl溶液等。溶液等。 四、实验内容四、实验内容 1. 1. 普通肉汤的制备普通肉汤的制备： （1 1）常用配方）常用配方: : 牛肉浸膏牛肉浸膏 3-5g3-5g 蛋白胨蛋白胨 10g10g 氯化钠氯化钠 5g5g 磷酸氢二钾磷酸氢二钾 0.5g0.5g 蒸馏水蒸馏水1000m1000mL L 四、实验内容四、实验内容 1. 1. 普通肉汤的制备普通肉汤的制备： （2 2）配制方法）配制方法: : 取水取水600700mL600700mL，加热；，加热； 按照配方称取各物品加入水中，按照配方称取各物品加入水中，边加热边边加热边 搅拌，快沸时注意不要溢出，搅拌，快沸时注意不要溢出，沸腾后停止沸腾后停止 加热加热；冷却至室温；冷却至室温； 用用pHpH试纸试纸测定测定pHpH并调至并调至7.2-7.7.2-7.6 6。 若若pHpH 7.67.6，则用则用0.1mo10.1mo1/ /L HClL HCl调低调低; ; 若若pHpH 7.67.6，则用则用0.1mo10.1mo1/ /L HClL HCl调低调低; ; 若若pHpH 7.27.2，则用则用0.1mol/L NaOH0.1m