微生物的实验室培养.ppt

一、培养基： 1.概念：人们按照微生物对营养物质的不同 需求，配制出供其生长繁殖的营养基质培养 基 3.营养构成： 各种培养基一般都含有水、碳源、氮 源和无机盐，此外还要满足微生物生长对 PH、特殊营养物质以及氧气的要求 注：自养微生物的碳源是无机碳；异 氧型微生物的碳源是有机碳，培养不同类 型的微生物，培养基的组成成分一般不同 。 2.分类： (1)按营养成分分类： 1.天然培养基： 优点：取材方便、营养丰富、种类多样、 配制方便 缺点：成分不确定，适用于大生产中发酵培养基 2.合成培养基： 优点：成分精确 缺点：配制较复杂，价格较贵 （2）按物理状态分类： 1、固体培养基：主要应用于微生物的分离与鉴定 2、液体培养基：工业上微生物的培养 （3）按功能分类： 1.选择培养基：根据某种微生物的特殊营养需 求或其对化学、物理因素的抗性而设计的培养 基 2.鉴别培养基：在培养基中加有能与某一菌的无 色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉 眼就能使该菌落与其他外形相似的它种菌落相 区分的培养基。主要应用与鉴别菌种（如：伊 红美蓝培养基） 4、配置天然培养基用的几种原材料特性： 牛肉膏：瘦牛肉加热抽提并浓缩成的膏状物。 价值：富含糖类，有机含氮类，水溶性维生素和无 机盐等。 蛋白胨：由酪素或明胶等蛋白质经酸或酶水解而成 。 价值：富含有机氮，其中可能还有多种维生素和 氮源。 琼脂：从某些海藻中加热提取的复杂糖类。 价值：配置固体培养基时常用作凝固剂，无营养价 值 二、无菌技术： （一）、区别消毒和灭菌： 1、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀 死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不 包括芽孢和孢子） 常用方法： （1）.煮沸消毒法：100摄氏度煮沸56分钟可 杀死微生物营养细胞及部分芽孢 （2）.巴氐消毒法：7075摄氏度煮30分钟或80 摄氏度煮15分钟 （主要应用于不耐高温的液体如：牛奶、啤 酒、果汁、酱油等） （3）.化学药剂消毒：（如酒精擦拭双手、喷洒 石炭酸等） （4）.紫外线消毒 2、灭菌：使用强烈理化因素杀死物体内外所有的微 生物，包括芽孢和孢子 常用方法： 1.灼烧灭菌：将各种金属用具直接在酒精灯火焰的 充分燃烧层灼烧 应用：（1）接种环、接种针等金属用具 （2）试管口或瓶口等容易被污染的部位 2.干热灭菌：干热灭菌箱，在160170摄氏度加热 、12小时 应用：玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具 3.高压蒸汽灭菌：高压灭菌锅 注：（1）使用时要待冷空气排尽，再密封 （2）灭菌时压力为100KPa，温度121摄氏度 应用：培养基灭菌 2. 在微生物培养时获得纯净培养物的关键 防止外来杂菌入侵， 无菌技术主要围绕如何避免杂菌的污染展开， 包括以下内容： （1）对实验操作的空间，操作者的衣着和手 进行清洁和消毒 （2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和 培养基等器具进行灭菌 （3）实验操作应在酒精灯火焰附近进行 （4）操作时应避免已经灭菌处理的材料用具 与周围物品相接触 注：实验后，所有用过的培养基，培养液等 都要统一进行高压蒸汽灭菌后再丢弃，否则会 造成环境污染 三、关于无菌操作： （一）平板培养基制备的一般步骤： 1.计算 2.称量： 注：牛肉膏较粘稠，可以用玻璃棒挑取，放在称 量纸上称量 3.溶化： 注：（1）将牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯， 加少量的水，加热待牛肉膏与称量纸分离后，取 出称量纸 （2）熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌，防 止琼脂糊底而导致烧杯破裂 4.灭菌： 注：（1）制作的棉塞要求即能防止杂菌感染 又要通气良好，棉塞的松紧以不留缝隙为标准 （2）培养基高压蒸汽灭菌； 培养皿干热灭菌 （3）检测：灭菌后的培养基要放在恒温箱中保温1 2天，表面无菌落生成 5、倒平板： 注：（1）培养基灭菌后，需冷却至50OC才能倒平 板。原因：温度过高，太烫，不易操作；过低，培 养基易凝固。 估测方法：可以用手触摸装有培养基的锥形瓶，感 觉温度下降到刚刚烫手时，就可以到平板了。 （2）倒平板时锥形瓶口要通过火焰。 原因：防止瓶口沾染的微生物污染培养基 。 (3)平板冷凝后要将平板倒置. 原因:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠.,将培养基倒置 ,既可以使培养基表面的水分更好地的挥发,又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染. (4)实验后,用过的培养基,培养也都要统一进行 高压蒸汽灭菌后再丢弃.否则会造成环境污染 (二) 接种方法: 微生物的接种方法中最常用的是平板划线 法和稀释涂布法，另外还有斜面接种和穿 刺接种等，各种方法虽然各有不同，但其 核心均是防止杂菌污染，保证培养物纯度 。 1、平板划线法： （）、概念：通过接种环在琼脂固体培 养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种 逐步稀释分散到培养基的表面。 （）、平板划线操作： 、接种前将接种环放在火焰上灼烧，直到烧红。 目的：避免接种环可能存在的微生物污染培养物。 、一次划线结束后，要再次灼烧接种环。 原因：杀死划线结束后接种环上残留的菌种。 、方法：从第一区域的末端开始往第二区域 内划线，切不要将最后一曲的划线与第一区相连。 原因：下一次划线时，接种环上的菌种直接来源 于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，是 每次划线时菌种数目逐渐减少，以便获得单纯的菌 落。 、平板制备完成后，要做好标记（时间、日 期、菌种等），倒置放入培养箱中培养。 2、释涂布平板法： 概念：将菌液进行一系列的梯度 稀释，然后将不同稀释度的菌液分 别涂布到琼脂固体培养基的表面。 注：如果在接种的培养基上生长的菌 落颜色、形状、大小基本一致，说明 接种操作是符合要求的； 如果培养基上出现了其他特征的 菌落说明接种中的无菌操作还没有达 到标准。 关于菌种的保存 为了保持菌