实验四人类X小体、Y小体检测.ppt

实验四 人类X小体、Y小体检测 一、实验目的 v掌握X小体、Y小体的玻片标片制作方法。 v绘制X小体、Y小体形态特征及所在部位。 v鉴定个体的性别，为进一步研究人类染色体畸 变与疾病的关系提供基础方法、为遗传病临床 诊断提供参考。 二、实验原理 v1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌猫体细胞核 膜边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常 女性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中都有一个这样的小体 ，继而有人进一步发现所有哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。 一般认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的， 故而将其称为X小体，X染色质，又称为Barr小体。Barr小体出现在哺 乳动物雌性个体细胞的细胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在失 活状态所致，Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性 染色体与其他异染色质（heterochromatin）一样，在DNA复制时总落 后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染色 体数减1。故可以根据X小体的有无、数目来鉴定胎儿的性别和性别畸形 。 vY小体是人类男性体细胞中Y染色体长臂末端显现的明亮小体，是由萤 光染料染色后显示的萤光所致。因而称为Y小体或Y染色质。亦可根据Y 小体的有无、数目鉴定胎儿的性别和性别畸形。 三、实验材料 v口腔粘膜（男、女）、发根细胞（女） 四、实验器具和药品 v1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒温水浴锅、载玻片、 盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。 v2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红、盐酸喹吖、 Macllvaine氏缓冲液、石蜡。 1X小体的观察 v取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口 腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在干净 的载玻片上。 v固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定2030min，空气干 燥。 v染色制片:滴加12滴改良品红于室温下染色1020min（勿使干燥），加上盖 片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。 v镜检：低倍镜下计数100个核膜完整，细胞不重叠，无核固缩的细胞；并在高倍 或油镜下观察。 v若使用女性发根细胞，需选用带有毛囊的头发（约2cm长），再加一滴染液后 加上盖玻片，洒精灯上微热，静置5min，后盖一滤纸压片。 五、实验步骤 人口腔X小体 X小体的形状 2. Y小体的观察 v取材固定： v染色制片：制好的涂片放入固定液（1份95%乙醇和1份乙醚 ）固定1530min；95%乙醇处理20min；0.5%二盐酸喹吖 水溶液染色10min，自来水1min，然后加12滴MacIlvaine 氏缓冲液（pH5.48.0），覆以盖片。 v荧光显微镜检查：用低倍镜，再用高倍镜或油镜观察。整个 细胞发出荧光者不计。 六、实验结果 1.X小体： v油镜下可见X小体为一致密 的浓染小体。轮廓清晰，约 1um，常附着于核膜边缘或 靠边内侧，其形态有三角形 、卵形、扁平形等。 v正常女性间期细胞核中X小 体比例约30%50%，男性 中则偶尔可见（2%），且 不典型。 六、实验结果 v2Y小体：荧光显微镜下可见细胞核中有发亮的荧 光小体，直径0.30.5um，正常情况下Y小体的出 现率为2550%，正常女性无，性异常者，如核型 为47，XYY的个体，可见两个Y小体。 七、作业及思考题 v1.统计X小体的频率，画23个典型细胞，示X小体的形 态和所处部位。 v2.计算出现Y小体的细胞频率。 v3.什么是剂量补偿