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实验二 革兰氏染色及细菌特 殊结构观察 2006.03.08 一、实验目的 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 了解细菌的特殊形态结构： 芽孢、荚膜、鞭毛 二、实验原理 单染色法：只能观察微生物的大小、形状 、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以 及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法 、鞭毛染色法等。 革兰氏染色 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 G肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂 质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质，增加了细胞的通透性，使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙 黄复染呈红色。 G细胞壁结构致密，用脱色剂处理后， 肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细 菌仍保留初染时的紫色。 细菌的特殊形态结构 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各 种极端环境。 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 鞭毛：运动，菌落形态。 三、实验材料 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌（24h培养物） 革兰氏染色液一套 四、实验步骤 革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢观察 观看鞭毛、荚膜的示范片 绘图、写实验报告 革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸 铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲 去残水，而后用其覆盖涂面1分 钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约1520秒，后立即 用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染35 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 枯草杆菌芽孢的观察 细菌鞭毛的观察 细菌荚膜的观察 荚膜 五、实验结果 记录所观察到的三种菌革兰氏染色结果 的差别 记录枯草杆菌Gram染色结果，并判断是 阳性还是阴性 六、问题与讨论 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意 哪些操作？哪一步是关键？Why? 内容回顾 原理 细菌革兰氏染色的原理 方法 细菌革兰氏染色的方法 简要介绍了芽孢染色、荚膜染
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