博士毕业答辩.ppt

1 甘草甜素对大鼠心肌缺血再灌 注后的保护作用及其机制研究 研究生：翟昌林 导 师：黎 莉 教授 2 研究背景 炎症反应是动脉粥样硬化的核心因素 炎症直接参与了动脉粥样斑块破裂的病理 生理学变化 炎症与心血管事件存在一定关系，所以干 预炎症反应为我们提供了冠心病治疗的 新的研究方向和途径 3 研究背景 hmgb1贯穿缺血再灌注损伤炎症反应的全过程 hmgb1可以刺激单核细胞使其粘附作用增加，分泌更 多的细胞因子和促炎介质 hmgb1可以刺激中性粒细胞增加其迁移和粘附特性 hmgb1诱导树突状细胞的成熟，增加其表面标志的表 达和炎症细胞因子的分泌 hmgb1可以上调血管内皮细胞表面icam-1和vcam- 1的表达，刺激血管内皮细胞释放tnf-和il-8 4 研究背景 5 研究背景 6 研究背景 血浆hmgb1浓度与急性冠脉综合征的冠脉狭 窄程度成正相关 clinica chmica acta, 2009，6（16）139-42 败血症时，hmgb1的集聚可以促进心脏微血 管血栓的形成 clinica chmica acta, 2006，5（29）109-16 大鼠心肌缺血再灌注后hmgb1和tnf-协同通 过促进jnk磷酸化，促进心肌细胞凋亡。 journal of thrombosis and haemostasis, 2010， 10（24）913-21 7 研究背景 8 研究背景 甘草甜素是一种甘草根部提取的活性水溶性 组分，具有抗炎特性 9 研究背景 甘草甜素可以减轻小鼠脊髓损伤后的炎症反应 ，减轻组织损伤 shock 2009，4（31）367-75 甘草甜素可以通过抑制库普弗细胞分泌 hmgb1，减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤 j pharmacol exp ther 2011,1(339) 93-8 甘草甜素可以通过抑制hmgb1，减少脑细胞 凋亡，减轻大鼠脑出血损伤 neuropharmacology 2011,4(19)975-80 10 研究背景 甘草甜素抑制hmgb1的作用是否存在于心肌 缺血再灌注中，国内外尚未见报道 甘草甜素是否在心肌缺血再灌注损伤中也同样 起到保护作用，国内外尚未见报道 11 研究假说 甘草甜素可以通过抑制hmgb1减少炎症 反应，减轻心肌缺血再灌注损伤 甘草甜素可以通过抑制心肌细胞凋亡减轻 心肌缺血再灌注损伤 12 研究目的 甘草甜素可以通过抑制hmgb1减少心肌缺血 再灌注后炎症反应 甘草甜素对心肌缺血再灌注损伤有保护作用 13 材料与方法 试验分组 假手术组：12只，模型建立时只穿线，不结扎 缺血再灌注组： 12只，结扎冠状血流30分钟,放松结扎 线后再灌注1小时，造成i/r损伤模型 甘草甜素干预组： 12只，术前7天，每天大鼠尾静脉 注射甘草甜素预处理（10 mg/kg） 甘草甜素+重组hmgb1组： 12只，术前7天，每天大 鼠尾静脉注射甘草甜素预处理（10 mg/kg）；结扎冠 脉血流30分钟后大鼠尾静脉立即给予重组hmgb1（ 100g /鼠） 14 材料与方法 ttc法检测大鼠心肌梗死情况 he染色法检测大鼠心肌病理改变 tunnel法检测大鼠心肌细胞凋亡情况 elisa法检测大鼠血浆hmgb1、tnf-浓度 western blot技术检测bax、cyt c、jnk等蛋 白表达水平 15 shamnsglgl+hmgb1 建立心肌缺血再灌注模型 ttc检测大鼠 心肌梗死的情 况 tunnel技术检 测心肌细胞凋亡 情况 western blot 技 术检测通道蛋白 表达情况 16 结 果 实验各组大鼠心肌细胞坏死情况 17 结 果 实验各组大鼠心肌病理改变 18 结 果 实验各组大鼠血浆hmgb1的浓度 19 结 果 实验各组大鼠血浆tnf-的浓度 20 结 果 实验各组大鼠血浆il-6的浓度 21 结 果 实验各组大鼠心肌细胞凋亡情况 22 结 果 western blot检测bax、cyt-c蛋白表达情况 23 结 果 western blot检测p38、jnk、erk蛋白表达情况 24 创新点 证实甘草甜素可以抑制hmgb1，减轻缺血再 灌注后的炎症反应 证实甘草甜素可以通过抑制jnk/bax通路，减 轻心肌细胞凋亡 提出甘草甜素对心肌缺血再灌注损伤的保护作 用 25 限制性 由于实验条件及实验时间的限制，免疫组化法 完善缺血心肌组织hmgb1的表达情况。 甘草甜素副作用比如电解质失衡、血管内皮损 害等尚待进一步的研究 本研究仅观察jnk等细胞通路在甘草甜素心肌 保护中的作用，其信号转导通路尚需进一步探 讨 26 结 论 甘草甜素可以通过抑制hmgb1，减轻缺血再 灌注后的炎症反应 证实甘草甜素可以通过抑制jnk/bax细胞信号 通路，减轻心肌细胞的凋亡 甘草甜素对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用 27 致 谢 z论文完成之际，首先衷心感谢我的导师黎莉教授，在导师的悉 心关怀和严格要求下，本课题得以顺利完成。导师高深的学术 造诣、渊博的知识和丰富的经验，使我收益颇丰，终身难忘 z 衷心感谢上海新华医院心内科李毅刚、张松教授以及心内科全 体医护人员在临床学习期间和课题实施过程中给予的大力帮助 z 感谢各位师兄师姐师弟师妹在本课题的实施过程和论文撰写过 程中给予的无私帮助。 z 我要特别感谢我的家人和我刚满月的女儿，感谢他们三年来无 私的支持和深切的理解，在此致以深深的谢意 z 最后衷心感谢所有帮助过我的人 28 攻读学位期间发表的学术成果 uchang-lin zhai ， yuan-yuan wang，guiping an, li li, et al. glycyrrhizin protects rat heart against ischemia-reperfusion injury th