k222动物细胞融合与单克隆抗体2课时.ppt

动物细胞融合与单克隆抗体 复习回顾： 1、植物体细胞杂交的过程是怎样的？ 2、动物细胞和植物细胞在结构上有何 不同 ？ 一、动物细胞融合： 1、概念：也称 ，是指 或 动物细胞结合形成一 个细胞的过程。形成 的单核细胞称为 。 2、过程：不同 的 两个细胞 细胞 细胞杂交 两个多个 杂交细胞 DNA 杂交 3、原理（与植物原生质体融合比较） 诱导方法： 、 、 。 思考：为什么灭活病毒能够作为诱 导剂？不灭活的是否可以？ 4、意义： 克服了 杂交的不亲和性 。 物理法化学法生物法 远缘 灭活的病毒对细胞没有感染能力 。 动物细胞融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 融合 组培 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 动物细胞A动物细胞B 杂种细胞 5、动物细胞融合与植物体细胞杂 交比较 比较较 项项目 融合 原理 融合 方法 诱导诱导 手段用法 植物 体细细 胞杂杂 交 细细胞膜的 流动动性 去壁后诱诱 导导原生质质 体融合 物理法（离心 、振动动、电电 激）化学法（ 聚乙二醇 获获得杂杂 种植株 动动物 细细胞 融合 细细胞膜的 流动动性 使细细胞分 散后诱导诱导 细细胞融合 上法 + 生 物法 制备备单单 克隆抗 体 二、单克隆抗体 1.传统的抗体由何种细胞产生？ 2.B淋巴细胞作用有何特点？ 3. B淋巴细胞能在体外无限增殖吗？ 4 . 米尔斯坦和科勒的创造性设想是什么 ？ 提 问 ？ 抗体的传统生产方法 从 血 清 中 分 离 抗 体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗 体的特异性差、灵敏度低 。 多 种 效 应 B 细 胞 动 物 体 内 多 种 抗 体 抗 原 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理： 实验过程： 19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验 动物细胞A 动物细胞B 杂种细胞 用动物细胞融合的方法制备单克隆抗体 试一试 聚乙二醇 或灭活的病毒 杂交瘤细胞 细胞培养 提取抗体 效应细胞 肿瘤细胞 注射抗原 效应B细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂 交细胞 选择性培养基 筛选1 抗原-抗 体杂交法 克隆化 单克隆 抗体 筛选2 3.若细胞两两融合后， 有几种融合情况？ 单克隆抗体制备过程 注射抗原 效应B细胞 骨髓瘤细胞 融合 多种杂 交细胞 选择性培养基 筛选1 抗原-抗 体杂交法 克隆化 单克隆 抗体 筛选2 4.第一次筛选出的杂交瘤 细胞为何需进行克隆化培 养和专一抗体检测？ 效应B细胞 B淋巴细胞 注射抗原 骨髓瘤细胞 融合 B-B细胞杂交瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择性培养基 筛选1 多种杂交瘤细胞 符合要求的杂交 瘤细胞 抗原-抗 体杂交法 筛选2克隆化 体外培养小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 杂交瘤细胞特点： 既可以产生特异性抗 体，又可以大量增殖 注意： 对小鼠做何处理？ 细胞融合后，培养液中共有几种细胞？有几 种融合细胞？ 杂交瘤细胞的特点：既能大量 ，又 能产生 。 思考： 产生抗体的杂交瘤细胞如何筛选出来的 ？ 注射特定的抗原蛋白 五种（B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-B、骨骨、杂交瘤细胞 ） 其中三种融合细胞。 繁殖 专一的抗体 特定的选择性培养基 读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞 可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只 分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的 单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 2.单克隆抗体的概念 单: 单个细胞 克隆: 无性繁殖 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一 特异性强的抗体 单克隆抗体的优点和应 用 优点 强， 高， 大。 应用： 作为诊断试剂：准确识别各种 物质的 细微差别，并跟 的结合，具有 、 、 、 的优点。 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗 ，可制成“ ”，也有少量用于治疗其他疾 病。 特异性灵敏度产量 抗原 一定抗原发生特异性 准确 高效 简易 快速 癌症 生物导弹 v1、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊 乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早 期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小 羊的大多数性状 ( ) A.难以预测 B.像甲 C.像乙 D.像丙 v2（2004年，全国）用动物细胞工程技术获取单 克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ） vA将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋 巴细胞 vB用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 vC用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋 巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 vD筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所 需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体 B B v3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正 确的是 （ ） v诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不 相同 所采用的原理完全相同 都能形成杂种 细胞 vA. B. C. D. v4. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴 细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤 细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） v 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 vA B vC D C A 创新应用训练 5右图为某同学根 据杂交瘤技术的方 法，设计的生产破 伤风杆菌抗体的实 验方案。据图回答 ： （1）该方案能 达到预期效果吗？ 。原因是 。 （2）图中为 过程，常用 作为诱导剂。该细 胞继承了 ，因此不仅能分泌 ，还有 本领。 （3）该方案的目的 是 。 不能 没有将抗原注入小鼠体内，无法 获得产生单一抗体的B淋巴细胞. 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞的遗传物质 特异性抗体 在体外培养条件下大量增殖 制备单克 隆抗体 作业： 1